茶葉中6種主要兒茶素的高效液相色譜方法建立及應(yīng)用

（臺州市星明藥業(yè)有限公司，浙江 臺州 317700）

摘 要：茶葉是有益人身體健康的最佳飲料，通過現(xiàn)代的醫(yī)學(xué)臨床證明，茶葉中的兒茶素對茶葉中多酚類物質(zhì)高效清除自由基能力起著重要決定作用，通過加強對其相關(guān)理論的研究能夠更深層次的了解茶葉的功效原理。本文主要就茶葉中六種主要兒茶素的高效液相色譜方法進行構(gòu)建并對其實際應(yīng)用詳細分析探究，希望此次理論研究對實際操作能起到一定指導(dǎo)作用。

關(guān)鍵詞：茶葉;兒茶素;高效液相色譜

0 引言

古代，茶被譽為是萬病之藥，茶不僅能夠用來解渴，而最為重要的就是其組成的成分對人的身體健康有著促進作用，有著多種醫(yī)療保健的功能。我國有著豐富的茶葉資源，而將這些資源的作用得到充分發(fā)揮就是當前茶葉深加工領(lǐng)域的重要研究對象。在這一發(fā)展背景下對茶葉中的一些主要成分加強研究就有著其實質(zhì)性意義。

1 兒茶素檢測方法及高效液色譜分離

1.1 兒茶素檢測方法分析

針對茶葉中的兒茶素進行檢測其方法是多樣的，其中的氣相色譜法是能夠快速定量以及分析方便的方法，在這一方法作用下對茶葉兒茶素進行分析，常用衍生化試劑來改善樣品預(yù)處理方法，這樣能夠讓兒茶素衍生的更加徹底。對茶葉成分的組成進行詳細分析并對其質(zhì)量進行評估，通過溶劑的提取方法能夠起到有效的作用，這一方法的應(yīng)用主要就是采取水溶劑以及甲醇溶劑和乙醇溶劑等，運用這一方法能夠?qū)翰杷貜牟枞~的基質(zhì)當中得到有效的提取出來。除了以上這一方法外，通過超聲波萃取法也比較有效，這主要是通過超聲波技術(shù)的實際應(yīng)用所產(chǎn)生空化作用，從而就能夠?qū)⑵湓谖镔|(zhì)化學(xué)成分的提取作業(yè)當中加以應(yīng)用[1]。

1.2 茶葉中六種主要兒茶素高效液相色譜分離

高效液相色譜法能夠按照固定相以及流動相極性強弱分成正、反相液色譜法，而樣品的性質(zhì)則決定著最終的分離模式。首先從反相高校液色譜法的層面進行實施分析，在這一分離措施下主要是通過水以及甲醇等作為是有機溶劑，這些溶劑主要是為了能夠?qū)α鲃酉嗳軇┑膹姸冗M行有效調(diào)節(jié)。在這一過程中，給予在流動相極性要比固定相極性大很多，而在樣品的分子在這一過程中的分配和保留的化合物就相對比較強，從而就能夠反映出極性如果是比較大的話，那么在物質(zhì)方面就會先出峰，相反，倘若是極性相對比較小就是后出峰[2]。

2 六種兒茶素提取量的影響因素及HPLC方法應(yīng)用

2.1 六種兒茶素提取量影響因素分析

六種兒茶素提取量的影響因素是多方面的，主要體現(xiàn)在實踐對其產(chǎn)生的影響，溶劑提取中所需的時間愈長提取的就會愈充分，而兒茶素較為容易氧化，同時也可能在長時間提取中受氧化造成提取量的降低，根據(jù)相關(guān)的實驗就能夠看到，六種兒茶素總量在四十到五十分鐘的時候值最大。從而就能夠看出，這主要是與茶葉中的兒茶素氧化存在著一定的關(guān)聯(lián)，在一段時間后，隨著提取的時間不短的增加，那么在茶葉中的兒茶素氧化的速率也會比溶出的速率要大很多。

另外茶葉中兒茶素的料液對兒茶素的提取也會有著相應(yīng)的影響，在含量超過相應(yīng)的標準時那么有限兒茶素含量就會由于過量溶劑稀釋對其精密度造成影響，同時也會對溶劑造成浪費的現(xiàn)象。除此之外，抗氧化劑自身的含量多少對其也會產(chǎn)生相應(yīng)影響，因為兒茶素在溫度相對較高的情況下就比較容易發(fā)生氧化，溫度低的條件下的提取量也會因此而降低，對其含量的測定就會有著很大的難度。結(jié)合基質(zhì)當中成分含量的也正通過這一水溶液對茶葉兒茶素進行提取對方法建立難度不會受到影響。

2.2六種主要兒茶素HPLC方法應(yīng)用

對茶葉中的六種兒茶素進行方法驗證的過程中，要能夠采取具體的措施，要能對其加強在實驗層面的投入。通過高效液相色譜儀四元泵， DAD二極管陣列檢測器; G1969A ESITOF -MS電噴霧飛行時間質(zhì)譜儀;MIKRO 22R冷凍離心機;MilliQ-50超純水系統(tǒng)等[3]。然后對樣品進行有效的處理，首先就是要稱取0.5克的茶葉樣品，將其放置在100升的錐形瓶當中，再進行加入五十毫升的九十攝氏度的熱水，進行震蕩，在沉浸十分鐘之后進行離心旋轉(zhuǎn)十分鐘，接著進行獲取十毫升上層清液放置在五十毫升的容量瓶當中，最后采用純水進行稀釋，對稀釋的程度達到0.45微米微孔濾膜即可待測。

接著就是對色譜自身的所需要保持的條件，在這一方面要能夠充分重視，色譜柱Sinochrom ODS -BP416mm i.d×200mm，5μm，其中的流動相A、B分別是甲醇以及一定量的三氟乙酸水溶液。在洗脫的程序上主要是先對百分之十三的甲醇溶液進行五分鐘的洗脫，等待十分鐘再對百分之二十的甲醇=容易洗脫五分鐘，依次是百分之四十，百分之八十，在流速上要保持每分鐘0.8毫升，在這些操作都完成之后再取樣十微升[4]。

試驗方法在進行驗證后就能實施日常應(yīng)用，從具體的措施實施情況來看，主要是把建立的實驗方法用在茶葉樣品當中的六種兒茶素含量測定，這也是方法建立比較根本的一個目的。從準確度以及精密度方面來看，對準確度的確定方式有回收測定摻入空白基質(zhì)中的被測物，和參比標準品進行比較以及被測物標準品加入法。精密度主要是在重復(fù)使用這一操作步驟的時候，對一均勻樣品實施多次的抽樣測定，而在各測定結(jié)果間的一致程度。

3 結(jié)語

總而言之，針對茶葉中的六種主要兒茶素的研究通過其專屬性以及定量限等對各個物質(zhì)的含量以及樣品處理方法有著相應(yīng)的說明。而研究中的方法驗證是檢驗及完善方法比較重要的一個內(nèi)容，所以要能夠通過多種方法進行實際的驗證。此次的理論研究由于受到文章的篇幅限制，僅從側(cè)面進行了相應(yīng)的反映，希望此次的理論分析能在思路上提供理論依據(jù)，借此希望能夠?qū)ζ浒l(fā)展有所裨益。

參考文獻：

[1]鄭清梅，陳昆平，鐘艷梅，韓春艷，張子容，鄭佳玲.4類茶葉及其茶渣主要成分的測定與分析[J]. 廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015（06）.

[2]盧濤，蘭先秋，朱斌，羅安林，宋航.不同茶多酚中兒茶素的測定及柱層析法提取EGCG的比較[J].化工進展，2013（05）.

[3]王傳金，魏運洋，朱廣軍，杜楊艷.聚酰胺色譜法分離制備高純度表沒食子兒茶素沒食子酸酯[J].應(yīng)用化學(xué)，2013（04）.