雞肉粉完全替代魚粉飼料中補(bǔ)充晶體氨基酸對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長性能、體成分、血漿及肌肉游離氨基酸含量的影響

林建偉張春曉，2孫云章，2翟少偉，2宋 凱，2葉繼丹，2?（.廈門市飼料檢測(cè)與安全評(píng)價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廈門3602；2.農(nóng)業(yè)部東海海水健康養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廈門3602）

雞肉粉完全替代魚粉飼料中補(bǔ)充晶體氨基酸對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長性能、體成分、血漿及肌肉游離氨基酸含量的影響

林建偉1張春曉1，2孫云章1，2翟少偉1，2宋 凱1，2葉繼丹1，2?
（1.廈門市飼料檢測(cè)與安全評(píng)價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廈門361021；2.農(nóng)業(yè)部東海海水健康養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廈門361021）

摘 要：本試驗(yàn)旨在探討雞肉粉完全替代魚粉時(shí)飼料氨基酸的平衡性與對(duì)蝦生長性能、體成分、血漿及肌肉游離氨基酸含量的關(guān)系。試驗(yàn)設(shè)2個(gè)飼料蛋白質(zhì)水平，分別為40%和31%，在每個(gè)蛋白質(zhì)水平下分設(shè)魚粉組（基礎(chǔ)飼料）、雞肉粉組（雞肉粉完全替代基礎(chǔ)飼料中魚粉）、雞肉粉＋必需氨基酸（EAA）組（雞肉粉完全替代基礎(chǔ)飼料中魚粉并補(bǔ)充晶體EAA）、雞肉粉＋EAA＋非必需氨基酸（NEAA）（雞肉粉完全替代基礎(chǔ)飼料中魚粉并補(bǔ)充晶體EAA＋NEAA）。將平均體重為（0.37±0.01）g的凡納濱對(duì)蝦隨機(jī)分配到32個(gè)圓桶（150 L）中，每桶30尾，每4個(gè)桶為1組，飼喂1種飼料，每天飽食投喂3次，進(jìn)行為期56 d的飼養(yǎng)試驗(yàn)。結(jié)果表明：在每一飼料蛋白質(zhì)水平下，雞肉粉＋EAA組、雞肉粉＋EAA＋NEAA組對(duì)蝦的增重率、特定生長率均比雞肉粉組有顯著提高（P＜0.05），但仍顯著低于魚粉組（P＜0.05），飼料系數(shù)的變化正好與之相反；雞肉粉＋EAA＋NEAA組對(duì)蝦的增重率、特定生長率和飼料系數(shù)與雞肉粉＋EAA組無顯著差異（P＞0.05）。飼喂40%蛋白質(zhì)水平飼料較飼喂31%蛋白質(zhì)飼料顯著提高對(duì)蝦的增重率和蝦體粗蛋白質(zhì)含量（P＜0.05），但顯著降低蝦體粗脂肪含量（P＜0.05）。凡納濱對(duì)蝦血漿游離EAA／NEAA與飼料EAA／NEAA呈正線性關(guān)系，且血漿游離賴氨酸和苯丙氨酸含量均與特定生長率呈正相關(guān)。雞肉粉組血漿游離蛋氨酸、苯丙氨酸和賴氨酸含量顯著低于魚粉組（P＜0.05），各組對(duì)蝦肌肉游離氨基酸含量無顯著差異（P＞0.05）。由此得出，在雞肉粉完全替代魚粉的飼料中補(bǔ)充晶體EAA可促進(jìn)凡納濱對(duì)蝦的生長，但進(jìn)一步補(bǔ)充晶體NEAA并沒有進(jìn)一步改善其生長性能。

關(guān)鍵詞：凡納濱對(duì)蝦；雞肉粉；氨基酸平衡；生長性能；游離氨基酸

魚粉不僅必需氨基酸（essential amino acids，EAA）含量高，氨基酸平衡性好，且生物學(xué)價(jià)值高，是水產(chǎn)動(dòng)物最為重要的蛋白質(zhì)源，在大多數(shù)水產(chǎn)養(yǎng)殖種類的飼料配方中不可或缺。但魚粉資源的稀缺性使得人們一直在不斷努力地為其尋找適宜的替代品，魚粉替代品及其技術(shù)已經(jīng)成為當(dāng)前水產(chǎn)飼料領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)之一。雞肉粉其營養(yǎng)價(jià)值較高，并有一定產(chǎn)量，是潛在的魚粉替代品［1－7］。研究表明，凡納濱對(duì)蝦飼料中雞肉粉替代魚粉的最大比例為80%［1－2］。飼料蛋白質(zhì)的質(zhì)與量直接影響動(dòng)物生長，而其質(zhì)量的高低又反映在氨基酸平衡性上。Ye等［8］嘗試了通過調(diào)配飼料中賴氨酸和蛋氨酸平衡來降低凡納濱對(duì)蝦飼料中魚粉比例的試驗(yàn)，獲得了較好的結(jié)果。由于雞肉粉蛋白質(zhì)的質(zhì)量不僅與EAA的豐缺程度和平衡性有關(guān)，甚至還可能受到非必需氨基酸（non?essential ami?no acids，NEAA）的影響。在以往的魚粉替代研究中，雞肉粉要么按一定比例直接替代魚粉［1－2］，要么只考慮通過補(bǔ)充個(gè)別EAA來彌補(bǔ)替代魚粉后的EAA的不足［9－10］，而較少考慮用雞肉粉部分或全部替代魚粉后飼料中所有氨基酸的平衡性問題。因此，本試驗(yàn)設(shè)計(jì)了2個(gè)不同蛋白質(zhì)水平的參考飼料配方，并以參考配方的EAA和NEAA含量為標(biāo)準(zhǔn)，設(shè)計(jì)雞肉粉完全替代魚粉后飼料氨基酸含量不同的飼料配方，探討飼料氨基酸的平衡性與凡納濱對(duì)蝦生長性能、體成分、血漿及肌肉游離氨基酸含量間的關(guān)系，為合理設(shè)計(jì)凡納濱對(duì)蝦高效、低魚粉飼料配方提供理論依據(jù)。

1　材料與方法

1.1 試驗(yàn)飼料

本試驗(yàn)參考Ye等［11］的試驗(yàn)設(shè)計(jì)，設(shè)2個(gè)飼料蛋白質(zhì)水平（40%和31%），每個(gè)蛋白質(zhì)水平分設(shè)魚粉組（對(duì)照組）、雞肉粉組（雞肉粉完全替代魚粉組）、雞肉粉＋EAA組、雞肉粉＋EAA＋NEAA組。在40%飼料蛋白質(zhì)水平下，試驗(yàn)飼料分別記為D1、D2、D3、D4，其中D2不添加晶體氨基酸，D3補(bǔ)足相對(duì)于D1缺乏的EAA，D4補(bǔ)足相對(duì)于D1缺乏的EAA和NEAA；在31%飼料蛋白質(zhì)水平下，試驗(yàn)飼料分別記為D5、D6、D7、D8，其中D6不添加晶體氨基酸，D7補(bǔ)足相對(duì)于D5缺乏的EAA，D8補(bǔ)足相對(duì)于D5缺乏的EAA和NEAA。試驗(yàn)飼料組成及營養(yǎng)水平見表1。

將所有原料用粉碎機(jī)粉碎后過80目篩網(wǎng)，然后制成直徑為1.5 mm的硬顆粒飼料，自然風(fēng)干后于－20℃冰箱保存?zhèn)溆?。試?yàn)飼料氨基酸組成和凡納濱對(duì)蝦必需氨基酸建議需要量列于表3。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

從廈門當(dāng)?shù)仞B(yǎng)殖場(chǎng)購進(jìn)健康凡納濱對(duì)蝦仔蝦，放入2個(gè)1 000 L的安有循環(huán)水裝置的圓桶內(nèi)培育，1個(gè)月后仔蝦規(guī)格達(dá)到0.3 g左右，選取較大規(guī)格的蝦苗［平均體重（0.37±0.01）g］，隨機(jī)分配到32個(gè)安有循環(huán)水裝置的圓桶（150 L）中，每桶30尾，每4桶對(duì)蝦飼喂1種試驗(yàn)飼料。

表1　試驗(yàn)飼料組成及營養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets（air?dry basis）　g／kg

續(xù)表1

表2　晶體氨基酸混合物組成（風(fēng)干基礎(chǔ)）Table 2 Composition of crystalline amino acid mix（air?dry basis）　g／kg

1.3 飼養(yǎng)管理

養(yǎng)殖過程中每天分別在08：00、14：00、20：00定時(shí)投喂飼料，每次投喂2～3輪至飽食，第1輪少量投喂，確保蝦能夠快速攝食無殘餌，1 h后進(jìn)行第2輪投喂，30 min后吸去殘料和糞便，記下殘料量，并換水。每天換水量約為1／3。養(yǎng)殖試驗(yàn)持續(xù)56 d。養(yǎng)殖期間水溫25～28℃，鹽度26‰～28‰，氨氮含量低于0.2 mg／L，溶氧量4.7～5.3 mg／L，pH 8.0～8.2。

表3　試驗(yàn)飼料氨基酸組成Table3Aminoacidcompositionofexperimentaldiets1）%

1.4 樣品采集

養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束后，對(duì)每桶蝦稱重，再將蝦放回圓桶內(nèi)穩(wěn)定24 h。在飼喂后10 h，每桶取10尾蝦，用經(jīng)預(yù)冷抗凝劑（50 mmol／L檸檬酸鈉＋10 mmol／L EDTA·Na2配制［15］）潤濕后的1 mL注射器，從心臟取血，血樣以4 000 r／min離心10 min，收集血漿，血漿樣本保存在－80℃冰箱中待測(cè)。抽完血后，剝離蝦殼留取肌肉，保存在－20℃冰箱中。

1.5 樣品測(cè)定

飼料和全蝦樣品中水分含量采用105℃烘箱干燥法測(cè)定，粗蛋白質(zhì)含量采用Foss凱氏定氮儀測(cè)定，粗脂肪含量采用索氏抽提法測(cè)定，粗灰分含量采用馬福爐灼燒法測(cè)定。

飼料氨基酸組成的測(cè)定方法參照文獻(xiàn)［16］，具體如下：飼料樣品先用6 mol／L HCl真空110℃水解22 h，再經(jīng)0.45 μm濾膜過濾后，真空抽干，加入0.02 mol／L HCl，用日立L－8900氨基酸分析儀檢測(cè)。測(cè)定飼料色氨酸時(shí)用4 mol／L NaOH水解樣品。測(cè)定飼料含硫氨基酸時(shí)，樣品先用過甲酸（88%甲酸與30%過氧化氫按9∶1的比例混合）氧化，再用6 mol／L HCl水解。

肌肉、血漿游離氨基酸含量的測(cè)定方法參照文獻(xiàn)［17］，具體如下：將肌肉或血漿樣品與4%的磺基水楊酸按3：1的比例混合，超聲波破碎勻質(zhì)，13 000 r／min下離心沉淀蛋白質(zhì)。取上清液經(jīng)0.45 μm濾膜過濾，濾液用日立L－8900氨基酸分析儀檢測(cè)。

1.6 計(jì)算公式

成活率（survival ratio，SR，%）＝100×（終末蝦數(shù)量／初始蝦數(shù)量）；

增重率（weight gain rate，WGR，%）＝100×（終末均重－初始均重）／初始均重；

特定生長率（specific growth rate，SGR，%／d）＝100×（ln終末均重－ln初始均重）／飼喂天數(shù)；

飼料系數(shù)（feed conversion ratio，F(xiàn)CR）＝進(jìn)食總量／（終末蝦重＋死亡蝦重－初始蝦重）。

1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析（one?way ANOVA）和雙因素方差分析（two?way ANOVA），若組間存在顯著差異（P＜0.05），則采用Student?Newman?Keuls法進(jìn)行多重比較分析，試驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±SD）的形式表示。

2　結(jié) 果

2.1 生長性能

由表4可知，與31%飼料蛋白質(zhì)水平相比，40%飼料蛋白質(zhì)水平顯著提高了對(duì)蝦的WGR和SGR（P＜0.05），降低了FCR（P＜0.05）。在每個(gè)飼料蛋白質(zhì)水平下，對(duì)照組（D1、D5組）對(duì)蝦的WGR、SGR均顯著高于其余各組（P＜0.05），說明在雞肉粉替代魚粉的飼料中無論添加EAA還是添加EAA＋NEAA，均不能完全達(dá)到對(duì)照組的生長性能水平。但在雞肉粉替代魚粉的飼料中添加晶體氨基酸比不添加晶體氨基酸能夠顯著地改善對(duì)蝦的生長性能（WGR、SGR、FCR）（P＜0.05），然而，同時(shí)添加EAA和NEAA對(duì)對(duì)蝦生長性能的改善作用不大（P＞0.05）。對(duì)蝦的存活率在各組間無顯著性差異（P＞0.05）。飼料的蛋白質(zhì)水平和氨基酸平衡處理之間的交互作用不顯著（P＞0.05）。

2.2 體成分

由表5可知，與31%飼料蛋白質(zhì)水平相比，40%飼料蛋白質(zhì)水平顯著提高了凡納濱對(duì)蝦的蝦體水分、粗蛋白質(zhì)和粗灰分含量（P＜0.05），而顯著降低了蝦體粗脂肪含量（P＜0.05）。在每個(gè)飼料蛋白質(zhì)水平下，晶體氨基酸添加與否對(duì)凡納濱對(duì)蝦的體成分均沒有顯著的影響（P＞0.05）。飼料的蛋白質(zhì)水平和氨基酸平衡處理之間的交互作用不顯著（P＞0.05）。

2.3 血漿游離氨基酸含量

飼料處理對(duì)凡納濱對(duì)蝦血漿游離氨基酸含量的影響總體不顯著（除游離蛋氨酸、苯丙氨酸和賴氨酸外）（P＞0.05）（表6）。在每個(gè)飼料蛋白質(zhì)水平下，不添加氨基酸的雞肉粉組對(duì)蝦血漿游離蛋氨酸、苯丙氨酸和賴氨酸含量顯著低于其他各組（P＜0.05）。進(jìn)一步對(duì)這3種血漿游離氨基酸含量與SGR進(jìn)行擬合，結(jié)果（表7）發(fā)現(xiàn)，血漿游離蛋氨酸含量與SGR之間相關(guān)性很低，而血漿游離苯丙氨酸和賴氨酸含量與SGR之間均相關(guān)性明顯；上述3種游離氨基酸含量之和與SGR則呈線性關(guān)系；此外，血漿游離EAA／NEAA與飼料EAA／NEAA也呈良好線性關(guān)系。

表4　飼喂不同試驗(yàn)飼料的凡納濱對(duì)蝦的生長性能Table 4 Growth performance of Pacific white shrimp fed different experimental diets

表5　飼喂不同試驗(yàn)飼料的凡納濱對(duì)蝦的體成分（濕重基礎(chǔ)）Table 5 Body composition of Pacific white shrimp fed different experimental diets（wet weight basis）　%

表6　飼喂不同試驗(yàn)飼料的凡納濱對(duì)蝦的血漿游離氨基酸含量Table 6 Plasma free amino acid contents of Pacific white shrimp fed different experimental diets　 mg／dL

續(xù)表6

表7　特定生長率與血漿游離氨基酸含量及血漿游離必需氨基酸／非必需氨基酸與飼料必需氨基酸／非必需氨基酸的關(guān)系Table 7 Relationships between SGR and plasma free amino acid contents or between plasma free EAA／NEAA and dietary EAA／NEAA

2.4 肌肉游離氨基酸含量

各組對(duì)蝦肌肉中各種游離氨基酸和總游離氨

基酸含量均無顯著性差異（P＞0.05）（表8）。

表8　飼喂不同試驗(yàn)飼料的凡納濱對(duì)蝦的肌肉游離氨基酸含量的影響Table 8 Muscle free amino acid concentrations of shrimp fed different experimental diets　　×10－2mg／g

3　討 論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，高的飼料蛋白質(zhì)水平明顯促進(jìn)凡納濱對(duì)蝦的生長和飼料利用率。Ye等［11］的結(jié)果也表明38%飼料蛋白質(zhì)水平比33%飼料蛋白質(zhì)水平更有利于凡納濱對(duì)蝦生長，說明凡納濱對(duì)蝦在快速生長階段仍需要較高的飼料蛋白質(zhì)水平以滿足其生長發(fā)育的需要。飼料氨基酸平衡性將關(guān)系到水產(chǎn)動(dòng)物能否正常生長［18－19］。Gaylord等［20］在以雞肉粉為主要蛋白質(zhì)源的飼料中補(bǔ)充幾種EAA，使飼料EAA組成與雜交條紋鱸肌肉氨基酸組成相近，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在飼料中補(bǔ)充賴氨酸沒有促進(jìn)鱸魚的生長，而在飼料中補(bǔ)充賴氨酸＋蛋氨酸能明顯提高鱸魚生長和飼料效率，但在飼料中補(bǔ)充賴氨酸＋蛋氨酸＋蘇氨酸后鱸魚的生長與飼料效率又有所下降，而在飼料中補(bǔ)充賴氨酸＋蛋氨酸＋蘇氨酸＋亮氨酸相比于補(bǔ)充賴氨酸＋蛋氨酸＋蘇氨酸，鱸魚生長性能又有所提高。Gaylord等［20］認(rèn)為，添加的蘇氨酸可能與支鏈氨基酸（亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸）在腸道產(chǎn)生運(yùn)輸競(jìng)爭，使亮氨酸成為限制性氨基酸，因此降低了鱸魚的生長。Fra?ga等［21］研究了14C亮氨酸在小鼠與人體腸道上皮細(xì)胞的吸收轉(zhuǎn)運(yùn)過程，證實(shí)了亮氨酸與支鏈氨基酸、芳香族氨基酸、蛋氨酸、組氨酸及色氨酸之間均存在運(yùn)輸競(jìng)爭。上述研究表明，只注重個(gè)別氨基酸的平衡可能會(huì)競(jìng)爭性抑制其他氨基酸的吸收，從而產(chǎn)生新的限制性氨基酸，引起新的飼料氨基酸不平衡性問題。在本試驗(yàn)中，通過在雞肉粉替代魚粉的飼料中添加晶體EAA或同時(shí)添加晶體EAA和NEAA，使飼料中的EAA或EAA和NEAA含量與魚粉組的一致，以期獲得理想飼喂效果，結(jié)果表明，無論在高還是低的飼料蛋白質(zhì)水平下，添加晶體氨基酸的試驗(yàn)組凡納濱對(duì)蝦的生長速度均比魚粉組的低，說明即使用晶體氨基酸直接補(bǔ)齊雞肉粉完全替代魚粉飼料中EAA或EAA和NEAA的不足，并且滿足凡納濱對(duì)蝦生長的需求（表3），但也未必能夠獲得理想的飼喂效果，因此，通過采取在雞肉粉替代魚粉的飼料中直接添加晶體氨基酸來平衡飼料氨基酸———這一方式對(duì)凡納濱對(duì)蝦的生長促進(jìn)作用是有限的。由于晶體氨基酸的生理活性不如蛋白質(zhì)水解的氨基酸［22］，這使得養(yǎng)殖動(dòng)物，尤其是魚蝦，不能很好地利用添加到飼料中的晶體氨基酸［8］。目前普遍認(rèn)可的魚蝦利用晶體氨基酸差的原因是晶體氨基酸在消化道中吸收速度快于完整蛋白質(zhì)降解的氨基酸，二者通過血液進(jìn)入組織存在時(shí)間差［23］，在組織中的代謝周轉(zhuǎn)也不是同步地進(jìn)行，從而降低了氨基酸利用率。有研究指出，飼料中過高的魚粉蛋白質(zhì)替代水平不利于魚蝦對(duì)晶體氨基酸的利用［24］。在本試驗(yàn)中，雞肉粉全部替代魚粉蛋白質(zhì)同樣會(huì)降低凡納濱對(duì)蝦對(duì)飼料中晶體氨基酸的利用率。由于試驗(yàn)飼料中對(duì)魚粉蛋白質(zhì)的替代水平為100%，因此，作為試驗(yàn)飼料主要蛋白質(zhì)源的雞肉粉勢(shì)必會(huì)影響飼料的適口性［1，25］，這與雞肉粉以大比例替代魚粉后飼料中飽和脂肪酸的含量增加而多不飽和脂肪酸含量相應(yīng)下降有關(guān)［26］。可見，試驗(yàn)飼料適口性的下降導(dǎo)致凡納濱對(duì)蝦攝食量減少，從而降低了生長速度。此外，盡管各試驗(yàn)組飼料的EAA含量與魚粉組飼料一致，但由于雞肉粉的氨基酸利用率低于魚粉，因此試驗(yàn)組飼料中實(shí)際用于魚生長的EAA量有限［27］，這也是雞肉粉以大比例替代魚粉造成凡納濱對(duì)蝦生長不佳的一個(gè)原因。

除了飼料氨基酸含量要滿足對(duì)蝦需要之外，氨基酸之間的平衡性也在一定程度上影響飼喂效果。本試驗(yàn)表明，雞肉粉＋EAA組、雞肉粉＋EAA＋NEAA組對(duì)蝦生長速度明顯比雞肉粉組的快，飼料利用率明顯改善。但在飼料中進(jìn)一步補(bǔ)充晶體NEAA并未起到進(jìn)一步提高凡納濱對(duì)蝦生長性能的作用，這可能與飼料中EAA／NEAA有關(guān)。Peres等［28］報(bào)道，飼料中EAA／NEAA為60／40時(shí)，歐洲海鱸獲得最大的飼料利用率。當(dāng)飼料中EAA／NEAA為57／43時(shí)，虹鱒獲得最大氮沉積與最小氮排泄［29］。本試驗(yàn)中，魚粉組飼料中EAA／NEAA 為44／56，雞肉粉＋EAA組和雞肉粉＋EAA＋NEAA組飼料中EAA／NEAA均為42／58，雞肉粉組飼料中EAA／NEAA為40／60，以雞肉粉組飼料中EAA／NEAA為最低，這也與凡納濱對(duì)蝦生長性能的結(jié)果一致。通過平衡飼料氨基酸來改善飼料效率反過來又可以減少飼料蛋白質(zhì)浪費(fèi)，從而達(dá)到在不影響生長性能的前提下降低飼料蛋白質(zhì)水平的目的［19］。

本試驗(yàn)結(jié)果顯示，飼料蛋白質(zhì)水平影響蝦體成分，高飼料蛋白質(zhì)水平促進(jìn)凡納濱對(duì)蝦蝦體蛋白質(zhì)和粗灰分的沉積，該結(jié)果與Ye等［11］報(bào)道的結(jié)果一致，相反，高飼料蛋白質(zhì)水平降低蝦體脂肪的沉積，該結(jié)果與Ye等［11］和Mu等［30］的結(jié)果一致。低飼料蛋白質(zhì)水平導(dǎo)致蝦體蛋白質(zhì)沉積降低而脂肪沉積增加，原因可能是，低的飼料蛋白質(zhì)水平更易出現(xiàn)氨基酸平衡失衡問題，尤其是EAA的失衡（表3），因此，部分EAA被用于能量代謝，過多能量會(huì)轉(zhuǎn)化為脂肪并以體脂的形式沉積，而相應(yīng)地減少了氨基酸用于蛋白質(zhì)的沉積。Xie等［31］研究表明，飼料賴氨酸含量從1.44%升到1.99%時(shí)，凡納濱對(duì)蝦蝦體的蛋白質(zhì)含量變化不明顯，而當(dāng)飼料賴氨酸含量增加到2.23%時(shí)，蝦體蛋白質(zhì)含量出現(xiàn)明顯增加。他們認(rèn)為，飼料賴氨酸的缺乏可能增加了其他EAA的氧化，降低了氨基酸的沉積。在每一個(gè)飼料蛋白質(zhì)水平下，外源添加氨基酸與否并不影響凡納濱對(duì)蝦的體成分，可見，凡納濱對(duì)蝦的體成分不受飼料氨基酸平衡性的影響。

水產(chǎn)動(dòng)物體內(nèi)游離氨基酸水平能夠在一定程度上反映不同飼料蛋白質(zhì)的利用程度［32－33］。在本試驗(yàn)中，盡管雞肉粉組的飼料蘇氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸和組氨酸含量低于凡納濱對(duì)蝦需求量，而賴氨酸則滿足需求（表3），但飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)果表明，只有該組凡納濱對(duì)蝦僅血漿游離賴氨酸、蛋氨酸和苯丙氨酸含量低于魚粉組的水平，血漿游離蘇氨酸和組氨酸含量并沒有出現(xiàn)不足。由此可見，飼料賴氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸在進(jìn)入凡納濱對(duì)蝦外周血液循環(huán)過程中極易造成缺乏，可能與消化吸收過程中氨基酸之間的拮抗作用有關(guān)，但具體的機(jī)制還不清楚。Berge等［34］報(bào)道，賴氨酸與精氨酸在大西洋鮭腸道中競(jìng)爭相同轉(zhuǎn)運(yùn)載體，低濃度的賴氨酸能夠促進(jìn)精氨酸的吸收，高濃度的賴氨酸則抑制精氨酸的吸收，而精氨酸在任何濃度下都會(huì)阻礙腸道對(duì)賴氨酸的吸收。Berge等［35］的體外研究結(jié)果表明，培養(yǎng)液中低濃度的蛋氨酸在大西洋鮭腸道中的吸收會(huì)被其他氨基酸所抑制，然而當(dāng)?shù)鞍彼釢舛忍岣叩揭欢ㄋ剑@種抑制作用又會(huì)被解除，當(dāng)培養(yǎng)液中缺乏某些氨基酸時(shí)，也會(huì)降低腸道對(duì)蛋氨酸的吸收。當(dāng)飼喂添加晶體EAA或晶體EAA＋NEAA的雞肉粉替代魚粉的飼料后，對(duì)蝦血漿游離賴氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸含量恢復(fù)到魚粉組的水平，這與通過添加氨基酸使魚粉替代飼料的氨基酸平衡性得到改善有關(guān)。凡納濱對(duì)蝦生長與其血漿游離賴氨酸或苯丙氨酸含量變化密切相關(guān)，且對(duì)蝦的SGR隨其血漿賴氨酸或苯丙氨酸含量的上升而增加。這說明飼料中某些EAA的缺乏或飼料氨基酸不平衡都可能會(huì)減少凡納濱對(duì)蝦對(duì)某些EAA的吸收，降低其在血漿中的含量，導(dǎo)致凡納濱對(duì)蝦的生長變慢［31，36］。凡納濱對(duì)蝦肌肉中游離氨基酸含量在各組間無顯著變化，這可能是因?yàn)榧∪饨M織中的蛋白質(zhì)分解與合成處于相對(duì)平衡的狀態(tài)。Mente等［16］的研究證實(shí)，凡納濱對(duì)蝦肌肉組織細(xì)胞內(nèi)游離氨基酸的運(yùn)輸是依靠主動(dòng)的跨膜運(yùn)輸來調(diào)節(jié)。本試驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)，所有組對(duì)蝦血漿中游離EAA／NEAA均比肌肉中游離EAA／NEAA低，可能反映了不同組織對(duì)EAA和NEAA代謝強(qiáng)度的不同［37］。由于凡納濱對(duì)蝦血漿游離EAA／NEAA與飼料EAA／NEAA之間呈正線性關(guān)系，其變化直接與飼料氨基酸豐度與平衡性關(guān)系密切［38］，因此，血漿游離氨基酸起到了動(dòng)物機(jī)體氨基酸代謝的中轉(zhuǎn)庫作用。

4　結(jié) 論

①在雞肉粉完全替代魚粉的飼料中添加晶體EAA比不添加晶體EAA對(duì)凡納濱對(duì)蝦的生長促進(jìn)效果明顯，但仍達(dá)不到魚粉組的飼喂效果。在添加了晶體EAA的雞肉粉飼料中進(jìn)一步補(bǔ)充晶體NEAA對(duì)凡納濱對(duì)蝦的生長沒有明顯促進(jìn)作用。

②飼喂高蛋白質(zhì)水平（40%）的飼料比飼喂低蛋白質(zhì)水平（31%）的飼料更能促進(jìn)凡納濱對(duì)蝦的生長，且高飼料蛋白質(zhì)水平增加凡納濱對(duì)蝦的體蛋白質(zhì)沉積，減少體脂肪沉積。

參考文獻(xiàn)：

［1］ CRUZ?SUáREZ L E，NIETO?LóPEZ M，GUAJAR?DO?BARBOSA C，et al.Replacement of fish meal with poultry by?product meal in practical diets for Litopenaeus vannamei，and digestibility of the tested ingredients and diets［J］.Aquaculture，2007，272（1／2／3／4）：466－476.

［2］ CHI S Y，TAN B P，MAI K S，et al.Growth and feed efficiency of juvenile shrimp Litopenaeus vannamei fed formulated diets containing different levels of poultry by?product meal［J］.Journal of Ocean Univer?sity of China，2009，8（4）：399－403.

［3］ ZHU W，MAI K S，ZHANG B G，et al.A study on the meat and bone meal and poultry by?product meal as protein substitutes of fish meal in practical diets for Litopenaeus vannamei juveniles［J］.Journal of Ocean University of China，2004，3（2）：157－160.

［4］ SAMOCHA T M，DAVIS D A，SAOUD I P，et al.Substitution of fish meal by co?extruded soybean poul?try by?product meal in practical diets for the Pacific white shrimp，Litopenaeus vannamei［J］.Aquaculture，2004，231（1／2／3／4）：197－203.

［5］ DAVIS D A，ARNOLD C R.Replacement of fish meal in practical diets for the Pacific white shrimp，Litopenaeus vannamei［J］.Aquaculture，2000，185（3／4）：291－298.

［6］ CHENG Z J，BEHNKE K C，DOMINY W G.Effects of poultry by?product meal as a substitute for fish meal in diets on growth and body composition of juvenile Pacific white shrimp，Litopenaeus vannamei［J］.Jour?nal of Applied Aquaculture，2002，12（1）：71－83.

［7］ SAOUD I P，RODGERS L J，DAVIS D A，et al.Re?placement of fish meal with poultry by?product meal in practical diets for redclaw crayfish（Cherax quadri?carinatus）［J］.Aquaculture Nutrition，2008，14（2）：139－142.

［8］ YE J D，LIU X H，KONG J H，et al.The evaluation of practical diets on a basis of digestible crude protein，lysine and methionine for Litopenaeus vannamei［J］.Aquaculture Nutrition，2012，18（6）：651－661.

［9］ EL?SAIDY D M S D，GABER M M A.Complete re?placement of fish meal by soybean meal with dietary L?lysine supplementation for Nile tilapia，Oreochromis niloticus（L.）fingerlings［J］.Journal of the WorldAquaculture Society，2002，33（3）：297－306.

［10］ HU M H，WANG Y J，WANG Q，et al.Replacement of fish meal by rendered animal protein ingredients with lysine and methionine supplementation to practi?cal diets for gibel carp，Carassius auratus gibelio［J］.Aquaculture，2008，275（1／2／3／4）：260－265.

［11］ YE J D，WANG K，LI F D，et al.Incorporation of a mixture of meat and bone meal，poultry by?product meal，blood meal and corn gluten meal as a replace?ment for fish meal in practical diets of Pacific white shrimp Litopenaeus vannamei at two dietary protein levels［J］.Aquaculture Nutrition，2011，17（2）：e337－e347.

［12］ AKIYAMA D M.Future considerations for shrimp nu?trition and the aquaculture feed industry［C］／／WYBAN J.Proceedings of the special session on shrimp farming.Baton Rouge：World Aquaculture So?ciety，1992：198－205.

［13］ WILSON R P.Amino acid requirements of finfish and crustaceans［M］／／D’MELLO J P F.Amino acids in animal nutrition.2nd ed.Oxon：CAB International，2003：427－447.

［14］ 王用黎.凡納濱對(duì)蝦幼蝦對(duì)蘇氨酸、亮氨酸、色氨酸和纈氨酸需要量的研究［D］.碩士畢業(yè)論文.湛江：廣東海洋大學(xué)，2013.

［15］ 蔣瓊，王雷，羅日祥.中國對(duì)蝦血淋巴抗凝劑的篩選［J］.水產(chǎn)學(xué)報(bào)，2001，25（4）：359－362.

［16］ MENTE E，COUTTEAU P，HOULIHAN D，et al.Pro?tein turnover，amino acid profile and amino acid flux in juvenile shrimp Litopenaeus vannamei：effects of di?etary protein source［J］.Journal of Experimental Biol?ogy，2002，205（20）：3107－3122.

［17］ FINDLEY A M，STICKLE W B.Effects of salinity fluctuation on the hemolymph composition of the blue crab Callinectes sapidus［J］.Marine Biology，1978，46 （1）：9－15.

［18］ GATLIN D M III，BARROWS F T，BROWN P，et al.Expanding the utilization of sustainable plant products in aquafeeds：a review［J］.Aquaculture Research，2007，38（6）：551－579.

［19］ GAYLORD T G，BARROWS F T.Multiple amino acid supplementations to reduce dietary protein in plant?based rainbow trout，Oncorhynchus mykiss，feeds ［J］.Aquaculture，2009，287（1／2）：180－184.

［20］ GAYLORD T G，RAWLES S D.The Modification of poultry by?product meal for use in hybrid striped bass Morone chrysops×M.saxatilis diets［J］.Journal of the World Aquaculture Society，2005，36（3）：363－374.

［21］ FRAGA S，SERRàO M P，SOARES?DA?SILVA P.L?type amino acid transporters in two intestinal epithelial cell lines function as exchangers with neutral amino acids［J］.Journal of Nutrition，2002，132（4）：733－738.

［22］ PERES H，OLIVA?TELES A.Effect of the dietary es?sential amino acid pattern on growth，feed utilization and nitrogen metabolism of European sea bass（Di?centrarchus labrax）［J］.Aquaculture，2007，267（1／2／3／4）：119－128.

［23］ 麥康森，李愛杰，尹左芬.對(duì)蝦對(duì)餌料蛋白質(zhì)及氨基酸吸收利用的研究［J］.海洋學(xué)報(bào)，1987，9（4）：489－495.

［24］ 遲淑艷.低魚粉飼料中添加微膠囊蛋氨酸或晶體蛋氨酸對(duì)軍曹魚和凡納濱對(duì)蝦生長性能的影響［D］.博士學(xué)位論文.青島：中國海洋大學(xué)，2009.

［25］ 董純.蛋白源適口性對(duì)大菱鲆幼魚生長、體組成和表觀消化率的影響［D］.碩士學(xué)位論文.青島：中國海洋大學(xué)，2014.

［26］ MILLAMENA O M.Replacement of fish meal by ani?mal by?product meals in a practical diet for grow?out culture of grouper Epinephelus coioides［J］.Aquacul?ture，2002，204（1／2）：75－84.

［27］ SUBHADRA B，LOCHMANN R，RAWLES S，et al.Effect of fish?meal replacement with poultry by?prod?uct meal on the growth，tissue composition and hema?tological parameters of largemouth bass（Micropterus salmoides）fed diets containing different lipids［J］.Aquaculture，2006，260（1／2／3／4）：221－231.

［28］ PERES H，OLIVA?TELES A.Effect of the dietary es?sential to non?essential amino acid ratio on growth，feed utilization and nitrogen metabolism of European sea bass（Dicentrarchus labrax）［J］.Aquaculture，2006，256（1／2／3／4）：395－402.

［29］ GREEN J A，HARDY R W，BRANNON E L.The op?timum dietary essential：nonessential amino acid ratio for rainbow trout（Oncorhynchus mykiss），which maximizes nitrogen retention and minimizes nitrogen excretion［J］.Fish Physiology and Biochemistry，2002，27（1／2）：109－115.

［30］ MU Y Y，SHIM K F，GUO J Y.Effects of protein lev?el in isocaloric diets on growth performance of the ju?venile Chinese hairy crab，Eriocheir sinensis［J］.Aq?uaculture，1998，165（1／2）：139－148.

［31］ XIE F J，ZENG W P，ZHOU Q C，et al.Dietary lysine requirement of juvenile Pacific white shrimp，Litope?naeus vannamei［J］.Aquaculture，2012，358－359：116－121.

［32］ 冷向軍，王冠，李小勤，等.飼料中添加晶體或包膜氨基酸對(duì)異育銀鯽生長和血清游離氨基酸水平的影響［J］.水產(chǎn)學(xué)報(bào)，2007，31（6）：743－748.

［33］ SEGOVIA?QUINTERO M A，REIGH R C.Coating crystalline methionine with tripalmitin?polyvinyl alco?hol slows its absorption in the intestine of Nile tilapia，Oreochromis niloticus［J］.Aquaculture，2004，238（1／2／3／4）：355－367.

［34］ BERGE G E，BAKKE?MCKELLEP A M，LIED E.In vitro uptake and interaction between arginine and ly?sine in the intestine of Atlantic salmon（Salmo salar）［J］.Aquaculture，1999，179（1／2／3／4）：181－193.

［35］ BERGE G E，GOODMAN M，ESPE M，et al.Intesti?nal absorption of amino acids in fish：kinetics and in? teraction of the in vitro uptake of L?methionine in At?lantic salmon（Salmo salar L.）［J］.Aquaculture，2004，229（1／2／3／4）：265－273.

［36］ 曾雯娉.凡納濱對(duì)蝦幼蝦對(duì)賴氨酸、蛋氨酸、精氨酸和苯丙氨酸需要量的研究［D］.碩士學(xué)位論文.湛江：廣東海洋大學(xué)，2012.

［37］ GUNASEKERA R M，SHIM K F，LAM T J.Influence of dietary protein content on the distribution of amino acids in oocytes，serum and muscle of Nile tilapia，Oreochromis niloticus（L.）［J］.Aquaculture，1997，152（1／2／3／4）：205－221.

［38］ YOUNG V R，ZAMORA J.Effects of altering the pro?portions of essential to nonessential amino acids on growth and plasma amino acid levels in the rat［J］.Journal of Nutrition，1968，96（1）：21－27.

（責(zé)任編輯 菅景穎）

Effects of Complete Replacement of Fish Meal with Poultry By?Product Meal and Supplemented with Crystalline Amino Acids in Diets on Growth Performance，Body Composition，Plasma and Muscle Free Amino Acid Contents of Pacific White Shrimp （Litopenaeus vannamei）

LIN Jianwei1ZHANG Chunxiao1，2SUN Yunzhang1，2ZHAI Shaowei1，2SONG Kai1，2YE Jidan1，2?
（1.Xiamen Key Laboratory for Feed Quality Testing and Safety Evaluation，Xiamen 361021，China；
2.Key Laboratory of Healthy Mariculture for the East China Sea，Ministry of Agriculture，Xiamen 361021，China）

Abstract：A 56?day feeding trial was carried out to determine the relationship between amino acid balance in complete replacement of fish meal（FM）with poultry by?product meal（PBM）in diets and growth performance，body composition，plasma and muscle free amino acid contents of Pacific white shrimp（Litopenaeus vannamei）was carried out in this experiment.Two dietary protein levels（31%and 40%，respectively）were designed，and four groups were arranged for each dietary protein level，which were FM group（basal diet），PBM group（com?plete replacement of fish meal by poultry by?product meal in the basal diet），PBM＋essential amino acids（EAA）group（complete replacement of fish meal by poultry by?product meal in the basal diet supplemented with crystal?line EAA）and PBM＋EAA＋non?essential amino acids（NEAA）group（complete replacement of fish meal by poultry by?product meal in the basal diet supplemented with crystalline EAA＋NEAA），respectively.Pacific white shrimp with the average body weight of（0.37±0.01）g were randomly divided into 32 barrels（150 L）with each barrel with 30 shrimp，and 4 barrels as a group were one of eight diets.Shrimp were fed three times a day and fed to apparent satiation.The results showed as follows：for each dietary protein level，the weight gain rate（WGR）and specific gain rate（SGR）in PBM＋EAA and PBM＋EAA＋NEAA groups were significantly higher than those in PBM group（P＜0.05），but significantly lower than those in FM group（P＜0.05）；the feed conversion ratio（FCR）had the opposite result compared with WGR and SGR.No differences in WGR，SGR and FCR between PBM＋EAA and PBM＋EAA＋NEAA groups were observed（P＜0.05）.The shrimp fed the di?ets containing 40%protein level had higher WGR（P＜0.05），body crude protein content（P＜0.05），but lower body crude lipid content（P＜0.05）compared with those shrimp fed diets containing 31%protein level.Free plas?ma EAA／NEAA was positively linearly correlated with the dietary EAA／NEAA，and the SGR of shrimp was positively correlated with the contents of plasma free methionine or phenylalanine.Plasma free methionine，phen?ylalanine and lysine contents in PBM group were significantly lower than those in FM group（P＜0.05），but there were no significant differences in muscle free amino acid contents among all groups（P＞0.05）.In conclusion，feeding a diet with FM complete replacement by PBM and supplementing crystalline EAA can promote the growth of Pacific white shrimp，but does not lead to a growth comparable to feeding the whole FM diet.The di?ets to further supplementing crystalline NEAA do not help in improving the growth of shrimp.［Chinese Journal of Animal Nutrition，2015，27（6）：1709?1721］

Key words：Pacific white shrimp（Litopenaeus vannamei）；poultry by?product meal；amino acid balance；growth performance；free amino acids

Corresponding author?，professor，E?mail：yjdwk＠sina.com

通信作者：?葉繼丹，研究員，碩士生導(dǎo)師，E?mail：yjdwk＠sina.com

作者簡介：林建偉（1990—），男，福建南平人，碩士研究生，研究方向?yàn)樗a(chǎn)動(dòng)物營養(yǎng)與飼料。E?mail：linjianwei1013＠163.com

基金項(xiàng)目：國家公益性行業(yè)（農(nóng)業(yè)）專項(xiàng)（201303053）；廈門市科技計(jì)劃項(xiàng)目（3502Z20130040）

收稿日期：2015－01－08

doi：10.3969／j.issn.1006?267x.2015.06.007

中圖分類號(hào)：S963

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1006?267X（2015）06?1709?13