糖化血紅蛋白HbA1c的測(cè)定方法與臨床應(yīng)用

近年來，糖尿病發(fā)病率呈不斷上升的趨勢(shì)。糖化血紅蛋白與糖尿病及其并發(fā)癥密切相關(guān)。糖化血紅蛋白分為HbA1a、HbA1b和HbA1c，其中最重要是HbA1c。HbA1c是血紅蛋白與血糖結(jié)合的產(chǎn)物，該過程緩慢且不可逆，因紅細(xì)胞的半壽期為60d，所以HbA1c能反映患者測(cè)定前2～3個(gè)月的平均血糖水平，是判定糖尿病患者長期血糖控制水平的良好指標(biāo)。

1 HbA1c的測(cè)定方法

1.1免疫比濁法 此法是利用抗原抗體反應(yīng)來測(cè)定HbA1c。在樣本中加入抗HbA1c抗體緩沖液，使HbA1c與抗HbA1c抗體結(jié)合形成可溶性的抗原抗體復(fù)合物，再加入一種含多聚半抗原的緩沖液，與反應(yīng)液中剩余的抗HbA1c抗體反應(yīng)形成不溶性的抗原抗體復(fù)合物，利用比濁法檢測(cè)HbA1c的含量；另一通道同時(shí)檢測(cè)總血紅蛋白，計(jì)算得出HbA1c的百分比。此法準(zhǔn)確率高，重復(fù)性好，經(jīng)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，該法回收率可達(dá)97.9%，CV<2%[1]。

1.2乳膠凝集法 原理是利用抗原抗體反應(yīng)直接測(cè)定總血紅蛋白中的糖化血紅蛋白（HbA1c）的百分含量。樣本中的總Hb和HbA1c作為抗原與試劑中相應(yīng)的抗體結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物進(jìn)而發(fā)生凝集反應(yīng)，凝集量隨HbA1c濃度的高低而變化。使用生化分析儀來進(jìn)行比濁測(cè)定HbA1c的濃度，利用終點(diǎn)法通過檢測(cè)反應(yīng)液的吸光光度值，可反映出凝集量，進(jìn)而推算出HbA1c的百分含量。

1.3酶法 原理是變性后的全血樣本經(jīng)蛋白酶作用，糖化血紅蛋白β-鏈上的纈氨酸被釋放出來，糖化的纈氨酸作為底物經(jīng)果糖纈氨酸氧化酶（FVO）的氧化作用產(chǎn)生H2O2，之后H2O2在過氧化物酶的作用下與相應(yīng)的顯色劑耦聯(lián)顯色[2]，通過測(cè)定吸光度得出HbA1c的濃度。直接酶法可直接檢測(cè)出樣本中HbA1c的百分比，而且處理后的樣本與氧化還原劑反應(yīng)，除去了小分子和高分子干擾物質(zhì)[3]。酶法檢測(cè)HbA1c可用于自動(dòng)生化儀，準(zhǔn)確率高、重復(fù)性好、特異性高。

1.4離子交換層析法 原理是基于糖基化的血紅蛋白和非糖基化的血紅蛋白所帶電荷不同進(jìn)行分離檢測(cè)。在弱酸性的陽離子交換樹脂中，HbA1c的β-鏈N-末端纈氨酸糖基化后幾乎不帶正電荷，對(duì)樹脂的附著力較小，用低濃度洗脫液可首先將HbA1c洗脫下來；非糖基化的HbA帶正電荷，被高濃度洗脫液洗脫下來，得到相應(yīng)的Hb層析譜。HbA1c值通過HbA1c峰面積占Hb總面積百分比來表示。高壓液相色譜法（HPLC）能直接檢測(cè)全血樣本中的HbA1c百分含量，且精確性、準(zhǔn)確性和重復(fù)性最好。

2 臨床應(yīng)用

2.1推算平均血糖水平 根據(jù)2012年ADA糖尿病診療指南，HbA1c為6%相當(dāng)于平均血糖7.0mmol/L，以后HbA1c每升高1.0%，平均血糖增高1.6mmol/L。

2.2診斷糖尿病 美國糖尿病學(xué)會(huì)建議將HbA1c≥6.5%納入糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)。HbA1c比血糖穩(wěn)定性好，精確度高，能夠反映平均血糖水平。

2.3評(píng)估病情及療效 HbA1c是最重要的長期血糖控制的監(jiān)測(cè)指標(biāo)之一，常用來評(píng)定糖尿病的控制程度。1993年，DCCT和UKPDS都將HbA1c作為糖尿病控制的一個(gè)重要評(píng)價(jià)指標(biāo)。目前，我國將糖尿病患者糖化血紅蛋白的控制標(biāo)準(zhǔn)定為6.5%以下。若HbA1c超過7.5%，表示需要調(diào)整或重新制定治療方案。因此，建議糖尿病患者每年至少兩次進(jìn)行HbA1c檢測(cè)。

2.4預(yù)測(cè)糖尿病并發(fā)癥 HbA1c可改變紅細(xì)胞對(duì)氧的親和力，造成組織與細(xì)胞缺氧，增加糖尿病在心腦血管方面的并發(fā)癥的發(fā)病幾率。若眼睛內(nèi)的晶體被糖化，可引起白內(nèi)障。若腎小球基底膜被糖化，可引起糖尿病腎病。將HbA1c控制在6.5%以下，能夠很好的預(yù)防糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生。

2.5篩查及監(jiān)測(cè)妊娠糖尿病（GDM） GDM易造成羊水過多、妊娠高血壓綜合征、巨大兒、胎兒畸形、新生兒黃疸等，其影響程度與孕婦的血糖控制情況關(guān)系密切，而測(cè)定HbA1c可對(duì)血糖控制情況進(jìn)行監(jiān)測(cè)，繼而對(duì)母兒進(jìn)行監(jiān)護(hù)。賴麗萍等[4]的研究表明，GDM組HbA1c陽性率（HbA1c≥6%）明顯高于正常糖耐量組；GDM患者的并發(fā)癥隨HbA1c的增高而增多。

3 討論

對(duì)于糖尿病患者來說，糖化血紅蛋白（HbA1c）是一個(gè)非常重要的檢測(cè)指標(biāo)。英國糖尿病前瞻性研究證實(shí)，糖化血紅蛋白每下降1%，糖尿病患者發(fā)生死亡的幾率就會(huì)降低21%，發(fā)生心肌梗死的幾率就會(huì)下降14%，發(fā)生中風(fēng)的幾率會(huì)下降12%，發(fā)生微血管病變的幾率就會(huì)下降37%，需要做白內(nèi)障摘除手術(shù)的幾率會(huì)下降19%，發(fā)生心力衰竭的幾率會(huì)下降16%。需要注意的是，多種疾病能影響HbA1c的檢測(cè)結(jié)果，如溶血性貧血、鐮狀細(xì)胞性貧血、慢性失血等使紅細(xì)胞生存期縮短，將減少紅細(xì)胞暴露到葡萄糖中的時(shí)間，隨之HbA1c的百分含量就會(huì)下降。因此，對(duì)于這類患者，糖化血紅蛋白的檢測(cè)結(jié)果是不可靠的，應(yīng)以空腹血糖為準(zhǔn)。盡管糖化血紅蛋白是一個(gè)重要的評(píng)估指標(biāo)，因其不能反映每天的血糖控制情況，所以它不能完全替代日常的血糖監(jiān)測(cè)。因此，定期檢測(cè)糖化血紅蛋白聯(lián)合日常監(jiān)測(cè)血糖，才能更好的控制血糖和評(píng)估病情。

參考文獻(xiàn)：

[1]胡應(yīng)秀，張紅梅.免疫透射比濁法測(cè)定HbA1c的可靠性研究[J].吉林醫(yī)學(xué)，2011，32（24）：4969-4970.

[2]Liu L，Hood S，Wang Y，et al. Direct enzymatic assay for HbA1c in human whole blood samples [J]. Clin Biochem，2008，41（7-8）：576-583.

[3]段桂萍，王靜.糖化血紅蛋白直接酶法測(cè)定自動(dòng)化分析的應(yīng)用[J].中國實(shí)用醫(yī)藥，2009，4（24）：216-217.

[4]賴麗萍，陸澤元，邵豪，等.妊娠糖尿病患者糖化血紅蛋白測(cè)定的臨床意義[J].實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)，2009，16（4）：1011-1013.編輯/成森