厚樸散與香薷散TLC鑒別中展開系統(tǒng)的改進(jìn)研究

吳 蘭，李金超，鞏忠福，趙彥嶺

（1.河北省獸藥監(jiān)察所，石家莊050035；2.中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，北京100081）

厚樸散與香薷散TLC鑒別中展開系統(tǒng)的改進(jìn)研究

吳 蘭1，李金超1，鞏忠福2，趙彥嶺1

（1.河北省獸藥監(jiān)察所，石家莊050035；2.中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，北京100081）

為了研究厚樸散和香薷散現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中含苯展開劑的替代方法，分別以三氯甲烷－乙酸乙酯（10∶1）和環(huán)己烷－乙酸乙酯－異丙醇－甲醇－水－三乙胺（3∶3.5∶1∶1.5∶0.5∶1）為展開劑，開展對厚樸散中厚樸和香薷散中黃連的薄層色譜鑒別試驗。結(jié)果表明，經(jīng)改進(jìn)后的薄層色譜方法斑點清晰，分離效果良好，專屬性強(qiáng)，可避免毒性試劑苯對檢驗人員及環(huán)境的危害。

苯；厚樸散；香薷散；TLC

厚樸散與香薷散是收載于《中華人民共和國獸藥典》（二○一○年版二部）［1］（以下簡稱《中國獸藥典》）的兩個成方制劑。在現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，厚樸散中厚樸和香薷散中黃連的薄層色譜鑒別均采用了含苯的展開系統(tǒng)。按照國際癌癥組織（IARC）對化學(xué)物質(zhì)致癌性的分級，苯為一類致癌物，即確認(rèn)人類致癌物［2］。據(jù)文獻(xiàn)報道，長期接觸低濃度苯及苯系物可引起慢性中毒，苯及苯系物的慢性毒性和職業(yè)危害主要體現(xiàn)在骨髓造血功能的損害、女性生殖機(jī)能的損害、致癌作用、神經(jīng)系統(tǒng)的改變、發(fā)育毒性和刺激皮膚黏膜等［3－5］，苯對環(huán)境也有較大危害［6］。本研究試圖建立更加環(huán)保的展開系統(tǒng)，以替換厚樸散和香薷散現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中厚樸和黃連薄層色譜鑒別的含苯展開系統(tǒng)。

1 材料

1.1 儀器 Linomat5半自動點樣儀，ADC2自動展開儀和TLC Visualizer薄層色譜成像系統(tǒng)均為瑞士卡瑪公司生產(chǎn)；硅膠GF254薄層板和硅膠G薄層板，100 mm×200 mm，厚度0.20～0.25 mm，均為青島海洋化工廠分廠生產(chǎn)；甲醇、三氯甲烷、甲苯、乙酸乙酯、環(huán)己烷、異丙醇和三乙胺等試劑均為分析純。

1.2 試劑與藥品 厚樸酚對照品（批號110729－200411），厚樸酚對照品（批號110730－201011），鹽酸小檗堿對照品（批號110713－200911），黃連（三角葉黃連）對照藥材（批號120913－201109）均由中國食品藥品檢定研究院提供。

厚樸散樣品4批（自配及3批企業(yè)產(chǎn)品），香薷散樣品7批（自配及6批企業(yè)產(chǎn)品），各陰性對照樣品（自配），自配樣品所用原藥材均購于石家莊神威大藥房。

2 方法與結(jié)果

2.1 厚樸散中厚樸的薄層色譜鑒別

2.1.1 供試品溶液的制備 取厚樸散樣品4 g，加甲醇20 mL，浸漬15 min，時時振搖，濾過，濾液濃縮至約5 mL，作為供試品溶液。

2.1.2 對照品溶液的制備 取厚樸酚對照品與和厚樸酚對照品，加甲醇制成每1 mL各含有1 mg的混合溶液，作為對照品溶液。

2.1.3 厚樸陰性對照溶液的制備 取缺厚樸的“厚樸散”陰性對照樣品，照2.1.1項下的方法，制成陰性對照溶液。

2.1.4 薄層鑒別 吸取上述三種溶液各5 μL，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷－乙酸乙酯（10∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（254 nm）下檢視，觀察結(jié)果。

2.1.5 結(jié)果 色譜分離效果良好，斑點清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的兩個斑點。厚樸陰性對照無干擾，方法具專屬性。圖譜見圖1。

2.2 香薷散中黃連的薄層色譜鑒別

圖1 厚樸的薄層色譜鑒別結(jié)果

2.2.1 供試品溶液的制備 取香薷散樣品2 g，加甲醇20 mL，超聲處理15 min，濾過，濾液作為供試品溶液。

2.2.2 對照藥材溶液的制備 取黃連對照藥材0.2 g，照2.2.1項下的方法，制成對照藥材溶液。

2.2.3 對照品溶液的制備 取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作為對照品溶液。

2.2.4 黃連陰性對照溶液的制備 取缺黃連的“香薷散”陰性對照樣品，照2.2.1項下的方法，制成陰性對照溶液。

2.2.5 薄層鑒別 吸取上述四種溶液各2 μL，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷－乙酸乙酯－異丙醇－甲醇－水－三乙胺（3∶3.5∶1∶1.5∶0.5∶1）為展開劑，置用濃氨溶液和展開劑同時飽和30 min的展開缸內(nèi)，展開，取出，晾干。置紫外光燈（365 nm）下檢視，觀察結(jié)果。

2.2.6 結(jié)果 色譜分離效果良好，斑點清晰；供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。黃連陰性對照無干擾，方法具專屬性，圖譜見圖2。

圖2 黃連的薄層色譜鑒別結(jié)果

3 討論

《中國獸藥典》厚樸散中厚樸與香薷散中黃連的TLC鑒別采用的展開劑中均含有毒性較大的試劑苯，本試驗研究改變了展開劑的種類和配比，使用毒性較小的試劑替代了苯，與現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)比較，分離效果更佳，斑點更清晰，且避免了毒性試劑苯對檢驗人員及環(huán)境的危害。

厚樸的薄層色譜鑒別在《中國獸藥典》收載的藥材厚樸和其他含厚樸的制劑［1］中及國內(nèi)現(xiàn)有文獻(xiàn)報道中，使用的展開劑有含苯［7－9］和不含苯［10－12］兩類。在以含苯的溶劑系統(tǒng)為展開劑的方法中，使用的薄層板有硅膠GF254板和硅膠G板兩種，而在以不含苯的溶劑系統(tǒng)為展開劑的方法中，使用的均是硅膠G薄層板；兩種方法中，使用硅膠G薄層板的在展開后均需噴以1%香草醛硫酸溶液加熱顯色，操作較繁瑣，且香草醛硫酸溶液的腐蝕性和刺激性較強(qiáng)。新建立的方法采用不含苯的展開系統(tǒng)，以“三氯甲烷－乙酸乙酯（10∶1）”為展開劑，使用硅膠 GF254薄層板，展開后直接置紫外光燈（254 nm）下檢視，不需噴顯色劑，操作更簡便，效果良好。

在厚樸的薄層色譜鑒別試驗中，曾用不同的展開劑做了篩選試驗，分別考察了甲苯－甲醇（17∶1）、三氯甲烷－甲苯－乙酸乙酯（5∶4∶1）兩種展開系統(tǒng)，結(jié)果表明陰性有干擾，專屬性差，方法不可行，均未采用。

黃連的薄層色譜鑒別在《中國獸藥典》收載的藥材黃連［1］中采用不含苯的展開系統(tǒng)，而在含黃連的制劑［1］中仍采用含苯的展開系統(tǒng)。本試驗對香薷散中的黃連采用黃連藥材的方法進(jìn)行了研究試驗，以不含苯的“環(huán)己烷－乙酸乙酯－異丙醇－甲醇－水－三乙胺（3∶3.5∶1∶1.5∶0.5∶1）”為展開劑，與現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)比較，分離效果更佳，斑點更清晰。

在黃連的薄層色譜鑒別試驗中，對展開缸只用濃氨溶液飽和30 min及用濃氨溶液和展開劑同時飽和30 min進(jìn)行了對比，結(jié)果表明用濃氨溶液和展開劑同時飽和30 min分離效果更佳。

薄層色譜鑒別法是中藥檢測中不可缺少的重要手段，而在薄層色譜鑒別中不可避免的要使用到多種有機(jī)溶劑，其中常用的有機(jī)溶劑以苯的毒性最大，長期接觸對檢驗人員的身體健康勢必會造成傷害，同時也會對環(huán)境造成危害，因此選用低毒的有機(jī)溶劑進(jìn)行檢測，把對人員及環(huán)境的危害盡可能的控制到最低限度，是今后制定新的檢測標(biāo)準(zhǔn)時必須要考慮的首要問題，同時建議對現(xiàn)有獸藥制劑標(biāo)準(zhǔn)的TLC鑒別法中含有苯的展開系統(tǒng)開展替代研究。

［1］中國獸藥典委員會.中華人民共和國獸藥典二○一○年版二部［S］.

［2］中華人民共和國衛(wèi)生部.中華人民共和國國家職業(yè)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GBZ2.1－2007［S］.

［3］趙 霞，賈 光，李秋榮，等.北京市某區(qū)苯及苯系物作業(yè)女工健康狀況調(diào)查分析［J］.慢性病學(xué)雜志，2014，15（3）：167－170.

［4］張 千，紀(jì) 琴，魏 星，等.職業(yè)性苯及苯系物暴露對男性作業(yè)人員血常規(guī)的影響［J］.職業(yè)與健康，2013，29（21）：2785－2787.

［5］羅 潔.1968例接觸低濃度苯及苯系物作業(yè)工人的疾病譜分析［J］.醫(yī)學(xué)動物防制，2012，28（8）：901－903，906

［6］安正陽，范紅俊，李振青.有毒可燃液體－苯及其同系物應(yīng)急救援過程中的環(huán)境保護(hù)［J］.科技資訊，2010（01）：139－140.

［7］崔曉麗，何小東，許立峰.木香順氣丸中木香及厚樸定性鑒別［J］.中成藥，2002，24（5）：398－399.

［8］官福森，門 婧.霍香正氣片中厚樸的薄層色譜鑒別方法的改進(jìn)［J］.黑龍江醫(yī)藥科學(xué)，2001，24（3）：87.

［9］劉紅宇，李 宏.理氣顆粒劑的薄層色譜鑒別［J］.湖南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2000，20（4）：32－33.

［10］趙純玉，饒偉文，覃 曉.厚樸等藥材TLC條件的優(yōu)選試驗［J］.首都醫(yī)藥，2011，06（下）：54－55.

［11］蘇萊曼·哈力克，李 莉，劉曉芳，等.胃爾寧片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究［J］.中草藥，1996，27（7）：400－402.

［12］王聯(lián)政，吳子航，趙長發(fā).厚樸及其偽品的薄層鑒別［J］.佳木斯醫(yī)學(xué)院學(xué)報，1992，15（3）：58.

（編 輯：陳 希）

Study on Improvement of TLC Development System in Powders of Houpo San and Xiangru San

WU Lan1，LI Jin－chao1，GONG Zhong－fu2，ZHAO Yan－ling1
（1.Hebei Provincial Institute of Supervision for Veterinary Drug，Shijiazhuang050035，China；2.China Institute of Veterinary Drug Control，Beijing100081，China）

In order to investigate the method to substitute development system including benzene for thin layer chromatography in current standards of Houpo San and Xiangru San，experiments of thin layer chromatography for officinal magnolia bark in Houpo San and golden thread in Xiangru San were conducted with mixtures of chloroform－ethyl acetate（10∶1） and cyclohexane－ethyl acetate－isopropyl alcohol－methanol－watertriethylamine（3∶3.5∶1∶1.5∶0.5∶1）as development systems，respectively.The results showed that the improved TLC method is not only feasible with clear spots，effective separation and good specificity，but also protecting of exposed persons and environment from harm of benzene.

benzene；Houpo San；Xiangrusan；TLC

2014－12－31

A

1002－1280（2015）04－0021－03

S853.7

吳 蘭，高級工程師，從事獸藥檢測工作。E－mail：wllx643＠126.com