乙肝大三陽(yáng)患者的Pre—S1及其HBV—DNA定量檢測(cè)的探討

摘要：目的 檢測(cè)Pre-S1抗原，并與乙型肝炎大三陽(yáng)患者HBV-DNA含量進(jìn)行比較分析。方法 收集267例乙型肝炎大三陽(yáng)患者血清和20例正常體檢者血清，用ELISA方法檢測(cè)Pre-S1抗原，用熒光定量PCR方法定量檢測(cè)HBV-DNA。結(jié)果 HBsAg、HBeAg、抗-HBc陽(yáng)性（大三陽(yáng)）患者HBV-DNA檢出率為76.8%，Pre-S1抗原檢出率為70.8%。結(jié)論 相當(dāng)數(shù)量的乙肝大三陽(yáng)患者存在病毒復(fù)制，HBV-DNA與Pre-S1抗原相關(guān)性較好，對(duì)于乙型肝炎患者在常規(guī)血清學(xué)標(biāo)志物檢測(cè)的基礎(chǔ)上對(duì)HBV-DNA數(shù)量進(jìn)行動(dòng)態(tài)檢測(cè)有助于臨床診斷、療效觀察及預(yù)后判斷。

關(guān)鍵詞：乙型肝炎；HBV-DNA；Pre-S1抗原

乙型肝炎血清標(biāo)志物的檢測(cè)方法有多種，高效、敏感性和特異性是選擇檢測(cè)方法的重要指標(biāo)。Pre-S1抗原已成為乙肝患者診斷、治療和預(yù)后的一個(gè)重要標(biāo)志。HBV-DNA定量測(cè)定可以反映乙型肝炎病毒的量的變化，是判斷病毒復(fù)制活躍和具有傳染性的直接依據(jù)。本研究觀察了乙肝大三陽(yáng)患者血清標(biāo)志物、Pre-S1和HBV-DNA三者之間的相關(guān)性及其臨床意義。

1資料與方法

1.1一般資料 收集267例乙型肝炎大三陽(yáng)患者血清，其中男178例，平均年齡32.1歲，女89例，平均年齡31.3歲，健康對(duì)照20例，男10例，平均年齡28.8歲，女10例，平均年齡26.6歲。留取清晨空腹靜脈血，分離血清，-20℃保存待檢。

1.2儀器 德國(guó)DadeBehring公司BEPⅢ全自動(dòng)酶免疫分析儀，廈門(mén)安普利生物技術(shù)有限公司Genelight9800 PCR熒光定量?jī)x。

1.3方法

1.3.1血清標(biāo)志物（HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc）檢測(cè) 應(yīng)用ELISA方法，試劑由上?？迫A生物技術(shù)有限公司提供。加樣（包括質(zhì)控血清、陰陽(yáng)性對(duì)照及待檢血清），然后用BEPⅢ全自動(dòng)酶免疫分析儀進(jìn)行檢測(cè)，判定方法嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3.2 Pre-S1抗原檢測(cè) 采用雙抗體夾心ELISA法，用抗-Pre-S1和抗-HBs作為固相化抗體和酶標(biāo)抗體，單抗捕獲待檢標(biāo)本中的乙肝病毒表面抗原，用辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗Pre-S1單抗作為檢測(cè)抗體。嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)的檢測(cè)步驟進(jìn)行操作，根據(jù)酶底物反應(yīng)后的呈色吸光值，測(cè)定血清中乙肝病毒Pre-S1，試劑由北京貝爾生物工程有限公司提供。

1.3.3 HBV-DNA定量測(cè)定 采用PCR方法結(jié)合熒光探針體外擴(kuò)增檢測(cè)技術(shù)，試劑由廈門(mén)安普利生物技術(shù)有限公司，該試劑盒的檢測(cè)上限為1.0×109copies/ml。

1.4統(tǒng)計(jì)分析計(jì)數(shù)資料 采用SPSS13.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理

2結(jié)果

2.1 HBsAg、HBeAg、抗-HBc陽(yáng)性組（大三陽(yáng)組） HBV-DNA檢出率為76.8%，其HBV-DNA平均含量為9.7×105copies/ml；Pre-S1抗原檢出率為70.8%?？梢?jiàn)部分HbeAg陽(yáng)性患者存在病毒高復(fù)制。20例健康對(duì)照者血清HBV標(biāo)志物、HBV-DNA及Pre-S1均為陰性，見(jiàn)表1。

2.2乙型肝炎大三陽(yáng)患者Pre-S1與HBV-DNA的關(guān)系 267例乙型肝炎大三陽(yáng)患者血清中，HBV-DNA陽(yáng)性為205例，Pre-S1陽(yáng)性為189例，其陽(yáng)性檢出率分別為76.8%（205/267）、70.8%（189/267）。HBV-DNA陽(yáng)性組中Pre-S1檢出率為71.2%（146/205），HBV-DNA陰性組中Pre-S1檢出率為69.4%（43/62），Pre-S1與HBV-DNA檢出率有偏差，HBV-DNA與Pre-S1檢出率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=17.5，P<0.05），見(jiàn)表2。

3討論

HBV血清標(biāo)志物檢測(cè)是目前診斷乙肝最常用的指標(biāo)，它主要反映人體對(duì)乙肝病毒的免疫反應(yīng)狀態(tài)，但不能直接反映HBV在患者體內(nèi)的復(fù)制情況。由于HBV血清標(biāo)志物復(fù)雜多樣，臨床上難以根據(jù)這些結(jié)果對(duì)HBV感染復(fù)制情況進(jìn)行準(zhǔn)確判斷。

HBV的外衣殼蛋白包括S蛋白、Pre-S1蛋白和Pre-S2蛋白，研究顯示，Pre-S1蛋白含有肝細(xì)胞膜受體，與病毒侵入肝細(xì)胞以及HBV復(fù)制關(guān)系密切。ELISA抗原檢測(cè)方法對(duì)病毒感染后\"窗口期\"則會(huì)出現(xiàn)假陰性結(jié)果。熒光定量PCR技術(shù)的出現(xiàn)，解決了病原體感染后的發(fā)病時(shí)間、病情輕重與病原體數(shù)量的關(guān)系。探討HBV血清標(biāo)志物、Pre-S1、HBV-DNA檢測(cè)及其相互間的關(guān)系對(duì)于乙型肝炎臨床診斷、療效觀察和預(yù)后判斷具有重要意義。

本研究采用ELISA及PCR方法檢測(cè)267例乙型肝炎大三陽(yáng)患者血清標(biāo)本的Pre-S1、HBV-DNA，結(jié)果顯示大三陽(yáng)患者血清中HBV-DNA檢出率達(dá)76.8 %。HBV-DNA平均含量為9.7×105 copies/ml；Pre-S1檢出率為70.8%。

Pre-S1與HBV-DNA檢出率存在偏差，可能是Pre-S1和HBV-DNA檢測(cè)所表達(dá)的意義并不完全一致，慢性乙型肝炎病程早期（HBsAg陽(yáng)性），HBV-DNA陽(yáng)性而Pre-S1陰性；病程后期，部分病例Pre-S1陽(yáng)性而HBV-DNA為陰性。因此，不能僅依照Pre-S1來(lái)判斷病毒是否復(fù)制，Pre-S1不能完全代替HBV-DNA的檢測(cè)，只能作為其補(bǔ)充的指標(biāo)。有研究認(rèn)為Pre-S1抗原與HBV復(fù)制有更密切關(guān)系，Pre-S1作為病毒復(fù)制的重要指標(biāo)，較HBeAg敏感。在本研究中，Pre-S1與HBV-DNA高度相關(guān)，表明Pre-S1與HBV的復(fù)制具有一致性，但HBV-DNA陽(yáng)性組中Pre-S1檢出率為71.2%，和HBV-DNA的檢出率有差異，因此認(rèn)為臨床上判斷病毒的復(fù)制及其活躍程度不能單靠HBeAg或Pre-S1的陽(yáng)性指標(biāo)，準(zhǔn)確的方法是熒光定量PCR方法對(duì)HBV-DNA進(jìn)行定量檢測(cè)。血清中HBV-DNA的量是反映病毒復(fù)制的最直接標(biāo)志，是評(píng)價(jià)傳染性的最可靠的方法。熒光定量PCR技術(shù)能從DNA水平鑒別其潛伏性和活動(dòng)性，可以作為HBV感染的分子診斷標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)乙型肝炎的診斷、抗病毒治療的藥物療效評(píng)價(jià)、指導(dǎo)乙型肝炎合理治療方案的制訂以及預(yù)后判斷有非常重要的意義。

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編輯/申磊