C反應(yīng)蛋白聯(lián)合檢測試劑盒在小兒感染性疾病診療中的應(yīng)用

摘要：目的 評(píng)價(jià)韓國i-CHROMA CRP試劑盒檢測全血hsCRP的可靠性。方法 選擇2014年3月～7月來我院兒科就診的患病兒童100例，用CRP試劑盒檢測全血hsCRP，用全自動(dòng)生化儀檢測血清hsCRP，比較其相關(guān)性。結(jié)果 檢測的hsCRP陰性（<3.0 mg/L）均值全血組為（1.7±1.1），血清組為（1.64±0.92）；hsCRP陽性（>3.0 mg/L）均值全血組為（6.8±2.3），血清組為（6.89±2.06），差異無顯著性（P>0.05）。結(jié)論 CRP試劑盒聯(lián)合檢測hsCRP的結(jié)果準(zhǔn)確可靠，且用血量少，非常適合兒科臨床使用的要求。

關(guān)鍵詞：超敏C反應(yīng)蛋白；試劑盒；兒科

C反應(yīng)蛋白（CRP）能夠參與體內(nèi)多種生理及病理過程，同時(shí)發(fā)揮抗炎及促炎的雙重作用，是急性時(shí)相反應(yīng)蛋白中變化最為明顯的一種。絕大多數(shù)疾病如細(xì)菌感染、糖尿病和動(dòng)脈硬化等心血管疾病均與CRP的升高有關(guān)[1]，在臨床上將其作為一種具有非特異性而且敏感的炎癥指標(biāo)使用。

隨著科技的發(fā)展，用更加敏感的方法可以檢測到濃度更低、計(jì)量單位更精密的C反應(yīng)蛋白，稱為超敏C反應(yīng)蛋白（hsCRP）。近些年隨著hsCRP（可定量1 mg/L以下）檢測的普及，hsCRP被越來越多的用于對(duì)兒科常見疾病的診斷[2]。但現(xiàn)在常見的CRP及hsCRP的檢測所用標(biāo)本都采取血清，采血量最少也需要2～3 ml，增加了采集的難度，從開始測定到完成報(bào)告耗時(shí)也較長，無法滿足兒科門診需求。本文通過用生化儀與CRP聯(lián)合檢測試劑盒對(duì)同一批標(biāo)本進(jìn)行相同檢測來評(píng)價(jià)此試劑盒的性能及可靠性。

1資料與方法

1.1一般資料 2014年3月～7月來我院就診的患兒100例（男56例，女44例），年齡8個(gè)月～6歲。

1.2儀器與試劑 日立7600型全自動(dòng)生化儀及配套試劑，韓國BodiTech公司生產(chǎn)的i-CHROMA（艾可美）免疫熒光分析儀和杭州麗珠醫(yī)療器械有限公司代理的hsCRP聯(lián)合檢測試劑盒。

1.3試劑盒主要組成成分 hsCRP聯(lián)合檢測試劑盒由反應(yīng)板和檢測緩沖液組成。反應(yīng)板有獨(dú)立包裝，內(nèi)有干燥劑，檢測緩沖液被分裝在小管子中，與反應(yīng)板分開運(yùn)輸。

1.4方法 所有檢測對(duì)象均于就診當(dāng)日抽取1ml靜脈血于加有EDTA的抗凝管中搖勻備用以及3 ml靜脈血于促凝管中制備血清，避免溶血發(fā)生。

全血樣本嚴(yán)格按照hsCRP聯(lián)合檢測試劑盒說明書操作加樣，然后將反應(yīng)板放到艾可美免疫熒光分析儀中進(jìn)行檢測。血清樣本用生化儀按操作程序設(shè)置參數(shù)，兩組樣本同時(shí)進(jìn)行hsCRP測定，記錄檢測結(jié)果。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所獲得的各項(xiàng)數(shù)據(jù)中，hsCRP值>3.0 mg/L為陽性，<3.0 mg/L為陰性；兩種方法所得CRP值采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理。結(jié)果采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

對(duì)兩種檢測方法的測定結(jié)果進(jìn)行比較，二者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），兩者之間無顯著差異，見表1。再將測定值經(jīng)線性回歸方程計(jì)算相關(guān)系數(shù)r=0.986，其相關(guān)性良好。

3討論

韓國i-CHROMA免疫熒光干式定量法CRP聯(lián)合檢測試劑盒是一種利用免疫熒光的定量檢測技術(shù)，測定方法為干化學(xué)層析法：將檢測緩沖液和血液樣本在檢測瓶中進(jìn)行混合，緩沖液中的熒光標(biāo)記抗CRP抗體與血液中的相關(guān)抗原結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物。然后將混合樣本放到反應(yīng)板上，通過毛細(xì)管作用擴(kuò)散到硝化纖維基質(zhì)的測試帶，該復(fù)合物會(huì)被測試帶上的抗標(biāo)記抗體捕獲。因此，血液樣本中的CRP越多，測試帶上的復(fù)合物聚集的越多，產(chǎn)生的熒光抗體的信號(hào)強(qiáng)度能夠反映被捕獲的CRP的量，再通過艾可美免疫熒光分析儀的處理，從而確定血液樣本中CRP的濃度。測試樣本可以采用血清、血漿或全血，擺脫了生化法只能用血清檢測的限制。樣本用量僅為10 μl，門診初診病患檢測時(shí)采集手指或足跟部的末梢血即可，使標(biāo)本的采集難度降低。測定方法簡便快速，5 min即可獲得檢測結(jié)果，方便對(duì)嬰幼兒及兒童病患的檢測，有效避免了生化法病患抽血困難、檢測時(shí)間較長等不利于兒科臨床早期診斷的問題[3]。

作為一種新型的快速檢測方法，該試劑盒的局限性表現(xiàn)為：①檢測值超出了檢測限（hsCRP的檢測限為0.5～5.0mg/L，CRP的檢測限為5～200 mg/L），其相關(guān)性會(huì)相應(yīng)下降[4]；②人類血液中某些非特異性成分具有相似抗原決定基捕獲緩沖液中抗體導(dǎo)致假陽性；③某些未知成分屏蔽了抗原決定基使之無法與抗體結(jié)合而導(dǎo)致假陰性，但經(jīng)過稀釋后再檢測就可避免。④不穩(wěn)定的CRP抗原隨著時(shí)間和溫度逐漸退化而無法被抗體識(shí)別，想要得到準(zhǔn)確的測試結(jié)果需要依靠良好的試劑存儲(chǔ)環(huán)境和規(guī)范的操作流程。但總體來說，檢測CRP和hsCRP比起用外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)作為炎性反應(yīng)的標(biāo)志要更加可靠[5]，CRP含量升高和降低的過程非常迅速的特點(diǎn)也決定了其應(yīng)該采用方便快捷而且可以多次復(fù)查的檢測方法。用免疫熒光干式定量法CRP聯(lián)合檢測試劑盒替代生化法用于對(duì)兒科初診病患的CRP檢測上還是很有價(jià)值的。

參考文獻(xiàn)：

[1]王金良.超敏CRP檢驗(yàn)的臨床價(jià)值[J].開卷有益.求醫(yī)問藥，2011，2（1）：15.

[2]林德美.血清C反應(yīng)蛋白在兒童哮喘急性發(fā)作時(shí)的變化情況分析[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2013，19（8）：11-12.

[3]焦瑞寶，唐吉斌，陳然，等.全血超敏C反應(yīng)蛋白與血清C反應(yīng)蛋白的相關(guān)性分析[J]國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2011，32（4）：528.

[4]趙彩虹.超敏C反應(yīng)蛋白試劑盒線性范圍的驗(yàn)證[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2012，33（15）：1819-1821.

[5]柳紅花.超敏C反應(yīng)蛋白檢測和血球分析在兒科上呼吸道感染中的應(yīng)用[J].中國保健營養(yǎng)，2012，09（095）：3117.

編輯/張燕