丙氨酰谷氨酰胺注射液處方篩選及穩(wěn)定性研究

徐志文，王 靜,劉小娟，陳曉云，任澤林

(1.山東大學 藥學院，山東 濟南，250012；2.辰欣藥業(yè)股份有限公司，山東 濟寧272073；3.濟寧市第二人民醫(yī)院，山東 濟寧272049；4.濟寧京華眼科醫(yī)院，山東 濟寧272000)

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丙氨酰谷氨酰胺注射液處方篩選及穩(wěn)定性研究

徐志文1,2，王 靜2,劉小娟3，陳曉云4，任澤林2

(1.山東大學 藥學院，山東 濟南，250012；2.辰欣藥業(yè)股份有限公司，山東 濟寧272073；
3.濟寧市第二人民醫(yī)院，山東 濟寧272049；4.濟寧京華眼科醫(yī)院，山東 濟寧272000)

目的：篩選丙氨酰谷氨酰胺注射液的制備工藝并進行初步穩(wěn)定性研究。方法：通過對關(guān)鍵控制點活性炭用量、pH值、滅菌參數(shù)、充氮與否的篩選確定最佳處方，考察樣品的穩(wěn)定性。結(jié)果：最佳處方關(guān)鍵控制點為活性炭用量0.05%，pH值為5.4～6.0，滅菌參數(shù)為115℃、30min，配制及灌裝過程全程充氮，以該處方制備的樣品在市售包裝條件下經(jīng)加速、室溫留樣考察，質(zhì)量穩(wěn)定。結(jié)論：該處方設計合理，制備的注射液穩(wěn)定。

丙氨酰谷氨酰胺注射液；制備工藝；穩(wěn)定性

丙氨酰谷氨酰胺注射液主要成分為丙氨酰谷氨酰胺，其在體內(nèi)可迅速分解為谷氨酰胺和丙氨酸，作為營養(yǎng)物質(zhì)在機體內(nèi)進行代謝。適用于需要補充谷氨酰胺的患者，包括處于分解代謝和高代謝狀況的患者[1-3]。國家藥品標準提高后，發(fā)現(xiàn)本品的已知雜質(zhì)環(huán)-(L-丙氨酰-L-谷氨酰)超過限度(≤0.05%)，因此本研究對其生產(chǎn)工藝嚴格篩選，制備出穩(wěn)定的樣品。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

日本島津LC-20AT高效液相色譜儀(SPD-20A二極管陣列檢測器、RID-10A泵)，紫外-可見分光光度計，XS205Du型電子分析天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司)、HWS-12電熱恒溫水浴鍋(上海精密科學儀器有限公司)；320-S型酸度計(梅特勒-托利多儀器上海有限公司)。

1.2 試藥

丙氨酰谷氨酰胺(批號140421301；廠家：辰欣藥業(yè)股份有限公司)、環(huán)-(L-丙氨酰-L-谷氨酰胺)對照品(批號：1049962；廠家：瑞士巴亨公司(Bachem))、環(huán)-(L-丙氨酰-L-谷氨酰)對照品(批號：0546372；廠家：瑞士巴亨公司(Bachem))、L-焦谷氨酰-L-丙氨酸對照品(批號：1049580；廠家：瑞士巴亨公司(Bachem))、L-焦谷氨酸對照品(批號：1.2；廠家：EDQM)、D-丙氨酰-L-谷氨酰胺對照品(批號：1034612；廠家：瑞士巴亨公司(Bachem))、丙氨酰谷氨酰胺對照品(批號：X2GBC-MS；廠家：東京化成工業(yè)株式會社(Tokyo Chemical Industry Co.,Ltd))、L-丙氨酰-L-谷氨酸對照品(批號：1034574；廠家：瑞士巴亨公司(Bachem))；活性炭(批號：1001087，廠家：上海興長活性炭有限公司)。

2 制備工藝

2.1 充氮工藝

為提高樣品穩(wěn)定性，選擇在配料和灌封時充入氮氣，以置換存在于溶液中和玻璃瓶上方的氧氣，提高本品的穩(wěn)定性。為此，進行了充氮氣與不充氮氣的比較研究。

充氮氣樣品制備：量取800mL注射用水，持續(xù)充入氮氣，冷卻至50℃，加入丙氨酰谷氨酰胺200g，攪拌使完全溶解。用0.1mol/L鹽酸或者氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值至5.4～6.0，補加注射用水至全量。充氮下灌封于常規(guī)工藝洗凈的50mL輸液瓶中，上塞、軋蓋。115℃滅菌30min。

不充氮氣樣品制備：除配制和灌封全過程不充氮氣外，其他操作同充氮氣樣品的制備。

將充氮與不充氮的滅菌樣品分別在高溫60℃下放置10天，取樣檢測關(guān)鍵質(zhì)量指標，并與0天數(shù)據(jù)比較，結(jié)果見表1。

表1 充氮工藝研究結(jié)果

結(jié)果表明，0時充氮樣品質(zhì)量要好于0時不充氮樣品；60℃放置10天后，充氮樣品與0時相比，pH值、有關(guān)物質(zhì)及含量變化不大，均合格；未充氮樣品與0時相比，pH值及含量基本沒變，但有關(guān)物質(zhì)變化較大，部分雜質(zhì)超限。故本品在配制和灌裝時充氮進行氧氣置換對產(chǎn)品質(zhì)量有明顯的提高，選擇在生產(chǎn)工藝中全程充氮。

2.2 不同pH值篩選

國內(nèi)已上市的丙氨酰谷氨酰胺注射液(50mg∶10g) pH值范圍為5.4～6.0，據(jù)此，對本品在該pH值范圍內(nèi)的穩(wěn)定性進行試驗，以最終確定本品的pH值范圍。

樣品制備方法：量取1 200mL注射用水，持續(xù)充入氮氣，冷卻至50℃，加入丙氨酰谷氨酰胺300g，攪拌使完全溶解。

將配制好的樣品平均分為3份，分別用0.1mol/L鹽酸或氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值至5.4、5.7、6.0，補加注射用水至全量。充氮下灌封于常規(guī)工藝洗凈的50mL輸液瓶中，上塞、軋蓋。115℃滅菌30min，將滅菌后的成品于60℃下放置10天考察樣品的穩(wěn)定性。結(jié)果見表2。

經(jīng)試驗證明，本品在pH 5.4～6.0范圍內(nèi)，經(jīng)115℃滅菌30min得到的成品高溫放置10天后與0時相比：pH值、性狀幾無變化；已知雜質(zhì)有所增大；含量基本沒變；三個不同pH值的樣品平行性良好，因此，選擇本品的pH值為5.4～6.0。

2.3 活性炭用量篩選

樣品制備方法：量取1 200mL注射用水，持續(xù)充入氮氣，冷卻至50℃，加入丙氨酰谷氨酰胺300g，攪拌使完全溶解。用0.1mol/L鹽酸或者氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值至5.4～6.0。

將配制好的樣品平均分為3份，一份不加藥用炭吸附，另外兩份分別加入0.05%(g/mL)、0.08%(g/mL)藥用炭，攪拌15min，脫碳后，補加注射用水至全量，攪勻。過濾后考察半成品的性狀、可見異物、細菌內(nèi)毒素、pH值和含量。結(jié)果見表3。

表2 不同pH值篩選結(jié)果

試驗結(jié)果說明，在配制過程中加0.05%(g/mL)及0.08%(g/mL)藥用炭，所制成樣品的性狀、可見異物符合規(guī)定，對pH值沒有影響，對主藥略有少量吸附，為保證在以后生產(chǎn)過程中產(chǎn)品的質(zhì)量，確定在配制過程中加入0.05%(w/v)活性炭。

表3 活性炭用量篩選

2.4 滅菌溫度選擇

樣品制備方法為：量取1 200mL注射用水，持續(xù)充入氮氣，冷卻至50℃，加入丙氨酰谷氨酰胺300g，攪拌使完全溶解。用0.1mol/L鹽酸或者氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值至5.4～6.0，加入0.75g活性炭，攪拌吸附15min，脫碳后，補加注射用水至全量。

充氮下灌封于常規(guī)工藝洗凈的50mL輸液瓶中，上塞、軋蓋。將樣品分為3份，一份留作半成品，另兩份分別選用115℃滅菌30min，121℃滅菌15min。考察兩種滅菌條件下成品的情況。結(jié)果見表4。

從上述實驗結(jié)果看，121℃、15min下，樣品的含量略有下降，有關(guān)物質(zhì)增加較大，且有大部分已超過限度。115℃、30min滅菌條件與半成品相比，pH值、含量及有關(guān)物質(zhì)變化均不大。故選擇115℃、30min為最終的滅菌溫度。

3 制備樣品初步穩(wěn)定性分析

通過上述篩選，最佳處方關(guān)鍵控制點定位活性炭用量為0.3%，pH值為5.4～6.0，滅菌參數(shù)為115℃、30min，配制及灌裝過程全程充氮，以該處方制備的樣品置于加速條件溫度(40±2)℃、相對濕度(75±5)%及長期條件溫度(25±2)℃、相對濕度(60±10)%進行初步穩(wěn)定性考察。結(jié)果見表5、表6。

表4 滅菌溫度選擇

表5 加速試驗結(jié)果

表6 長期試驗結(jié)果

從以上實驗結(jié)果可以看出該產(chǎn)品在加速6個月內(nèi)、長期12個月內(nèi)pH值、性狀、有關(guān)物質(zhì)及含量均符合規(guī)定，表明該產(chǎn)品質(zhì)量較穩(wěn)定。

4 討論

從氮氣處方篩選結(jié)果看，氮氣對產(chǎn)品質(zhì)量影響較大，因此為保證產(chǎn)品質(zhì)量，實際生產(chǎn)時配制及灌裝過程要全程充氮。從pH值、活性炭及滅菌參數(shù)篩選結(jié)果看，pH值定在5.4～6.0，活性炭用量為0.05%，滅菌參數(shù)為115℃、30min，生產(chǎn)出來的樣品已知雜質(zhì)環(huán)-(L-丙氨酰-L-谷氨酰)均小于0.05%，且樣品較穩(wěn)定，工藝可行。

[1] 劉敬臣，王海棠，王維.丙氨酰—谷氨酰胺對膿毒癥大鼠肺損傷的保護作用[J].中南大學學報：醫(yī)學版,2008,33(12)：1095-1100.

[2] 孫忠民，楊嵐，于楠等.丙氨?！劝滨０吩谟袆?chuàng)機械通氣時防治腸功能衰竭的作用[J].中國醫(yī)師進修雜志,2007,30(11)：53-54.

[3] 楊清茹，張敬浩等.丙氨酰—谷氨酰胺對重癥肺炎患者腸黏膜及免疫功能的影響[J].中外醫(yī)學,2013,32(36)：105-108.

(責任編輯：魏 曉)

Alany Glutamine Injection Prescription Screening and Preliminary Stability Study

Xu Zhiwen1,2,Wang Jing2,Liu Xiaojuan3,Chen Xiaoyun4,Ren Zhelin2

(1.Shandong University School of Pharmacy，Jinan 250012，China；2.Chen xin pharmaceutical co.,Ltd.,Jining 272073，China; 3.Shandong Jinig NO.2.People's hospital,Jining 272049，China；4.Jining jinghua eye hospital,Jining 272000，China)

Objective:Screening the preparation technology of Alany glutamine injection through the scientific method and carries on the preliminary stability study.Methods:To determine the best prescription according to the key control point activated carbon dosage,pH value,the sterilization parameters and nitrogen or not and inspection the stability of the samples.Results:the key control point in optimized formula was the following：the activated carbon dosage was 0.05%,the pH value was 5.4～6.0,and the sterilization parameters was 115℃，30min;The samples prepared in this formula were stable in quality in the accelerated,room temperature storage test under the condition of commercial packing.Conclusion:The prescription is reasonable in design and the injection is stable in quality.

Alany Glutamine Injection;Preparation Technology;Stability

2015-07-07

徐志文(1980-)，男，辰欣藥業(yè)股份有限公司助理工程師，研究方向為制藥工程。

R284.1

A

1673-2197(2015)19-0025-03

10.11954/ytctyy.201519011