6—O—取代阿昔洛韋衍生物的合成及其抗病毒活性研究

摘要：目的 探討6-O-取代苯基阿昔洛韋衍生物的合成及測定其抗病毒活性。方法 采用先導(dǎo)化合物為阿昔洛韋，對(duì)其分子中的堿基進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，進(jìn)行6-O-取代阿昔洛韋衍生物的合成。將阿昔洛韋作為對(duì)照，應(yīng)用體外抗HSV-Ⅰ及HSV-Ⅱ測定6-O-取代阿昔洛韋衍生物的抗病毒活性。結(jié)果 體外抗HSV-Ⅰ及HSV-Ⅱ的病毒活性均以6-O-苯基阿昔洛韋相對(duì)于阿昔洛韋為較弱。結(jié)論 6-O-取代阿昔洛韋雖然對(duì)于阿昔洛韋抗病毒活性作用較弱，但其毒性較小。

關(guān)鍵詞：6-O-取代阿昔洛韋衍生物；合成；抗病毒活性；研究

隨著社會(huì)醫(yī)療水平的不斷提高，核苷類抗病毒藥物雖然對(duì)于單純皰疹病毒感染的臨床疾病治療較為有效[1]，但此類藥物具有較大毒副作用及耐藥性[2]，本次研究就6-O-取代阿昔洛韋衍生物的合成及其抗病毒活性進(jìn)行探討研究。

1物質(zhì)合成及抗病毒活性實(shí)驗(yàn)

1.1合成路線 阿昔洛韋分子屬開環(huán)核苷類抗病毒化合物，根據(jù)其構(gòu)效關(guān)系及作用機(jī)制將其分子中的堿基結(jié)構(gòu)進(jìn)行修飾，具體應(yīng)用阿昔洛韋作為先導(dǎo)化合物，利用取代苯氧基取代嘌呤環(huán)上的6-OH，合成總計(jì)11個(gè)6-O-取代苯基阿昔洛韋衍生物[3]，具體步驟見圖1。

1.2合成實(shí)驗(yàn) 本次研究具體阿昔洛韋衍生物合成實(shí)驗(yàn)有以下幾個(gè)步驟，即制備酚鈉、雙乙酰化阿昔洛韋、制備單乙酰阿昔洛韋、制備6-Cl-6-脫氧-2′-O-乙酰阿昔洛韋及制備6-O-苯基阿昔洛韋[4]，具體各個(gè)實(shí)驗(yàn)步驟闡述如下。

1.2.1酚鈉的制備 稱取苯酚0.95g，即10.1mmol，與10mmol即0.4gNaOH溶于10mLH2O中，攪拌溶解，減壓并置于P205干燥器中真空干燥。

1.2.2雙乙?；⑽袈屙f的制備 稱取73mmol阿昔洛韋即16.5g與100mL醋酐加熱溶解，應(yīng)用回流反應(yīng)3～5h，經(jīng)薄層色譜顯示反應(yīng)完全后減壓蒸除醋酐，靜置常溫后過濾。應(yīng)用丙酮、二氯甲烷及水沖洗濾餅，待沖洗完畢應(yīng)用丙酮再次沖洗，烘干得到雙乙?；衔?。將母液蒸除醋酐等物質(zhì)所得固體進(jìn)行沖洗，首先應(yīng)用丙酮進(jìn)行沖洗，后用水沖洗，最后再次由丙酮進(jìn)行沖洗，得到雙乙酰化合物。以上兩部所得雙乙?；衔锟傆?jì)19g，收率為84.0%，mp188～191℃。

1.2.3單乙酰阿昔洛韋的制備 稱取以上步驟制備的雙乙酰化合物15.5g，即50mmol加入1mol·L-1三乙胺乙醇200mL，應(yīng)用回流反應(yīng)10h后放置12h。將以上溶液進(jìn)行過濾，所得濾餅由乙醇溶液沖洗，加熱烘干得到12.6g單乙酰阿昔洛韋固體，收率為93.5%，其mp240-241℃。

1.2.4 6-Cl-6-脫氧-2′-O-乙酰阿昔洛韋的制備 稱取以上步驟制備的1.35g單乙酰阿昔洛韋即5mmol，2.3g芐基三乙基氯化銨即12mmol，加入至0.8mLN，N-二乙基苯胺，25mL無水乙腈及2.8mL新制三氯氧磷中，進(jìn)行均勻攪拌。加熱應(yīng)用回流反應(yīng)10min。減壓蒸除乙腈。所得溶液加入適量冰水降溫后應(yīng)用碳酸氫鈉飽和水溶液進(jìn)行堿化，直至溶液PH在6.0～6.5之間。應(yīng)用氯仿對(duì)溶液進(jìn)行萃取，應(yīng)用無水硫酸鈉進(jìn)行干燥，回收所得溶劑，以乙酰乙酯作為洗脫劑進(jìn)行殘留物柱色譜分離，得到1.05g 6-Cl-6-脫氧-2′-O-乙酰阿昔洛韋，收率為72.0%，mp124.0～126.0℃。進(jìn)行元素分析得到實(shí)測值（%）：C 40.58，H 4.33，N 23.64。MS m/z：292[M]+。

1.2.5 6-O-苯基阿昔洛韋的制備 稱取6-Cl-6-脫氧-2′-O-乙酰阿昔洛韋0.571g，即2mmol，1.6g苯酚鈉，即10mmol加入乙腈30mL，加熱攪拌均勻，應(yīng)用回流反應(yīng)恒定溫度60℃反應(yīng)5h，待薄層色譜顯示氯仿：甲醇容積約為6：1時(shí)停止反應(yīng)。應(yīng)用氯仿萃取后將萃取液及母液應(yīng)用無水硫酸鈉干燥，氯仿回收后將殘留物進(jìn)行柱色譜分離。蒸除溶劑，得到白色固體采取乙醚進(jìn)行洗滌過濾，得到0.45g6-O-苯基阿昔洛韋，其收率為73.5%，mp 140-148℃。

1.3抗病毒活性實(shí)驗(yàn) 本次研究對(duì)于6-O-苯基阿昔洛韋的抗病毒活性實(shí)驗(yàn)以阿昔洛韋作為對(duì)照，體外選擇猴腎細(xì)胞Vero作為細(xì)胞模型。比較兩者藥物對(duì)于HSV-Ⅰ及HSV-Ⅱ的有效作用濃度、細(xì)胞毒性及細(xì)胞病變情況。

具體實(shí)驗(yàn)步驟如下，稱取實(shí)驗(yàn)藥品溶于二甲亞砜，制得5mg·mL-1溶液，稀釋Vero細(xì)胞培養(yǎng)液稀釋上述溶液至不同適當(dāng)質(zhì)量濃度。應(yīng)用PH=7.4的RPMI-1640液稀釋病毒原液至10倍感染劑量。將以上實(shí)驗(yàn)細(xì)胞置于96孔板上進(jìn)行種植，于37℃、5%CO2濃度培養(yǎng)1～2d。將以上細(xì)胞同時(shí)應(yīng)用10倍病毒液進(jìn)行感染2h，后加入不同濃度實(shí)驗(yàn)（對(duì)照）藥液。于2d后觀察細(xì)胞病變情況、藥物毒性及確定藥物對(duì)于HSV-Ⅰ及HSV-Ⅱ各自的有效濃度。

2結(jié)果

經(jīng)以上抗病毒活性實(shí)驗(yàn)研究得到，體外抗HSV-Ⅰ及HSV-Ⅱ的病毒活性均以6-O-苯基阿昔洛韋相對(duì)于阿昔洛韋為較弱。見表1。

3討論

阿昔洛韋屬嘌呤核苷酸類似物，此類藥物于臨床中多應(yīng)用于單純皰疹病毒所致的感染性疾病。本次研究對(duì)于此類藥物分子的衍生物，即6-O-取代苯基阿昔洛韋衍生物的合成及藥理學(xué)抗病毒活性進(jìn)行研究探討[5]。6-O-取代苯基阿昔洛韋的制備環(huán)節(jié)均未用苯類物質(zhì)進(jìn)行催化及脫酸化，其所得藥物毒性相對(duì)較弱，產(chǎn)物Rf值在0.4上下，所得結(jié)果較為滿意[6]。然而藥理學(xué)抗病毒活性實(shí)驗(yàn)表明，此類藥物不同濃度在體外環(huán)境下對(duì)于HSV-Ⅰ及HSV-Ⅱ均有抑制病毒活性的作用，但相對(duì)于阿昔洛韋作用較弱。綜上所述，6-O-取代阿昔洛韋雖然對(duì)于阿昔洛韋抗病毒活性作用較弱，但其毒性較小。

參考文獻(xiàn)：

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