HPLC法測定鹽酸米安色林片含量

陳 青，劉明潔，許竹梅

(山東省食品藥品檢驗研究院，山東 濟南 250101)

鹽酸米安色林片是新一代四環(huán)類抗抑郁藥，由荷蘭歐加農(nóng)(Organon)公司研發(fā)并與1985年上市。由于其無抗膽堿能作用，也無心血管系統(tǒng)副反應(yīng)，與抗高血壓藥也無相互作用等，市場應(yīng)用廣泛。其現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)采用UV法測定含量，但實驗中發(fā)現(xiàn)輔料對含量測定有干擾。本文參考有關(guān)文獻［1～8］，建立了鹽酸米安色林片的HPLC法測定，為該產(chǎn)品的質(zhì)量控制提供了科學(xué)的依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1200高效液相色譜儀(包括四元梯度泵、自動進樣器、柱溫箱等，色譜工作站為Agilent Chemstation);Sartorius CP225D電子天平;Milli－Q超純水處理系統(tǒng)。

1.2 試藥 鹽酸米安色林對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:100812－200501);系統(tǒng)適用性對照品為EP對照品(Batch1.0，含有雜質(zhì)A、D、E和鹽酸米安色林);鹽酸米安色林片(國內(nèi)某公司，批號:140101、140501、140601，規(guī)格:30 mg);甲醇、辛烷磺酸鈉為色譜純，磷酸為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:Shiseido C8柱(4.6 mm×250 mm ，5 μm);流動相:0.02 mol·L－1辛烷磺酸鈉溶液(用30%磷酸溶液調(diào)節(jié)pH值至3.0)－甲醇(40∶60);流速:1.0 mL·min－1，檢測波長:279 nm;柱溫:35 ℃;進樣量:20 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液 精密稱取鹽酸米安色林對照品適量，加流動相溶解并稀釋制成每1 mL中約含0.1 mg的溶液，作為對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液 取本品20片，精密稱定，研細，精密稱取適量(約相當(dāng)于鹽酸米安色林10 mg)，置100 mL量瓶中，加流動相適量，超聲處理15 min，放冷至室溫，用流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

圖1 HPLC色譜圖

2.2.3 空白輔料溶液 按處方，配制不含鹽酸米安色林的樣品粉末。精密稱取適量(相當(dāng)于1/3片輔料量)，按“2.2.2”項下方法制備空白輔料溶液。

2.3 輔料干擾試驗 分別取空白輔料溶液、對照品溶液和供試品溶液進樣分析，考察制劑輔料對測定的干擾。結(jié)果表明:輔料不干擾測定。色譜圖見圖1。

2.4 線性試驗 精密稱取鹽酸米安色林對照品適量，用流動相溶解并稀釋制成一系列溶液，分別取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以濃度與色譜峰峰面積作線性回歸方程，所得線性方程為:Y=7528X+0.935(r=0.9999)，線性范圍為0.0267～0.428 mg·mL－1。

2.5 精密度試驗 取對照品溶液連續(xù)進樣6次，測得鹽酸米安色林峰面積的RSD為0.13%。

2.6 重復(fù)性試驗 取批號為140601的樣品制備6份供試品溶液，測得的平均含量為97.5%，RSD為0.36%。

2.7 穩(wěn)定性試驗 取供試品溶液，分別在0、1、2、3、4、6、8 h 測定，測得峰面積的 RSD 為 0.28%(n=7)，表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 回收率試驗 在空白輔料粉末中加入鹽酸米安色林對照品適量，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，在相當(dāng)于供試品溶液80%、100%和120%的濃度水平下，每個濃度制備3份，按上述色譜條件測定并計算回收率，結(jié)果見表1。

表1 回收率測定結(jié)果(n=9)

2.9 含量測定 取批號為140101、140501、140601的鹽酸米安色林片樣品，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，每批樣品制備2份溶液，進樣分析，并與UV法比較，測定結(jié)果見表2。

表2 樣品測定結(jié)果(n=2)

3 討論

3.1 分別采用Shiseido C8柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)、Thermo C8柱(4.6 mm ×250 mm，5 μm)及 Inertsil C8柱(4.6 mm ×250 mm，5 μm)，含量結(jié)果與色譜行為基本一致。綜合考慮色譜峰的分離度、理論板數(shù)、保留時間等參數(shù)，選擇Shiseido C8柱(4.6 mm ×250 mm，5 μm)作為色譜柱。

3.2 鹽酸米安色林最大吸收波長為279 nm，該波長下色譜峰響應(yīng)良好，且無雜峰干擾。

3.3 用流動相作為稀釋溶劑，色譜峰的峰形對稱，柱效高;用甲醇作溶劑，出現(xiàn)前延峰。

3.4 UV法專屬性差，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不能真實地反映產(chǎn)品的質(zhì)量，也可讓個別企業(yè)有機可乘。通過方法學(xué)考察建立了HPLC法測定鹽酸米安色林片含量的方法。本法簡便易行，結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可作為鹽酸米安色林片的含量測定方法。

［1］朱麗，賈首時，張連成.鹽酸米安色林片的HPLC法測定［J］.中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2014，45(6):570 －572.

［2］李寧，張玉英，聶昌盛.鹽酸米安色林片的廚房研究［J］.藥學(xué)研究，2015，34(4):223 －224.

［3］孫麗麗，司天梅.HPLC法測定血漿中米安色林的濃度［J］.中國新藥雜志，2002，11(9):714 －716.

［4］張光勇，周小東.米安色林治療老年抑郁癥對照研究［J］.臨床精神醫(yī)學(xué)雜志，2000，10(5):268 －269.

［5］李亞玲，漆文燁.米安色林與舍曲林治療老年抑郁癥的對照研究［J］.醫(yī)藥導(dǎo)報，2011，11(30):1460－1461.

［6］陳新謙，金有豫.新編藥物學(xué)［M］.第14版.北京:人民衛(wèi)生出版社，1997:192.

［7］曲麗麗.氟桂利嗪與米安色林聯(lián)合治療偏頭痛的臨床療效觀察［J］.中國繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育，2015，7(15):150－151.

［8］國家食品藥品監(jiān)督管理局.化學(xué)藥品穩(wěn)定性技術(shù)研究指導(dǎo)原則［S］.國食藥監(jiān)注［2005］106號，2005－3－18.