溶血對(duì)時(shí)間分辨免疫熒光分析法測(cè)定胰島素的影響

彭哲華

溶血對(duì)時(shí)間分辨免疫熒光分析法測(cè)定胰島素的影響

彭哲華

目的 分析不同程度溶血對(duì)時(shí)間分辨免疫熒光分析法檢測(cè)胰島素結(jié)果的影響。方法 選擇健康成年體檢者未發(fā)生溶血的300例血液標(biāo)本, 利用低滲溶血法分別制備出不同程度溶血標(biāo)本, 其中：輕度溶血100例、中度溶血100例、重度溶血標(biāo)本100例；均采用時(shí)間分辨免疫熒光分析法對(duì)以上三組不同程度溶血標(biāo)本分別檢測(cè)其溶血前后的血清胰島素水平；并進(jìn)行組間對(duì)比分析。結(jié)果 各組未溶血前檢測(cè)結(jié)果與輕、中、重度溶血后比較, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；且輕、中、重度溶血標(biāo)本間血清胰島素水平檢測(cè)結(jié)果比較, 差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論 溶血對(duì)臨床測(cè)定血清胰島素水平具有較明顯的影響, 因此, 在進(jìn)行臨床血清胰島素水平檢測(cè)時(shí)須盡量避免溶血現(xiàn)象發(fā)生。

血清胰島素；測(cè)定；溶血；時(shí)間分辨免疫熒光分析法

血液標(biāo)本在其采集、儲(chǔ)藏、運(yùn)送等一系列過程中常會(huì)造成紅細(xì)胞破裂, 使血紅蛋白(Hb)被釋放到血清之中, 導(dǎo)致血液標(biāo)本發(fā)生溶血現(xiàn)象, 進(jìn)而對(duì)血液檢驗(yàn)結(jié)果的精準(zhǔn)性造成極大的影響［1,2］。由于紅細(xì)胞內(nèi)含有胰島素降解酶(IDE), 當(dāng)血液標(biāo)本出現(xiàn)溶血現(xiàn)象后, 則可直接促使紅細(xì)胞內(nèi)的IDE被釋放至血清之中, 降解胰島素, 最終會(huì)對(duì)胰島素水平的檢測(cè)產(chǎn)生影響。本文研究不同程度的溶血標(biāo)本對(duì)臨床血清胰島素檢測(cè)結(jié)果的影響, 現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇本院2014年1~12月健康成年體檢者未發(fā)生溶血的300例血液標(biāo)本；所有體檢者均無(wú)用藥史, 且肝、腎功能各項(xiàng)指標(biāo)正常, 無(wú)其他疾病史, 標(biāo)本無(wú)高脂血、黃疸以及溶血現(xiàn)象。將300例血液標(biāo)本采用低滲溶血法分別制備出不同程度溶血標(biāo)本, 其中：輕度溶血組100例、中度溶血組100例、重度溶血組100例。三組患者一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05), 具有可比性。

1.2 檢測(cè)儀器 本文采用日本Sysmex公司生產(chǎn)的XE-5000全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀；采用Auto Delfia1235時(shí)間分辨熒光免疫分析儀及相關(guān)配套的胰島素檢測(cè)試劑盒進(jìn)行胰島素水平檢測(cè)。

1.3 檢測(cè)方法 ①選取相關(guān)血液標(biāo)本, 以3000 r/min離心10 min進(jìn)行血清分離。②常溫下, 嚴(yán)格按照時(shí)間分辨熒光免疫分析儀及相關(guān)配套試劑盒說明書對(duì)每一份溶血標(biāo)本進(jìn)行相關(guān)胰島素水平檢測(cè)。③采用真空注射器反復(fù)抽打血液標(biāo)本,使之發(fā)生溶血, 然后將溶血血清與非溶血血清按不同比例予以充分混合, 得到不同輕、中、重度溶血標(biāo)本。④采用時(shí)間分辨熒光免疫分析儀對(duì)三組不同程度溶血標(biāo)本進(jìn)行胰島素水平檢測(cè)。

1.4 溶血分級(jí) 本研究根據(jù)美國(guó)臨床及實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)相關(guān)文件, 將溶血程度分為三類：輕度溶血類, 血清Hb濃度為0~1 g/L；中度溶血類, 血清Hb濃度為1~5 g/L；重度溶血類, 血清Hb濃度>5 g/L。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理與分析。計(jì)量資料以均數(shù)± 標(biāo)準(zhǔn)差表示, 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

300例健康成人體檢者胰島素水平檢測(cè)結(jié)果提示, 三組未溶血前胰島素水平檢測(cè)結(jié)果與不同程度溶血標(biāo)本的胰島素水平檢測(cè)結(jié)果比較, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；且輕、中、重度溶血標(biāo)本間血清胰島素水平檢測(cè)結(jié)果比較, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

表1 三組不同程度溶血標(biāo)本血清胰島素檢測(cè)結(jié)果分析

表1 三組不同程度溶血標(biāo)本血清胰島素檢測(cè)結(jié)果分析

注：與溶血前比較,aP＜0.05；與中、重度溶血組比較,bP＜0.05；與重度溶血組比較,cP＜0.05

組別例數(shù)溶血前Ins(mU/L)溶血后Ins(mU/L)輕度溶血組100218.65±28.65 102.35±21.25abc中度溶血組100220.84±29.21 96.25±19.65ac重度溶血組100222.91±27.64 60.37±20.16a

3 討論

血液標(biāo)本在其采集、儲(chǔ)藏、運(yùn)送等一系列過程中常會(huì)造成血紅細(xì)胞破裂, 使血紅蛋白被釋放到血清之中, 導(dǎo)致血液標(biāo)本發(fā)生溶血現(xiàn)象, 進(jìn)而對(duì)血液檢驗(yàn)結(jié)果的精準(zhǔn)性造成極大的影響。血液標(biāo)本發(fā)生溶血后, 同樣也會(huì)直接影響到血清胰島素的檢測(cè)結(jié)果, 究其主要原因：紅細(xì)胞內(nèi)含有胰島素降解酶, 該酶具有較強(qiáng)的催化胰島素降解作用；當(dāng)血液標(biāo)本出現(xiàn)溶血現(xiàn)象后, IDE從紅細(xì)胞內(nèi)被釋放至血清之中, 并將血清之中的胰島素分子降解, 進(jìn)而直接導(dǎo)致臨床胰島素水平檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)誤差［3,4］。

時(shí)間分辨免疫熒光分析(TRFIA)屬一種非放射免疫標(biāo)記技術(shù), 該技術(shù)可利用鑭系金屬離子作為示蹤物, 通過時(shí)間分辨熒光測(cè)定法對(duì)那些不屬于特異熒光進(jìn)行有效排除；同時(shí), 該金屬離子還可以對(duì)一些蛋白質(zhì)進(jìn)行有效標(biāo)記。目前, TRFIA因具有檢測(cè)靈敏度高、成本低等優(yōu)勢(shì), 已經(jīng)與電化學(xué)發(fā)光免疫法等成為臨床測(cè)定胰島素水平的常用手段之一［5,6］。

本文采用時(shí)間分辨免疫熒光分析法對(duì)不同程度溶血標(biāo)本中的血清胰島素水平進(jìn)行了對(duì)比性研究, 結(jié)果提示：三組未溶血前胰島素水平檢測(cè)結(jié)果與不同程度溶血標(biāo)本的胰島素水平檢測(cè)結(jié)果比較, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；且輕、中、重度溶血標(biāo)本間血清胰島素水平檢測(cè)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。這也進(jìn)一步說明, 隨著溶血程度的不斷加大, 血清胰島素濃度也會(huì)隨之不斷下降, 因此, 在進(jìn)行血清胰島素水平檢測(cè)時(shí), 必須避免血液標(biāo)本溶血現(xiàn)象發(fā)生；若血液標(biāo)本發(fā)生溶血現(xiàn)象, 則應(yīng)盡量選擇重新采集血液標(biāo)本, 以最大程度地保障血清胰島素檢測(cè)結(jié)果的精準(zhǔn)性。由于時(shí)間分辨免疫熒光分析法進(jìn)行胰島素水平檢測(cè)時(shí), 手工操作環(huán)節(jié)較多, 用時(shí)相對(duì)較長(zhǎng), 進(jìn)而影響的因素也相應(yīng)較多, 這就需要檢測(cè)人員在進(jìn)行相關(guān)操作時(shí), 既要保證檢測(cè)環(huán)境的溫度、儀器的清潔；同時(shí), 還要提高檢測(cè)操作手法的嫻熟度, 最大程度地避免或減少上述因素的影響；另外, 還應(yīng)加強(qiáng)血液標(biāo)本的采集、儲(chǔ)藏、運(yùn)輸?shù)拳h(huán)節(jié)的管理, 以進(jìn)一步保證血液標(biāo)本的質(zhì)量, 進(jìn)而全面保障血清胰島素檢測(cè)的精準(zhǔn)度［7,8］。

綜上所述, 溶血對(duì)臨床測(cè)定血清胰島素水平具有較明顯的影響, 因此, 在進(jìn)行臨床血清胰島素水平檢測(cè)既要全面加強(qiáng)檢驗(yàn)室的環(huán)境、檢測(cè)操作的規(guī)范性, 同時(shí), 還應(yīng)加強(qiáng)血液標(biāo)本采集、儲(chǔ)藏、運(yùn)輸?shù)拳h(huán)節(jié)的質(zhì)量管理, 進(jìn)而保障血清胰島素檢測(cè)的精準(zhǔn)度。

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10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.17.041

2015-02-04］

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