蒙古黃芪不同藥用部位中黃芪甲苷的含量測定

楊慶珍，劉德旺，黃林芳Δ，蔡敏Δ

(1.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥用植物研究所，北京 100193;2.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010080)

蒙古黃芪 Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao為多年生草本植物，是2010年版《中國藥典》規(guī)定黃芪正品之一，根入藥，春、秋二季采挖，除去須根和根頭，曬干[1]。黃芪具有補(bǔ)氣固表、利尿托毒、斂瘡生肌之功效，屬于傳統(tǒng)大宗中藥材商品，民間有用黃芪配成滋補(bǔ)強(qiáng)身之食品的習(xí)慣，藥性溫和，有“補(bǔ)氣固表之圣藥”的美譽(yù)，已有2000多年的應(yīng)用歷史[2]。蒙古黃芪主產(chǎn)于內(nèi)蒙古、山西、河北等地，是黃芪栽培和商品流通中的主流品種[3-5]。黃芪年消耗量十分龐大，野生資源在大量采挖的情況下日漸稀少，已被確立為國家三級保護(hù)植物。

黃芪主要活性成分為黃芪皂苷、黃酮和黃芪多糖[6-7]，黃芪甲苷具有抗腫瘤、抗炎、抗氧化、降糖和改善心血管疾病等廣泛的生物活性，常被作為評價黃芪藥材質(zhì)量優(yōu)劣的標(biāo)準(zhǔn)[8-9]。課題組前期對黃芪中有效成分與質(zhì)量的相關(guān)性研究較多，并未對其不同藥用部位有效成分含量進(jìn)行研究[10-12]。為便于加工、儲存和運(yùn)輸，黃芪的傳統(tǒng)加工方法多將須根和根頭去掉丟棄，但廢棄的蒙古黃芪須根和根頭是否含有黃芪藥效成分目前尚未見研究報道。故本文采用HPLC-ELSD法測定了蒙古中西部地區(qū)兩年生蒙古黃芪藥材主根、須根、根頭和全根中黃芪甲苷含量。比較不同加工方法蒙古黃芪不同藥用部位中黃芪甲苷含量的差異，以期為蒙古黃芪的采收加工提供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 HPLC-ELSD[安捷倫 (Agilent)公司，包括1100高效液相色譜儀、Agilent 1100自動進(jìn)樣器、Alltech Elsd 2000ES蒸發(fā)光檢測器];KQ—400KDE超聲波清洗器(昆山超聲儀器有限公司);AB135—S電子分析天平(Mettler);ELGA PURELAB Classic-UVF純水儀(英國);FZ102型微型植物試樣粉碎機(jī)(北京中興偉業(yè)儀器有限公司)。

甲醇(天津市北聯(lián)精細(xì)化學(xué)品開發(fā)有限公司)、乙腈(天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所)為色譜純，正丁醇、氨水為分析純。對照品蒙古黃芪甲苷(批號:110781-200613)購自中國生物藥品檢定所。

1.2 材料 本研究所用材料采自內(nèi)蒙古中西部呼和浩特市、包頭市、巴彥淖爾市共8份樣品，均為人工育苗移栽，秋季采收，經(jīng)內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)劉德旺副教授鑒定為蒙古黃芪[Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.Var.mongholicus(Bag.)Hsiao]的干燥根，產(chǎn)地采收后，分烘干與自然干燥方式干燥，每組樣品分別取主根、須根、根頭、全根，見表1。

表1 內(nèi)蒙古地區(qū)蒙古黃芪樣品信息Tab.1 Information of A.membranaceus and A.mongholicus samples in Inner Mongolia

1.3 方法 黃芪甲苷的測定方法參照2010年版《中國藥典》[1]。

1.3.1 色譜條件:色譜柱為BEH C18(100 mm×2.1 mm，1.7 μm)，流動相為乙腈-水(32∶68)，進(jìn)樣量為2 μL，體積流量為1.0 mL/min，柱溫為30℃。ELSD參數(shù):溫度為45 ℃，氮氣體積流量為2.74 mL/min。

1.3.2 對照品溶液的制備:取黃芪甲苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，即得。

1.3.3 供試品溶液的制備:取本品中粉約4 g，精密稱定，置索氏提取器中，加甲醇40 mL，冷浸過夜，再加甲醇適量，加熱回流4 h，提取液回收溶劑并濃縮至干，殘渣加水10 mL，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次40 mL，合并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2次，每次40 mL，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘渣加水5 mL使溶解，放冷，通過D101型大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑為1.5 cm，柱高為12 cm)，以水50 mL洗脫，棄去水液，再用40%乙醇30 mL洗脫，棄去洗脫液，繼用70%乙醇80 mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

1.3.4 供試樣品含量測定:分別精密吸取對照品溶液10 μL、20 μL，供試品溶液 20 μL，注入液相色譜儀，測定，用外標(biāo)兩點法對數(shù)方程計算，即得。

2 結(jié)果

按照干燥品計算，不同藥用部位及干燥方式蒙古黃芪中黃芪甲苷含量測定結(jié)果見表2，對比結(jié)果折線圖見圖1。由表2和圖1可見，黃芪藥材各藥用部位黃芪甲苷含量差異顯著，須根中含量最高(0.102% ～0.164%，平均0.129%);全根次之(0.069% ～0.108%，平均0.086%);再次是主根(0.04% ～0.089%，平均0.061%);根頭中最低(0.008% ～0.040%，平均0.024%)。其中須根、主根和全根中黃芪甲苷的含量均大于2010年版《中國藥典》規(guī)定的0.04%，而根頭中僅一批樣品黃芪甲苷含量(0.04%)符合規(guī)定，其余均低規(guī)定含量，說明根頭不適合作為以黃芪甲苷為有效成分的藥用部位。

表2 不同藥用部位及干燥方式黃芪甲苷含量(%，n=3)Tab.2 Contents of AstragalosideⅣin A.membranaceus and A.mongholicus different medicinal parts by different drying methods(%，n=3)

圖1 不同藥用部位及干燥方式黃芪甲苷含量Fig.1 Contents of AstragalosideⅣin A.membranaceus and A.mongholicus different medicinal parts with different drying methods

基于黃芪甲苷含量，應(yīng)用SPSS軟件對蒙古黃芪樣品不同干燥方式的藥用部位做主成分分析(PCA)。由分析結(jié)果的散點圖(圖2)可見，相同藥用部位黃芪甲苷含量相近，結(jié)合黃芪甲苷分析結(jié)果(表2，圖1)推測，分布于散點圖第一象限的蒙古黃芪藥用部位黃芪甲苷的含量最高，其次是第二象限。分布于成分2正值部分蒙古黃芪藥用部位黃芪甲苷的含量高，分布于成分2負(fù)值部分蒙古黃芪藥用部位黃芪甲苷的含量低。

圖2 不同藥用部位及干燥方式黃芪甲苷含量的PCA分析Fig.2 Principal component analysis for the contents of AstragalosideⅣin

3 討論

3.1 蒙古黃芪不同藥用部位黃芪甲苷含量 本研究通過對蒙古黃芪不同藥用部位黃芪甲苷含量的測定，發(fā)現(xiàn)黃芪藥材各藥用部位含量差異顯著，具體表現(xiàn)為:須根＞全根＞主根＞根頭。須根中黃芪甲苷含量最高，在傳統(tǒng)的加工方式中，在產(chǎn)地直接將須根和根頭除去，如果只以黃芪甲苷為考核指標(biāo)，則應(yīng)保留須根部分。以增加黃芪的供應(yīng)量，降低藥材提取企業(yè)的原料成本。

3.2 采收時期對黃芪甲苷含量的影響 來自呼和浩特市武川縣得勝溝鄉(xiāng)酒館村的2號樣品，是唯一一批三年生樣品，從圖1可見，2號樣品須根、全根、主根中黃芪甲苷含量均高于其它批次，但根頭中黃芪甲苷含量均低于其它批次，可以推斷，三年生樣品中黃芪甲苷地上部分向地下部分的轉(zhuǎn)移率更高。課題組結(jié)合哈拉和少、得勝溝二年生蒙古黃芪根頭及莖葉地上部分采集收情況發(fā)現(xiàn)，地上部分未枯萎時采收，其根頭及莖葉地上部分中黃芪甲苷含量可達(dá)0.033%，而此時地下部分主根及須根中黃芪甲苷含量則相對較低。說明蒙古黃芪采收時間以地上低分全部枯萎后進(jìn)行采收為宜。

3.3 加工方式對黃芪甲苷含量的影響 課題組考察了藥材采收后直接清洗與不清洗2種方式，發(fā)現(xiàn)是否直接清洗對產(chǎn)品含量影響不大。對比自然干燥及烘箱70℃干燥2種方式，以干燥后干品中黃芪甲苷含量進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)自然晾曬干燥的方式所含黃芪甲苷含量均高于70℃烘干方式，高約9.9%。黃芪甲苷(黃芪皂苷Ⅳ)為多種黃芪皂苷(黃芪皂苷Ⅰ、黃芪皂苷Ⅱ等)的基本母核[13-15]，自然干燥蒙古黃芪中黃芪甲苷含量高于烘箱70℃干燥方式，原因可能是在自然晾干過程中某些尚未失活的生物酶把其它黃芪皂苷降解為黃芪甲苷。說明用烘箱高溫烘干的方式對蒙古黃芪中黃芪甲苷含量具有一定的影響，初步推斷黃芪加工應(yīng)采取自然干燥或者低溫干燥。在后續(xù)實驗中，課題組將對一系列烘干溫度梯度對烘干對藥材中黃芪甲苷的影響做進(jìn)一步研究。

3.4 藥材品質(zhì)的優(yōu)良性 本次所收集的蒙古黃芪樣本來源于內(nèi)蒙古呼和浩特至巴彥淖爾市陰山山脈北側(cè)地區(qū)，為蒙古黃芪道地產(chǎn)區(qū)之一，按干燥品計算，全根黃芪甲苷含量在0.077% ～0.108%之間，是《中國藥典》2010年版黃芪藥材黃芪甲苷含量0.040%標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的1.85～2.7倍，驗證了內(nèi)蒙古所產(chǎn)道地蒙古黃芪藥材的高品質(zhì)。

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