原發(fā)及轉(zhuǎn)移前列腺腺癌組織TMSG-1蛋白表達(dá)及意義

李敬敬，于文娟，張麗，項(xiàng)鋒鋼,

(青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院,山東 青島 266021 1 病理學(xué)教研室； 2 附屬醫(yī)院病理科)

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原發(fā)及轉(zhuǎn)移前列腺腺癌組織TMSG-1蛋白表達(dá)及意義

李敬敬1，于文娟2，張麗1，項(xiàng)鋒鋼1,2

(青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院,山東 青島 266021 1 病理學(xué)教研室； 2 附屬醫(yī)院病理科)

目的 檢測腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因1(TMSG-1)蛋白在前列腺增生、原發(fā)性前列腺腺癌及轉(zhuǎn)移性前列腺腺癌組織的表達(dá)，探討其在腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移中的作用及其與前列腺癌病人預(yù)后的關(guān)系。方法 采用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測TMSG-1蛋白在22例前列腺增生、38例原發(fā)性前列腺腺癌及18例轉(zhuǎn)移性前列腺腺癌組織中的表達(dá)。結(jié)果TMSG-1蛋白在前列腺增生(20/22)、原發(fā)性前列腺腺癌(34/38)及轉(zhuǎn)移性前列腺腺癌(10/18)組織中均有表達(dá)，原發(fā)性前列腺腺癌組織中TMSG-1陽性表達(dá)率明顯高于轉(zhuǎn)移性前列腺腺癌組織(χ2=6.707，P<0.05)；前列腺增生組織中TMSG-1陽性表達(dá)率高于轉(zhuǎn)移性前列腺腺癌組織(χ2=4.848，P<0.05)；前列腺增生組織中TMSG-1陽性表達(dá)率與原發(fā)性前列腺腺癌組織無差異(χ2=0.003，P>0.05)。原發(fā)性前列腺腺癌組織TMSG-1蛋白的表達(dá)與神經(jīng)侵犯有關(guān)(P=0.034 7)，而與Gleason評分、鄰近組織侵犯及病人年齡均無關(guān)(P=0.306 8、0.051 2、0.123 8)。Kaplan-Meier生存分析結(jié)果表明，TMSG-1蛋白陽性組的生存時(shí)間和生存率明顯高于TMSG-1蛋白陰性組(χ2=5.153，P<0.05)。結(jié)論 TMSG-1蛋白在原發(fā)性前列腺腺癌組織的表達(dá)明顯高于轉(zhuǎn)移性前列腺腺癌，TMSG-1蛋白可能與原發(fā)性前列腺腺癌的轉(zhuǎn)移過程有關(guān)，其表達(dá)水平的高低可能作為一個(gè)預(yù)測前列腺腺癌轉(zhuǎn)移潛能大小的檢測指標(biāo)。

前列腺腺癌；TMSG-1；腫瘤轉(zhuǎn)移；抑制基因；預(yù)后

前列腺腺癌是男性生殖系最常見的惡性腫瘤。在我國其發(fā)病率居男性惡性腫瘤第3位。由于缺乏有效的早期診斷的手段，我國大多數(shù)前列腺腺癌病人確診時(shí)已屬中晚期，特別是前列腺腺癌轉(zhuǎn)移嚴(yán)重威脅男性病人的健康和生命。因此，預(yù)測前列腺腺癌是否發(fā)生轉(zhuǎn)移，并采用相應(yīng)的治療手段顯得尤為重要。腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因1(TMSG-1)是近年來新發(fā)現(xiàn)的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因，已被證實(shí)在乳癌[1]、結(jié)直腸癌[2]、宮頸癌[3]及肝癌[4]組織中表達(dá)，與腫瘤浸潤、轉(zhuǎn)移相關(guān)。本研究采用免疫組織化學(xué)方法，檢測TMSG-1蛋白在原發(fā)性及轉(zhuǎn)移性前列腺腺癌組織表達(dá)，旨在探討TMSG-1表達(dá)是否可作為預(yù)測前列腺腺癌轉(zhuǎn)移的參考指標(biāo)之一。

1 材料與方法

1.1 材料來源

收集青島大學(xué)附屬醫(yī)院病理科2009年1月—2014年1月存檔蠟塊，其中經(jīng)手術(shù)切除的原發(fā)性前列腺腺癌38例，年齡52～82歲，中位年齡73歲。前列腺腺癌骨轉(zhuǎn)移18例，年齡39～83歲，中位年齡65歲。以上病例均經(jīng)蘇木精-伊紅(HE)染色予以確診。另選取前列腺增生組織22例作為對照，病人年齡36～67歲，中位年齡48歲。對原發(fā)性及轉(zhuǎn)移性前列腺腺癌病人自明確診斷后至2014年1月全部進(jìn)行隨訪，其中原發(fā)性前列腺腺癌病人存活26例，死亡4例，失訪8例；轉(zhuǎn)移性前列腺腺癌病人存活5例，死亡3例，失訪10例。

1.2 主要試劑及方法

蠟塊經(jīng)3 μm厚連續(xù)切片后行免疫組織化學(xué)方法染色(PV-9000二步法)。組織切片經(jīng)脫蠟、水化后，檸檬酸鹽緩沖液進(jìn)行抗原修復(fù)15 min，體積分?jǐn)?shù)0.03的H2O2滅活內(nèi)源性過氧化物酶10 min。加入Ⅰ抗(鼠抗人TMSG-1單克隆抗體，美國Sigma公司產(chǎn)品，工作濃度1∶500)，置37 ℃水浴箱孵育1 h。加入通用型二抗(羊抗兔-鼠)，置37 ℃溫箱孵育20 min。DAB顯色、蘇木精復(fù)染、5 g/L鹽酸乙醇分化及10 g/L氨水返藍(lán)。常規(guī)脫水、透明、封片，光鏡下觀察。每批實(shí)驗(yàn)用已知陽性的乳癌組織作陽性對照，PBS代替Ⅰ抗作為陰性對照。

1.3 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)

TMSG-1陽性主要是前列腺腺癌細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕褐色顆粒，極少數(shù)病例可出現(xiàn)細(xì)胞核著色。根據(jù)徐曉艷等[5]報(bào)道的判斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評分，分別在高倍鏡下隨機(jī)選擇5個(gè)視野計(jì)數(shù)，結(jié)合陽性細(xì)胞染色強(qiáng)弱及陽性細(xì)胞百分比兩個(gè)方面計(jì)算TMSG-1的免疫組織化學(xué)染色評分。染色強(qiáng)度評分標(biāo)準(zhǔn)：棕褐色3分，棕黃色2分，淡黃色1分，無著色0分。每張切片隨機(jī)選擇5個(gè)高倍視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，計(jì)算陽性細(xì)胞百分比(陽性細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù))×100%。陽性細(xì)胞所占比例評分標(biāo)準(zhǔn)：陽性細(xì)胞數(shù)>75%為4分；51%～75%為3分；11%～50%為2分；1%～10%為1分；陰性位0分。將上述兩種得分相乘得到綜合得分：0～2分為陰性表達(dá)(-)，3分為(+)，4分為()，5分以上為()。(+～)均為陽性表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，計(jì)數(shù)資料比較用χ2檢驗(yàn)及Fisher確切概率法，生存分析用Kaplan-Meier方法。以P<0.05為差異有顯著性。

2 結(jié) 果

2.1 TMSG-1蛋白在前列腺增生、原發(fā)性及轉(zhuǎn)移性前列腺腺癌組織中的表達(dá)

TMSG-1蛋白在前列腺增生、原發(fā)性及轉(zhuǎn)移性前列腺腺癌組織中均有表達(dá)，主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，部分原發(fā)性前列腺腺癌組織中也可見少數(shù)細(xì)胞核著染(圖1)。原發(fā)性前列腺腺癌組織中TMSG-1陽性表達(dá)率(34/38)明顯高于轉(zhuǎn)移性前列腺腺癌組織(10/18)(χ2=6.707，P<0.05)，前列腺增生組織中TMSG-1陽性表達(dá)率(20/22)高于轉(zhuǎn)移性前列腺腺癌組織(10/18)(χ2=4.848，P<0.05)，前列腺增生組織中TMSG-1陽性表達(dá)率與原發(fā)性前列腺腺癌組織無差異(χ2=0.003，P>0.05)。見表1。

2.2 TMSG-1蛋白表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

TMSG-1蛋白在原發(fā)性前列腺腺癌組織中的表達(dá)與神經(jīng)侵犯有關(guān)(P=0.034 7)，而與Gleason評分、鄰近組織侵犯及病人的年齡均無關(guān)(P=0.306 8、0.051 2、0.123 8)。見表2。

2.3 TMSG-1蛋白表達(dá)與病人術(shù)后生存期的關(guān)系

Kaplan-Meier生存分析結(jié)果表明，原發(fā)性和轉(zhuǎn)移性前列腺腺癌組織中，TMSG-1蛋白陽性組生存時(shí)間和生存率明顯高于TMSG-1蛋白陰性組(χ2=5.153，P<0.05)。見圖2。

3 討 論

前列腺腺癌是威脅老年男性的主要惡性腫瘤。在我國，隨著人均壽命延長、膳食結(jié)構(gòu)改變和診斷技術(shù)提高，前列腺腺癌發(fā)病率躍居第3位，病人死亡率也隨著不斷升高，且大部分病人因發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移而死亡[6-7]。由于缺乏有效的早期診斷手段，前列腺腺癌病人確診時(shí)已屬中晚期。因此，預(yù)測前列腺癌是否發(fā)生轉(zhuǎn)移，并采用相應(yīng)的治療手段顯得尤為重要。

TMSG-1蛋白是一種抑癌基因，目前有許多研究探討了其在采用體外培養(yǎng)細(xì)胞及人體組織中的表達(dá)和臨床病理意義。TMSG-1蛋白在前列腺腺癌低轉(zhuǎn)移細(xì)胞亞系中的表達(dá)明顯高于高轉(zhuǎn)移細(xì)胞亞系[5]，TMSG-1蛋白可以抑制乳癌、肺癌、肝癌等多種腫瘤細(xì)胞系的侵襲及轉(zhuǎn)移能力，與腫瘤細(xì)胞侵襲浸潤密切相關(guān)[8-10]。在結(jié)直腸癌中TMSG-1蛋白表達(dá)明顯低于正常結(jié)直腸組織，其表達(dá)與腫瘤浸潤程度、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移呈明顯負(fù)相關(guān)[2]；在胃癌組織中TMSG-1蛋白的表達(dá)較胃良性組織明顯下降，TMSG-1蛋白的表達(dá)與腫瘤的增殖浸潤明顯相關(guān)[11]。由此可見，TMSG-1蛋白與腫瘤的浸潤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。然而，TMSG-1蛋白是否與前列腺腺癌轉(zhuǎn)移有關(guān)尚未見相關(guān)報(bào)道。

我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，TMSG-1蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)中，其陽性表達(dá)率在原發(fā)性前列腺腺癌組織及前列腺增生組織中明顯高于轉(zhuǎn)移性前列腺腺癌組織。結(jié)果提示TMSG-1蛋白表達(dá)減少有利于腫瘤轉(zhuǎn)移，TMSG-1蛋白可能起到抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的作用。另外，TMSG-1蛋白在原發(fā)性前列腺腺癌組織的表達(dá)與神經(jīng)侵犯密切相關(guān)，盡管與鄰近組織侵犯無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但接近統(tǒng)計(jì)值，提示TMSG-1蛋白可能具有抑制腫瘤發(fā)生侵襲的作用。此外，Kaplan-Meier生存分析結(jié)果表明，TMSG-1蛋白陽性組生存時(shí)間和生存率明顯高于TMSG-1蛋白陰性組，提示TMSG-1可能與腫瘤的預(yù)后有關(guān)。本研究結(jié)果提示，TMSG-1蛋白的低表達(dá)可能是一個(gè)預(yù)測前列腺腺癌轉(zhuǎn)移的客觀參考指標(biāo)。

A：在前列腺增生組織中呈陽性表達(dá)；B：在轉(zhuǎn)移性前列腺腺癌組織中呈陰性表達(dá)；C：在原發(fā)性前列腺腺癌細(xì)胞核中呈陽性表達(dá)，箭頭示細(xì)胞核表達(dá)；D：在原發(fā)性前列腺腺癌組織中呈陽性表達(dá)。PV-9000染色，200倍。

表1 TMSG-1蛋白在不同前列腺病變組織中的表達(dá)

表2 TMSG-1表達(dá)與原發(fā)性前列腺腺癌病人臨床病理特征關(guān)系(例)

圖2 TMSG-1蛋白的表達(dá)與前列腺腺癌病人的生存分析

另外，本研究結(jié)果還顯示，少數(shù)細(xì)胞核TMSG-1蛋白呈陽性表達(dá)，尤其見于原發(fā)性前列腺腺癌組織中，這與徐曉艷等[12]的研究結(jié)果一致，即與前列腺腺癌細(xì)胞系中可見少量TMSG-1核表達(dá)相一致。此種現(xiàn)象可能與TMSG-1的homeodomain結(jié)構(gòu)域有關(guān)。有關(guān)研究的結(jié)果顯示，含有homeodomain結(jié)構(gòu)域的基因?qū)儆谡{(diào)節(jié)基因家族，失衡時(shí)可致腫瘤發(fā)生異?；蛟煅到y(tǒng)發(fā)生異常，其調(diào)控細(xì)胞生長的作用可能與腫瘤的轉(zhuǎn)移有關(guān)[13-14]。另有研究表明，含有homeodomain結(jié)構(gòu)域的TMSG-1截?cái)囿w能夠進(jìn)入細(xì)胞核發(fā)揮轉(zhuǎn)錄因子的作用，推測與其腫瘤轉(zhuǎn)移抑制作用有關(guān)[15]。

徐曉艷等[5]研究結(jié)果表明，TMSG-1在前列腺腺癌組織中的表達(dá)明顯低于前列腺增生組織。本研究結(jié)果顯示，前列腺增生與原發(fā)性前列腺腺癌組織的TMSG-1蛋白陽性表達(dá)率無明顯差異，產(chǎn)生的主要原因可能與選擇病例的數(shù)量差異等有關(guān)，有待今后積累病例進(jìn)行大樣本實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果還表明，TMSG-1蛋白在前列腺腺癌組織中的表達(dá)與Gleason評分及病人年齡無確切相關(guān)性，劉琳等[1]在對乳癌研究中也得出TMSG-1蛋白的表達(dá)與腫瘤病理分級和病人年齡無明顯相關(guān)性的結(jié)論。關(guān)于TMSG-1蛋白與腫瘤分化的確切關(guān)系，目前尚無定論，有待進(jìn)一步深入研究。

總之，本研究結(jié)果表明，TMSG-1蛋白表達(dá)的高低與前列腺腺癌浸潤轉(zhuǎn)移有關(guān)，其表達(dá)水平的高低可能作為預(yù)測前列腺腺癌轉(zhuǎn)移潛能的一個(gè)參考指標(biāo)。進(jìn)一步的研究需探討TMSG-1能否作為前列腺腺癌的治療靶點(diǎn)。

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(本文編輯 牛兆山 于國藝)

THE EXPRESSION AND SIGNIFICANCE OF TMSG-1 IN PRIMARY AND METASTATIC PROSTATE ADENOCARCINOMA TISSUES

LIJingjing,YUWenjuan,ZHANGLi,XIANGFenggang

(Department of Pathology, Qingdao University Medical College, Qingdao 266021 China)

ObjectiveTo investigate the expression of tumor metastasis suppressor gene 1 (TMSG-1) in benign prostatic hyperplasia (BPH), primary prostate adenocarcinoma (PPAC) and metastatic prostate adenocarcinoma (MPAC) and explore its effect on tumor infiltration and metastasis, as well as its association with the patient’s prognosis.MethodsThe expression of TMSG-1 was detected immunohistochemically in 22 cases of BPH,38 of PPAC, and 18 of MPAC.ResultsTMSG-1 expression was observed in BPH (20/22), PPAC (34/38) and MPAC (10/18), the expression of TMSG-1 was higher in PPAC versus the MPAC (χ2=6.707,P<0.05), and that in BPH was higher than that in MPAC (χ2=4.848,P<0.05); but no difference between BPH and PPAC (χ2=0.003,P>0.05). TMSG-l expression in PPAC was correlated with nerval invasion (P=0.034 7), but not with Gleason grade, adjacent tissue invasion and patient’s age (P=0.306 8, 0.051 2, 0.123 8). Kaplan-Meier survival analysis showed that the survival time of patients in TMSG-1-positive group was longer than those in TMSG-1-negative group (χ2=5.153,P<0.05).ConclusionThe expression of TMSG-1 in primary prostate adenocarcinoma is much higher than that in metastatic one. TMSG-1 protein may be associated with the metastasis of primary prostate adenocarcinoma. The level of TMSG-1 expression may be used as a helpful marker for predicting the potentiality of metastasis of this malignancy.

prostate adenocarcinoma; TMSG-1; metastasis; suppressor gene; prognosis.

2015-04-21;

2015-06-03

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81201654)

李敬敬(1988-)，女，碩士研究生。

項(xiàng)鋒鋼(1964-)，男，碩士，教授，碩士生導(dǎo)師。E-mail:xiangfenggang@163.com

R730.2

A

1008-0341(2015)04-0395-04