吡諾克辛鈉滴眼液的質(zhì)量分析與標(biāo)準(zhǔn)改進(jìn)

李海霞，劉維彬，李智慧，田海燕，劉洪海

(德州市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，山東 德州 253000)

吡諾克辛鈉滴眼液，曾用名白內(nèi)停滴眼液、卡他靈滴眼液、卡它林滴眼液(Catalin)。吡諾克辛鈉滴眼液主要成分是吡諾克辛鈉，化學(xué)名1－羥－5－氧－5H－吡啶并－［3，2－α］－吩惡嗪－3－羧酸鈉。主要治療初期老年性白內(nèi)障、輕度糖尿病性白內(nèi)障或并發(fā)性白內(nèi)障等。白內(nèi)障形成的原因之一是由于若香氨基酸的代謝過程反常，生成醌類物質(zhì)，致使晶狀體的可溶性蛋白質(zhì)變成不溶性蛋白質(zhì)，晶狀體變渾濁，視力持續(xù)減退。醌類物質(zhì)對(duì)晶狀體可溶蛋白質(zhì)的作用可被吡諾克辛競(jìng)爭(zhēng)性抑制［1］。全世界因白內(nèi)障致盲的占46%［2］，該藥物對(duì)白內(nèi)障的發(fā)展具有一定的抑制功效［3］。吡諾克辛鈉滴眼液由藥片和專用溶液組成，每粒藥片含吡諾克辛鈉0.8mg;每瓶內(nèi)裝溶劑15mL。國內(nèi)現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)有2個(gè)，衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)二部第四冊(cè)及國家食品藥品監(jiān)督管理總局標(biāo)準(zhǔn)YBH16882006，檢驗(yàn)項(xiàng)目包括性狀、鑒別(化學(xué)反應(yīng)、紫外鑒別)、檢查(含量均勻度、專用溶劑的裝量、pH值、微生物限度或無菌、可見異物)、含量測(cè)定，但是缺少有關(guān)物質(zhì)的檢查(衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)二部第四冊(cè))、滲透壓摩爾濃度等安全性檢查項(xiàng)目。

1 依據(jù)現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)結(jié)果與分析

1.1 總檢驗(yàn)結(jié)果 本次試驗(yàn)共檢驗(yàn)51批次吡諾克辛鈉滴眼液，涉及生產(chǎn)企業(yè)4家，使用現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)，合格率為100%。

1.2 分項(xiàng)檢驗(yàn)結(jié)果與分析

1.2.1 性狀 51批次樣品均符合規(guī)定，藥片為橙色片，專用溶劑為無色液體。

1.2.2 鑒別 51批次樣品均符合規(guī)定，化學(xué)鑒別均顯正反應(yīng);紫外光譜在230 nm與433 nm處均有最大吸收，且實(shí)測(cè)吸光度比值均在1.82～1.97之間。

1.2.3 根據(jù)各個(gè)廠家藥品GMP認(rèn)證的進(jìn)度，分別檢查了無菌或微生物限度，所有批次的樣品均符合規(guī)定。

1.2.4 含量均勻度 51批樣品S值在1.48～4.14;A+1.8S值在2.23～9.76，均符合規(guī)定，合格率100%。其中2個(gè)廠家的49批樣品S值走勢(shì)圖分別見圖 1、2。

圖2 20批同廠家吡諾克辛鈉滴眼液含量均勻度S值走勢(shì)圖

1.2.5 專用溶劑的裝量 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定每瓶的裝量均應(yīng)在14.3～15.7mL，經(jīng)檢驗(yàn)均符合規(guī)定，且90%樣品的平均裝量在15mL以上。

1.2.6 pH值 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定應(yīng)在5.7～6.7之間，檢驗(yàn)結(jié)果均在6.1～6.3之間;同廠家不同批次pH值差別不明顯，不同廠家之間pH值變化相對(duì)較小。其中2個(gè)廠家49批樣品pH走勢(shì)圖見圖3、4。

圖3 29批同廠家吡諾克辛鈉滴眼液pH值走勢(shì)圖

圖4 20批同廠家吡諾克辛鈉滴眼液pH值走勢(shì)圖

1.2.7 有關(guān)物質(zhì) 僅1家企業(yè)的產(chǎn)品按照國家食品藥品監(jiān)督管理總局標(biāo)準(zhǔn)YBH16882006檢驗(yàn)有關(guān)物質(zhì)項(xiàng)，其雜質(zhì)總和為0.2%，其限度為1.0%。

1.2.8 含量測(cè)定 51批次樣品的平均含量在95.4% ～101.6%之間。結(jié)果表明，兩個(gè)廠家的吡諾克辛鈉含量測(cè)定值波動(dòng)不大，質(zhì)量穩(wěn)定。其中2個(gè)廠家49批次平均含量見圖5、6。

2 有關(guān)物質(zhì)檢查及其檢驗(yàn)結(jié)果分析

圖5 29批同廠家吡諾克辛鈉滴眼液含量測(cè)定值走勢(shì)圖

圖6 20批同廠家吡諾克辛鈉滴眼液含量測(cè)定值走勢(shì)圖

現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)對(duì)有關(guān)物質(zhì)未加以控制，為了更好的控制產(chǎn)品質(zhì)量，參考有關(guān)文獻(xiàn)［4～6］，采用 HPLC 法測(cè)定有關(guān)物質(zhì)含量，用于控制產(chǎn)品質(zhì)量。

2.1 儀器與試藥 Agilent 1260高效液相色譜儀，包括:真空脫氣機(jī)，G13llA四元泵，G1313A自動(dòng)進(jìn)樣，G1315A紫外檢測(cè)器和 Chem station工作站;XD105DU分析天平;水為純化水，乙腈與四氫呋喃為色譜純，其他試劑均為分析純。

2.2 方法與結(jié)果

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性 色譜柱:Agilent色譜柱 C18(4.6mm ×250mm，5μm);流動(dòng)相:磷酸鹽溶液(取4.5 g磷酸氫二鈉溶于1000mL水，用磷酸調(diào)節(jié) pH至6.0)－乙腈－四氫呋喃(81∶18∶1);檢測(cè)波長433 nm;流速:0.8mL·min－1;柱溫:30℃;進(jìn)樣量:20μL;在該色譜條件下吡諾克辛鈉與相鄰雜質(zhì)峰的分離度大于1.5，理論塔板數(shù)按吡諾克辛鈉計(jì)在3000以上。

2.2.2 溶液的配制 取吡諾克辛鈉藥片1片置15mL專用溶劑中溶解，作為有關(guān)物質(zhì)測(cè)定供試液;精密量取1mL至100mL量瓶中，用專用溶劑稀釋至刻度，搖勻，作為有關(guān)物質(zhì)測(cè)定對(duì)照溶液。

2.2.3 專屬性考察 取吡諾克辛鈉原料10mg至10mL量瓶中用專用溶劑稀釋至刻度，作為儲(chǔ)備液;取儲(chǔ)備液1.0mL至20mL量瓶中，加入30%過氧化氫2mL放置30min后，加入0.1 mol·L－1硫代硫酸鈉2mL中和，用其專用溶劑稀釋至刻度，搖勻，作為氧化破壞溶液;取吡諾克辛鈉原料于4500 Lx照度下放置7天后取出，用專用溶劑稀釋至50 μg·mL－1的濃度，搖勻，作為光照破壞溶液;取吡諾克辛鈉原料于105℃下放置24 h，放冷后，用專用溶劑稀釋稀釋至50 μg·mL－1的濃度，搖勻，作為高溫破壞溶液。分別取上述溶液注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果表明，在該色譜條件下能有效檢查出破壞條件下產(chǎn)生的雜質(zhì)，主峰與雜質(zhì)峰完全分離，主峰純度大于990，表明本方法專屬性良好。

2.2.4 線性關(guān)系考察 精密量取“2.2.2”項(xiàng)下有關(guān)物質(zhì)測(cè)定供試液各 1mL，分別至 10、25、50、100、200、250mL容量瓶中，分別用專用溶劑逐級(jí)稀釋成濃度成線性的溶液，分別精密量取6個(gè)線性濃度的溶液各20μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以待測(cè)物濃度C為橫坐標(biāo)，峰面積A為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，線性方程為 A=87.705C－7.0368，r=0.9999。結(jié)果表明，在0.21 ～10.66 μg·mL－1濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.5 檢測(cè)線與定量限 精密量取“2.2.2”項(xiàng)下有關(guān)物質(zhì)對(duì)照液1mL至25mL量瓶中，用專用溶劑稀釋至刻度并進(jìn)樣測(cè)定，信噪比S/N為3.2，最低檢測(cè)濃度為0.02 μg·mL－1;最低定量限為0.1 μg·mL－1。

2.2.6 精密度試驗(yàn) 取“2.2.2”項(xiàng)下有關(guān)物質(zhì)對(duì)照液，在“2.2.1”項(xiàng)下條件重復(fù)進(jìn)樣分析6次，以峰面積計(jì)算RSD為0.50%(n=6)，表明本方法精密度良好。

2.2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批有關(guān)物質(zhì)測(cè)定供試液按“2.2.1”項(xiàng)下條件重復(fù)進(jìn)樣分析6次，分別計(jì)算雜質(zhì)含量，計(jì)算結(jié)果RSD為0.04%(n=6)，表明本方法重復(fù)性良好。

2.2.8 有關(guān)物質(zhì)測(cè)定結(jié)果 取4個(gè)廠家共8批次吡諾克辛鈉滴眼液樣品，照“2.2.2”項(xiàng)方法分別制備有關(guān)物質(zhì)供試品溶液與對(duì)照溶液，取對(duì)照溶液20μL注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)器靈敏度，使主成分的色譜峰高約為滿量程的20% 再精密量取供試品溶液和對(duì)照溶液各20μL，分別注入色譜儀，記錄色譜圖，以自身對(duì)照法計(jì)算有關(guān)物質(zhì)含量，各雜質(zhì)峰面積之和不得大于對(duì)照溶液主峰面積(1.0%)，結(jié)果見表1。

表1 吡諾克辛鈉滴眼液有關(guān)物質(zhì)檢查結(jié)果

3 結(jié)果及討論

3.1 法定方法的質(zhì)量分析 對(duì)51批樣品依據(jù)現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)，結(jié)果均為符合規(guī)定，說明該品種質(zhì)量穩(wěn)定，能過基本滿足臨床使用要求。

在含量項(xiàng)下的結(jié)果分析圖表中，發(fā)現(xiàn)生產(chǎn)企業(yè)各批次含量趨勢(shì)偏低，提示應(yīng)對(duì)主料投放進(jìn)行必要復(fù)查，查找含量偏低的原因。

3.2 現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)存在的問題

3.2.1 文獻(xiàn)報(bào)道［7］，吡諾克辛鈉滴眼液在臨床使用過程中出現(xiàn)了說明書以外的不良反應(yīng)，很有可能是由于樣品自身或是雜質(zhì)所致?，F(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中無有關(guān)物質(zhì)檢查項(xiàng)，不能很好的控制產(chǎn)品質(zhì)量，有其必要性建立其有關(guān)物質(zhì)測(cè)定方法。

3.2.2 試驗(yàn)表明，吡諾克辛鈉在光照、氧化及高溫條件下均有雜質(zhì)峰產(chǎn)生，但因各廠家的生產(chǎn)工藝與配方有所不同，并未形成統(tǒng)一的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，故有必要建立統(tǒng)一的有關(guān)物質(zhì)檢查方法。

3.2.3 色譜條件的選擇 試驗(yàn)中8批次樣品來自4個(gè)生產(chǎn)廠家，均參照國家食品藥品監(jiān)督管理總局標(biāo)準(zhǔn)YBH16882006檢驗(yàn)，對(duì)照溶液不出峰或出峰很小，改用各自的專用溶劑為稀釋溶劑，準(zhǔn)確度高，4個(gè)廠家不同批次的藥品均得到理想的有關(guān)物質(zhì)檢驗(yàn)結(jié)果。

4 結(jié)論及建議

藥品質(zhì)量評(píng)價(jià)分析的目的是確保上市藥品質(zhì)量可靠，人民群眾用藥安全有效，另一方面也利于企業(yè)的健康發(fā)展。本文考察了吡諾克辛鈉滴眼液的質(zhì)量現(xiàn)狀，并對(duì)現(xiàn)行質(zhì)量進(jìn)行了評(píng)價(jià)，對(duì)法定標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)還有待于進(jìn)一步完善提高。通過本文的探索性研究，建議在吡諾克辛鈉滴眼液標(biāo)準(zhǔn)中，增加有關(guān)物質(zhì)檢查和滲透壓摩爾濃度檢查［8］。

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