邁瑞B(yǎng)C-6900全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀在臨床體液細(xì)胞檢測中的應(yīng)用

壽爽，譚煥騰，金曉娟，成軍，孫長貴

(解放軍第一一七醫(yī)院檢驗(yàn)科，浙江 杭州310013)

傳統(tǒng)胸腹水、腦脊液等體液標(biāo)本的細(xì)胞學(xué)檢查對臨床相關(guān)疾病的診斷、治療有較重要的意義。目前，其檢測主要依賴顯微鏡下手工計(jì)數(shù)和分類(手工法)，并作為金標(biāo)準(zhǔn)；但操作復(fù)雜，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，而且誤差大、重復(fù)性差，難以標(biāo)準(zhǔn)化[1]。隨著自動(dòng)化檢測技術(shù)的發(fā)展，一些新型號(hào)的血細(xì)胞、尿沉渣分析儀可以對體液標(biāo)本進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類[2-6]。我院引進(jìn)了邁瑞最新型的BC-6900全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀，它增加了體液分析模式可對體液細(xì)胞進(jìn)行自動(dòng)化檢測，但其檢測結(jié)果是否準(zhǔn)確可靠，與手工法一致性如何，需要進(jìn)行驗(yàn)證。本研究用該儀器對104份臨床體液標(biāo)本進(jìn)行細(xì)胞學(xué)檢測 (儀器法)，并與手工法檢測結(jié)果作統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，以探討邁瑞B(yǎng)C-6900全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀在臨床體液細(xì)胞檢測中的應(yīng)用價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本 隨機(jī)收集2014年5月至2015年2月住院患者的體液標(biāo)本共104例 (胸水41例，腹水

33例，腦脊液23例，關(guān)節(jié)液7例)，其中血性標(biāo)本

13例。所有標(biāo)本收到后2h內(nèi)檢測完畢。

1.2 儀器與試劑 邁瑞B(yǎng)C-6900全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀及配套試劑；日本奧林帕斯BX-53顯微鏡；標(biāo)準(zhǔn)牛鮑氏計(jì)數(shù)板；珠海貝索生物有限公司的瑞-姬氏染色試劑。

1.3 方法

1.3.1 儀器法 先將邁瑞B(yǎng)C-6900全自動(dòng)血細(xì)胞分析進(jìn)行性能評價(jià)[7，8]，性能穩(wěn)定結(jié)果可靠前提下，按照說明書進(jìn)行體液標(biāo)本的檢測。每份體液標(biāo)本在該儀器上用體液模式重復(fù)測定2次，記錄紅細(xì)胞數(shù)(RBC-BF)、有核細(xì)胞數(shù)(TC-BF)及分類結(jié)果并計(jì)算均數(shù)，同時(shí)觀察散點(diǎn)圖，必要的記錄高熒光細(xì)胞比率。

1.3.2 手工法 同一份體液標(biāo)本，按照《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》在顯微鏡下用標(biāo)準(zhǔn)牛鮑氏計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)紅細(xì)胞、有核細(xì)胞數(shù)[1]，計(jì)數(shù)2次取均值。然后將對應(yīng)的體液標(biāo)本1500r/min離心5min，取沉渣制片3張：2張進(jìn)行瑞氏染色，由兩名經(jīng)驗(yàn)豐富的主管技師以上技術(shù)人員在雙盲情況下進(jìn)行有核細(xì)胞分類，1張備用。每人在顯微鏡下將每張涂片計(jì)數(shù)200個(gè)有核細(xì)胞并分類2次，計(jì)算兩張涂片單個(gè)核細(xì)胞(MN)、多個(gè)核細(xì)胞(PMN)百分比均值。

把儀器法與手工法計(jì)數(shù)、分類的相關(guān)數(shù)據(jù)依據(jù)一定的細(xì)胞數(shù)進(jìn)行分組：有核細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類以有核細(xì)胞總數(shù)是否達(dá)100×106/L為界分組；紅細(xì)胞計(jì)數(shù)以血性、非血性分組。

1.3.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用Excel和SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)軟件，記錄各組儀器法與手工法的紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、有核細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類百分比結(jié)果，用中位數(shù)(分布范圍)表示，以手工法為參考方法，把兩種方法進(jìn)行相關(guān)分析。將兩種方法檢測結(jié)果的差值做Blant-Altman一致性檢驗(yàn)分析，并作圖。圖中實(shí)線最上、下兩條(有數(shù)值表明的)分別表示兩種檢測方法差值95%一致性界限，中間實(shí)線表示差值的均值，虛線表示差值為“0”[9，10]。

2 結(jié)果

2.1 BC-6900儀器法和顯微鏡下手工法計(jì)數(shù)及分類比較的相關(guān)性結(jié)果 見表1。

2.2 Blant-Altman一致性檢驗(yàn) 用儀器法和手工法對紅細(xì)胞總數(shù)測定值進(jìn)行Blant-Altman一致性檢驗(yàn)，結(jié)果見圖1、圖2。

3 討論

近年來，許多儀器結(jié)合了電阻抗、激光、流式細(xì)胞術(shù)以及特殊熒光染色等原理，實(shí)現(xiàn)了臨床體液細(xì)胞的自動(dòng)化檢測[2-6]。邁瑞B(yǎng)C-6900血細(xì)胞分析儀采用激光流式細(xì)胞術(shù)結(jié)合熒光染色的技術(shù)手段，對體液中的有核細(xì)胞進(jìn)行識(shí)別和檢測，采用鞘流阻抗通道檢測體液中的紅細(xì)胞，專用的體液模式使體液細(xì)胞的檢測實(shí)現(xiàn)了自動(dòng)化。該儀器體液模式除了報(bào)告7項(xiàng)常規(guī)參數(shù)，還可以提供高熒光細(xì)胞比率、白細(xì)胞計(jì)數(shù)等7項(xiàng)研究參數(shù)，并給出有核細(xì)胞分類散點(diǎn)圖，可較準(zhǔn)確、快速得到結(jié)果。

為了比較邁瑞B(yǎng)C-6900全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀體液細(xì)胞檢測結(jié)果與手工法的一致性，我們對兩種方法的檢測結(jié)果進(jìn)行了相關(guān)性分析。表1結(jié)果顯示，對于體液紅細(xì)胞計(jì)數(shù)，無論是血性還是非血性標(biāo)本，兩種方法檢測結(jié)果的相關(guān)性較好(r＞0.95)；當(dāng)TC-BF>100×106時(shí)，有核細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類的相關(guān)性較好(r＞0.9)。這說明對于上述標(biāo)本，兩種方法檢測結(jié)果一致性較好。而當(dāng)TC-BF<100×106時(shí)，兩種方法的有核細(xì)胞計(jì)數(shù)、單個(gè)核細(xì)胞和多個(gè)核細(xì)胞分類百分比的相關(guān)性較差 (r分別為0.713，0.663，0.751)。

表1 儀器法與手工法檢測結(jié)果的相關(guān)性

圖1非血性標(biāo)本紅細(xì)胞總數(shù)的Blant-Altman圖

圖2血性標(biāo)本紅細(xì)胞總數(shù)的Blant-Altman圖

鑒于不同的體液標(biāo)本由于病因不同，細(xì)胞計(jì)數(shù)差異可達(dá)上萬倍，相關(guān)性分析會(huì)受個(gè)別數(shù)據(jù)的影響。為更好地衡量兩種檢測方法的一致性，本研究又采用了Blant-Altman檢驗(yàn)分析。其要求兩種方法檢測結(jié)果的差值至少95%的點(diǎn)均落于95%一致性區(qū)間內(nèi)，并且越接近差值為“0”虛線，說明兩種方法檢測結(jié)果的一致性越好[9，10]。圖1~2顯示：兩種方法非血性標(biāo)本紅細(xì)胞計(jì)數(shù)差值對應(yīng)的點(diǎn)比血性標(biāo)本更為集中，更多的點(diǎn)接近零值線，說明兩種方法對非血性標(biāo)本紅細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測結(jié)果的一致性比血性標(biāo)本更好。這是由于血性標(biāo)本紅細(xì)胞總數(shù)太多，手工計(jì)數(shù)時(shí)稀釋倍數(shù)過大，操作的重復(fù)性差、誤差大造成兩種方法測定結(jié)果的差值過大。但兩者的相關(guān)系數(shù)反而是血性標(biāo)本的更好，這是由于血性標(biāo)本中個(gè)別標(biāo)本細(xì)胞計(jì)數(shù)值太大，導(dǎo)致較大的偏差影響了相關(guān)系數(shù)[11-13]。同理作圖，兩種方法低值有核細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類的測定差值所對應(yīng)的點(diǎn)比高值更為分散，說明TC-BF>100×106時(shí)，有核細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類兩種方法的檢測結(jié)果更一致，與相關(guān)分析的結(jié)果一致。當(dāng)TC-BF<100×106時(shí)，有核細(xì)胞的計(jì)數(shù)和分類兩種方法的檢測結(jié)果差值較大，這是由于細(xì)胞數(shù)太少時(shí)，存在泊松分布現(xiàn)象，計(jì)數(shù)和分類的偶然誤差非常大，造成結(jié)果重復(fù)性差，一致性低，而儀器的分類結(jié)果是否可靠值得探討。

在本研究中有7例標(biāo)本檢出了惡性腫瘤細(xì)胞。這類標(biāo)本儀器均顯示高熒光細(xì)胞比率增高，有核細(xì)胞與白細(xì)胞總數(shù)差值較大，散點(diǎn)圖異常等特點(diǎn)，這些信息對腫瘤細(xì)胞的篩查有提示作用。因?yàn)樵搩x器是通過檢測細(xì)胞內(nèi)核酸含量的多少對細(xì)胞進(jìn)行分類的，腫瘤細(xì)胞不僅核酸含量高，而且細(xì)胞內(nèi)容物復(fù)雜，在散點(diǎn)圖的某一區(qū)域會(huì)出現(xiàn)密集現(xiàn)象[14]。其原理和散點(diǎn)圖特點(diǎn)基本與Sysmex XE-5000血細(xì)胞分析儀相同，也有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道高熒光細(xì)胞比率越高，提示檢出腫瘤等異常細(xì)胞的可能也越高[2，15]。

綜上研究，邁瑞B(yǎng)C-6900血細(xì)胞分析儀法和顯微鏡下手工法檢測臨床體液細(xì)胞具有較好的一致性，特別是血性、有核細(xì)胞數(shù)多的標(biāo)本，建議采用儀器法計(jì)數(shù)誤差會(huì)小一些，可代替手工法，大大提高體液標(biāo)本檢測的速度，減少工作量，具有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值。對于紅細(xì)胞、有核細(xì)胞數(shù)都較少的標(biāo)本，應(yīng)結(jié)合顯微鏡下手工法進(jìn)行修正，一般建議不需要報(bào)分類結(jié)果；血性但有核細(xì)胞數(shù)較少時(shí)應(yīng)溶解紅細(xì)胞后再手工法計(jì)數(shù)。當(dāng)高熒光細(xì)胞比率增高、有核細(xì)胞與白細(xì)胞總數(shù)差值較大、散點(diǎn)圖異常時(shí)，標(biāo)本必須涂片進(jìn)行分類，特別注意有無腫瘤細(xì)胞，并與間皮細(xì)胞、組織細(xì)胞相鑒別。

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