薏苡莖、葉提取液對腫瘤細(xì)胞增殖的抑制作用

朱曉瑩，林瑤，黃鎖義，余珊

（右江民族醫(yī)學(xué)院，廣西百色533000）

薏苡（Coix lacroyma-jobi L.var.ma-yuen Stapf）為禾本科薏苡屬，一年生或多年生草本植物。壯藥薏苡入藥歷史悠久，《后漢書·馬援傳》載：“出征交趾，土多瘴氣”，因常服薏苡仁而能防治瘴疾，后帶回中原。《神農(nóng)本草經(jīng)》記載：“薏苡仁味甘，微寒。主筋急，拘攣不可屈伸，風(fēng)濕痹，下氣，久服輕身益氣”[1]。2010年版中國藥典記載薏苡仁可健脾滲濕，除痹止瀉，清熱排膿[2]。薏苡作為食用兼藥用的栽培作物，薏苡具備了較全面的營養(yǎng)保健功能，薏苡仁油具有抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、抗病毒等方面的活性，薏苡莖可防治麻疹、濕疹等；薏苡葉中所含的生物堿，有清熱利濕、健脾殺蟲、暖胃益氣、舒盤活血等作用[3]。

在前期試驗(yàn)研究中，發(fā)現(xiàn)薏苡莖、葉水提取液及乙醇提取液對宮頸癌細(xì)胞增殖抑制作用顯著。本文以運(yùn)用薏苡莖、葉的水提取液及乙醇提取液作用于人宮頸癌（hela）、胃癌（SGC-7901）和肝癌（HepG2）細(xì)胞，觀察薏苡4種提取液對3種腫瘤細(xì)胞增殖活性的影響，探討薏苡莖、葉提取液抗腫瘤的活性。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞株

宮頸癌細(xì)胞Hela購于中國科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏中心昆明細(xì)胞庫，2 d～3 d換液一次，4 d～5 d傳代；胃癌（SGC-7901）、肝癌（HepG2）由廣西醫(yī)科大學(xué)黎丹絨教授惠贈，2 d～3 d換液一次，4 d～5 d傳代。

1.2 儀器

RE-3000A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：上海亞榮生化儀器廠；ALPHA1-2/LD-Puls冷凍干燥機(jī)：德國 CHRIST；ME104電子天平：美國梅特勒-托利多；CO2培養(yǎng)箱：上海力康HF90；多功能酶標(biāo)儀：德國伯托TriStar LB941。

1.3 試劑與藥材

RPMI-1640培養(yǎng)基：賽默飛世爾科技公司；胎牛血清：Hyclone公司；四甲基偶氮唑鹽（MTT）、二甲基亞楓（DMSO）：Sigma公司；0.25%EDTA-胰酶：北京索來寶公司；薏苡：購自廣西百色市西林縣足別瑤族苗族鄉(xiāng)（經(jīng)右江民族醫(yī)學(xué)院民族醫(yī)藥教研室覃道光副教授鑒定為禾本科薏苡屬薏苡藥材）。

1.4 薏苡莖、葉活性部位的提取

將新鮮的薏苡莖、葉分別用清水洗凈，陰干，莖、葉分別粉碎保存。稱取薏苡莖、葉干粉各100 g，按料液比1∶10分別加入蒸餾水、無水乙醇，按下法進(jìn)行提取。65℃恒溫水浴加熱回流兩次，每次2 h，抽濾，合并濾液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮，最后將濃縮液制成凍干粉。將上述提取液凍干粉各取0.5 g，用1%DMSO溶液溶解，0.22 μm過濾，分裝存儲。臨用前加入含10%胎牛血清的1640培養(yǎng)基中，調(diào)整到相應(yīng)的濃度。

1.5 薏苡莖葉不同提取液對Hela、SGC-7901、HepG2細(xì)胞增殖的影響

取對數(shù)生長期的細(xì)胞，分別調(diào)整細(xì)胞濃度為1×105個(gè)/mL，接種于 96 孔培養(yǎng)板，每孔 100 μL，試驗(yàn)設(shè)定調(diào)零組（僅加培養(yǎng)液）、空白組（含細(xì)胞液及培養(yǎng)液）和給藥組（含細(xì)胞液、培養(yǎng)液及藥物）孔。給藥組設(shè)有：薏苡莖葉水提取液、薏苡莖葉乙醇提取液。每種藥物設(shè)5個(gè)濃度，每個(gè)濃度設(shè)5個(gè)復(fù)孔，加藥培養(yǎng)48 h。48 h后傾去上清液，加新鮮配制的MTT溶液（5 mg/mL）20 μL，補(bǔ)充 1640 培養(yǎng)基至 200 μL，混勻再培養(yǎng) 4 h。傾去上清液，每孔加DMSO 150 μL，搖勻溶解甲臜，490 nm下測定各孔的吸光度（OD值）。

1.6 細(xì)胞增殖抑制率及IC50的計(jì)算

抑制率/%=[1-（給藥組OD值-調(diào)零組OD值）/（空白組OD值-調(diào)零組OD值）]×100。將試驗(yàn)數(shù)據(jù)輸入SPSS17.0求出各種提取液的IC50。

2 結(jié)果

薏苡莖葉提取液對Hela、SGC-7901、HepG2細(xì)胞增殖抑制的結(jié)果（OD值）見表1，抑制率計(jì)算結(jié)果見圖1，IC50計(jì)算結(jié)果見表 2。

表1 薏苡莖葉提取液對Hela、SGC-7901、HepG2細(xì)胞增殖的影響（±s，n=5）Table 1 Extracts from stalks and leaves of adlay of Hela，SGC-7901，HepG2 cells after treatmen（tx±s，n=5）mg/mL

表1 薏苡莖葉提取液對Hela、SGC-7901、HepG2細(xì)胞增殖的影響（±s，n=5）Table 1 Extracts from stalks and leaves of adlay of Hela，SGC-7901，HepG2 cells after treatmen（tx±s，n=5）mg/mL

注：表中“-”為不加干預(yù)因素。

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圖1 薏苡莖葉提取液對 HepG2（A）、SGC-7901（B）、Hela（C）細(xì)胞增殖抑制率Fig.1 Antiprolifeactive of adlay extracts towards HepG2（A），SGC-7901（B），Hela（C）cells注：A圖以薏苡葉乙醇提取液對HepG2細(xì)胞增殖抑制作用最顯著；B圖以薏苡莖乙醇提取液對SC-7901細(xì)胞增殖抑制作用最顯著；C圖以薏苡莖乙醇提取液對Hela細(xì)胞增殖抑制作用最顯著。

從上述圖表中可見，薏苡莖葉水、乙醇提取液對人肝癌細(xì)胞HepG2、人胃癌細(xì)胞SGC-7901和人宮頸癌Hela細(xì)胞均有抑制作用，其抑制率隨提取液濃度的增加而增加。但各個(gè)細(xì)胞對各提取液的敏感程度不同。HepG2細(xì)胞對薏苡葉乙醇提取液較敏感，而SC-7901、Hela對薏苡莖乙醇提取液較敏感，運(yùn)用spss軟件計(jì)算它們的IC50，其中以薏苡葉乙醇提取液對HepG2、SGC-7901、Hela 的 IC50值 48.52、54.72、139.35較低。

3 討論

薏苡的化學(xué)成分研究始于20世紀(jì)60年代，從薏苡中分到的化合物類型包括：脂類、甾醇類、benzoxazinones、benzoxazolinone、indene、木脂素類、酚類、腺苷等近30個(gè)化合物以及蛋白質(zhì)、氨基酸和維生素等營養(yǎng)成分[4]。研究[5-7]表明薏苡具有一定的抗腫瘤活性，目前國內(nèi)外對于薏苡抗腫瘤的研究主要集中于薏苡仁，對薏苡治療腫瘤等疾病的有效部位及作用機(jī)理等方面均未見有詳細(xì)深入的研究。本課題組前期以水、乙醇、甲醇、丙酮及氯仿為溶劑分別提取薏苡莖、葉，觀察他們對Hela增殖的抑制作用。結(jié)果顯示，薏苡莖、葉各提取液均顯示出一定的抑制Hela增殖作用，其中以薏苡水提及乙醇提取液作用較強(qiáng)。本文以前期研究為基礎(chǔ)，進(jìn)一步研究薏苡的抗腫瘤活性及其作用譜，選擇人肝癌細(xì)胞HepG2、人胃癌細(xì)胞SGC-7901和人宮頸癌Hela細(xì)胞3種細(xì)胞為試驗(yàn)對象，觀察薏苡莖、葉的水、乙醇提取液對它們增殖的抑制作用。試驗(yàn)結(jié)果顯示薏苡莖葉水、乙醇提取液對人肝癌細(xì)胞HepG2、人胃癌細(xì)胞SGC-7901和人宮頸癌Hela細(xì)胞均有抑制作用，其抑制作用隨藥物濃度的增加而增加，呈現(xiàn)劑量依賴效應(yīng)。運(yùn)用spss計(jì)算它們的IC50，其中以薏苡葉乙醇提取液對HepG2、SGC-7901、Hela的IC50值 48.52、54.72、139.35 較低。因此，認(rèn)為薏苡葉提取液具有較好的抑制腫瘤細(xì)胞生長的作用。此外，對比薏苡莖葉IC50抑制率時(shí)，發(fā)現(xiàn)薏苡葉提取液優(yōu)于莖提取液，提示薏苡抗癌活性物質(zhì)在葉中的分布大于莖，這為下一步薏苡提取液在體內(nèi)抗腫瘤作用研提供參考。

表2 薏苡莖葉提取液對Hela、SGC-7901、HepG2的IC50值Table 2 IC50values extracts from stalks and leaves of adlay of Hela，SGC-7901，HepG2 cellsmg/mL

[1] 國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會.中華本草[M].8版.上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社,1999:329

[2] 中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會.中國藥典,I部[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2010:353

[3] 黃鎖義,李容,潘勇,等.薏苡研究的新進(jìn)展[J].食品研究與開發(fā),2012,33(11):223

[4] 楊爽,王李梅,王姝麒,等.薏苡化學(xué)成分及其活性綜述[J].中藥材,2011,34(8):1306

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[7]Cheng-Pei Chung,Hsin-Yi Hsu,Din-Wen Huang,et al.Ethyl Acetate Fraction of Adlay Bran Ethanolic Extract Inhibits Oncogene Expression and Suppresses DMH-Induced Preneoplastic Lesions of the Colon in F344 Rats through an Anti-inflammatory Pathway[J].J Agric Food Chem,2010,58(13):7616