妊娠期高血壓患者外周單個核細胞NF－kB活性與血漿五聚素3表達的相關性

章小東，黃文彩，王彩紅，鄭穗瑾，羅紅英，付文金，尹麗明，彭蘭芬，曾見芬，劉亮廣東醫(yī)學院附屬厚街醫(yī)院(東莞，523945)

妊娠期高血壓(hypertensive disordercomplicating pregnancy，HDCP)是指患者在妊娠期發(fā)生血壓升高，同時排除原有高血壓合并妊娠患者，簡稱妊高癥，常導致流產(chǎn)，嚴重者造成產(chǎn)婦及圍產(chǎn)兒死亡，同時部分患者遺傳給胎兒，造成先天性高血壓，給患者生存質量帶來重要的影響［1］。相關研究統(tǒng)計，妊高癥在我國發(fā)病率約為9.4%［2］。隨著生活水平的不斷提高，生活模式現(xiàn)代化及社會老齡化，妊娠期高血壓疾病(HDCP)的發(fā)病率逐年增加。但其病因和發(fā)病機制尚不完全清楚。妊娠期高血壓疾病的病因至今不明，給早期診斷和治療帶來困難，如何尋找一種靈敏、特異、準確的早期診斷妊高癥的指標，有利于預防妊高癥，降低發(fā)病率和死亡率。核因子(NF－KB)是一種重要的轉錄調節(jié)因子，是炎癥早期的關鍵調節(jié)因子［2］，其與心血管疾病的關系日益得到重視。血漿五聚素3(PTX3)是由血管內(nèi)皮細胞和巨噬細胞在白細胞介素－1(IL－1)、腫瘤壞死因子(TNF)作用下分泌的組織原型長鏈pentraxin分子，有一定的心血管保護作用。本研究旨在探討妊娠期高血壓疾病(HDCP)患者外周血單個核細胞(PBMC)核因子－KB(NF－KB)活性與與炎癥因子五聚素3(PTX3)水平的相關性，為早期防治妊娠高血壓心臟靶器官損害提供實驗室指標。

1 資料與方法

1.1 病例選擇

選取我院2012年3月～2014年12月收治的妊娠期高血壓疾病患者60例作為觀察組，其中妊娠期高血壓20例，輕度子癇前期20例，重度子癇前期20例 ，年齡25.8±7.0歲，孕38.5±3.5周;選取同期入院正常晚期妊娠婦女20例作為對照組，年齡25.6±7.3歲，孕38.9 ±3.7 周。觀察組研究對象均符合中華醫(yī)學會婦產(chǎn)科分會制定的診斷標準［1］，同時排除心臟、肝腎功能不全，高血脂癥，糖尿病和其他器質性疾病者，除外近三個月內(nèi)有感染者，排除白細胞計數(shù)＞10000/μL或＜4000/μL者及不愿參與研究者。同時選取本院入院正常妊娠婦女健康者20例作為正常對照組，術前相關檢查均在正常范圍。

1.2 觀察指標

1.2.1 PBMC的NF-KB活性測定 妊娠高血壓患者入院后12 h、健康對照組晨起空腹采集靜脈血10mL，置肝素抗凝管。2 h內(nèi)采用密度梯度離心法分離人PBMC，提取PBMC的核蛋白。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測核蛋白NF－KB活性，ELISA試劑盒由上海藍基生物公司提供。

1.2.2 血漿PTX3測定 乙二胺四乙酸抗凝管采集HDCP患者空腹及健康對照組晨起空腹外周靜脈血2mL，4℃離心后取血漿，分管置于－80℃ 冰箱中待用，采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)，并嚴格按照試劑盒操作步驟，檢測血清PTX3濃度。試劑盒購自上海滬尚生物科技有限公司，由美國GBD有限公司生產(chǎn)。以ELISA法測定NF－KB活性、PTX3等水平。

1.4 統(tǒng)計學分析

應用SPSS17.0統(tǒng)計學軟件分析數(shù)據(jù)，計量資料以均數(shù)±標準差表示，采用方差分析檢驗、pearson直線相關分析比較，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩組NF－KB活性和血漿PTX3水平測定，見表1.重度子癇前期患者NF－KB最高，而PTX3最低，組間差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。

表1 NF-KB活性和血漿PTX3水平測定Tab.1 Determination of NF-KB and plasma PTX3 level

2.2 兩組 NF－KB活性和血漿PTX3水平的相關性，見表2.重度子癇前期，重度子癇前期和妊娠期高血壓患者兩種指標相關系數(shù)分別為0.521，0.366和－0.397，P均小于0.05，差異有統(tǒng)計學意義。

3 討論

妊娠期高血壓(hypertensive disordercomplicating pregnancy，HDCP)是指患者在妊娠期發(fā)生血壓升高，同時排除原有高血壓合并妊娠患者，簡稱妊高癥，常導致流產(chǎn)，嚴重者造成產(chǎn)婦及圍產(chǎn)兒死亡，同時部分患者遺傳給胎兒，造成先天性高血壓，給患者生存質量帶來重要的影響［1，3］。國內(nèi)目前對妊娠高血壓疾病非傳統(tǒng)危險因素的轉歸及發(fā)展因素并無報道，而國外研究也只處于起始階段。對許多炎癥因子如白介素6、白介素1及C反應蛋白與妊娠高血壓疾病心血管損害的關系國內(nèi)外已有一定的研究，但多在聯(lián)合應用對妊娠高血壓疾病檢測及意義，而對HDCP患者外周血單個核細胞(peripheral blood mononuclear cell，PBMC)NF－κB 活性與 PBMC的關系，并與炎癥因子五聚素3(pentraxin3，PTX3)作比較均未見報道［4－5］。妊娠期高血壓的發(fā)病原因和機制目前尚未闡明，相關研究指出，妊高癥的發(fā)生和發(fā)展主要有以下幾種學說，如免疫失衡、血流動力學紊亂、氧化應激反應及遺傳學說等，Kkadyrov M等［6］研究發(fā)現(xiàn)，妊娠早期滋養(yǎng)細胞可侵蝕子宮螺旋動脈，使動脈栓塞，導致胎盤供血不足、組織缺氧，從而發(fā)生妊高癥。尋找一種在早孕期(10～14周)預測妊高癥的方法，是學界的研究熱點之一。近年來，非傳統(tǒng)危險因素，如微炎癥狀態(tài)等在妊娠期高血壓疾病發(fā)病中的作用越來越受到重視。研究表明［7］，許多炎癥因子，如白介素6、白介素1及C反應蛋白等對心血管具有損害作用?；诖耍覀冊O計了本研究，旨在探討炎癥因子血漿五聚素3在妊高癥中的作用及相關機制。

在本研究中，我們檢測了外周單個核細胞核因子(NF－KB)水平及TX3水平，結果發(fā)現(xiàn)，妊娠高血壓患者NF－KB水平明顯高于正常人，且兩者呈負相關。采用NF－KB相關抑制劑后，TX3水平下降，說明TX3是NF－KB介導的信號通路的下游效應分子。核因子(NF－KB)是一種重要的轉錄調節(jié)因子，靜息狀態(tài)下與其抑制單位(inhibitor of κB，IκB)相結合形成復合體，以無活性狀態(tài)存在于胞質中。當細胞受到外界刺激時，NF－KB暴露出核定位信號并進入核內(nèi)，使其具有生物活性?；罨腘F－KB可以在轉錄水平上激活多種與炎癥有關的細胞因子、黏附分子，如細胞間黏附分子－1(intercellular adhesion molecule－1，ICAM－1)、E－選擇素、血管細胞黏附分子－1(vascular cell adhesion molecule－1，VCAM－1)、白細胞介素(interleukin，IL)－1、IL－8、IL－6、腫瘤壞死因子－α(tumor necrosis factor－α，TNF－α)和環(huán)氧合酶－2(cyclooxygenase－2，COX－2)，是炎癥早期的關鍵調節(jié)因子［2］，其與心血管疾病的關系日益得到重視。PTX3是由血管內(nèi)皮細胞和巨噬細胞在白細胞介素－1(IL－1)、腫瘤壞死因子(TNF)作用下分泌的組織原型長鏈分子，其由顆粒型白細胞、脂肪細胞、內(nèi)皮細胞、平滑肌細胞及成纖維細胞等合成的［8］。Jenny等［9］發(fā)現(xiàn)，PTX3 增高與心血管死亡及全因死亡密切相關，為獨立于年齡、高血壓、糖尿病、高血脂、吸煙、CRP等的危險因素。Latini等［10］以724例急性ST段抬高患者為研究對象，隨訪觀察3個月，發(fā)現(xiàn)PTX3的升高水平可以用來預測心梗后心衰及死亡率，并且優(yōu)于其他心肌標志物如CRP、N末端腦鈉肽前體(NT－proBNP)、肌鈣蛋白(TnT)、肌酸激酶(CK)。Norata等［11］利用基因敲除模型研究小鼠發(fā)現(xiàn)，缺乏PTX3的小鼠更易出現(xiàn)為血管炎癥及動脈粥樣硬化，從而推斷PTX3在動脈粥樣硬化過程的免疫應答中起到一定的積極保護作用。這與本研究結果是一致的。

綜上所述，PTX3不僅是一種反映血管炎癥的炎性標志物，可作為局部血管炎癥和心血管系統(tǒng)損傷的標志物［13］，并對妊娠高血壓患者具有一定的保護作用，是臨床研究的焦點之一。

［1］樂杰主編.婦產(chǎn)科學［M］.第6版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2005.

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