夏枯草注射液對大鼠的長期毒性研究

侯麗麗，程建國，米彥飛，晏永新

（1.山西省獸藥監(jiān)察所，太原030027；2.江西新世紀(jì)民星動物保健品有限公司，南昌330096）

夏枯草注射液對大鼠的長期毒性研究

侯麗麗1，程建國1，米彥飛1，晏永新2

（1.山西省獸藥監(jiān)察所，太原030027；2.江西新世紀(jì)民星動物保健品有限公司，南昌330096）

為了解長期使用夏枯草注射液對機(jī)體的毒性反應(yīng)，通過給大鼠肌內(nèi)注射夏枯草注射液，在給藥4周和停藥2周內(nèi)，觀察大鼠一般行為活動等情況，進(jìn)行血液學(xué)、血液生化學(xué)和主要臟器病理學(xué)檢查，考察夏枯草注射液的長期毒性。結(jié)果顯示，各組大鼠在給藥期間和恢復(fù)期內(nèi)，大鼠一般情況行為活動和糞便等均無異常變化，血液學(xué)、血液生化學(xué)和主要臟器病理學(xué)檢查，均無明顯變化。因此，連續(xù)大鼠肌內(nèi)注射夏枯草注射液未見明顯毒性反應(yīng)，說明夏枯草注射液具有較高的臨床用藥安全性。

夏枯草注射液；大鼠；長期毒性

夏枯草為唇形科植物夏枯草Prunella vulgaris L.的干燥果穗，具有清肝瀉火、明目、散結(jié)消腫之功效，主要用于目赤腫痛、乳癰和瘡腫［1］。夏枯草在古典書籍中均有記載，是常用的清熱瀉火藥，可用于治療溫?。?］。夏枯草主要含有三萜及其苷類、甾醇及其苷類、黃酮類、香豆素、有機(jī)酸、揮發(fā)油及糖類等成分［3－4］，現(xiàn)代藥理研究表明，該藥具有抗菌、抗病毒、抗炎、抗過敏、降壓、降糖及對免疫系統(tǒng)等作用［5－7］。陳壁鋒等［8］研究了夏枯草浸膏的長期毒性，未見夏枯草注射液的長期毒性研究報道。因此，本試驗擬研究夏枯草注射液對大鼠的長期毒性試驗，以了解長期使用夏枯草注射液對機(jī)體的毒性反應(yīng)，指導(dǎo)臨床長期用藥的安全性。

1 材料

1.1 試驗動物 清潔級SD種大鼠80只，體重80～100 g，雌雄各半，由江西中醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供。

1.2 藥品、試劑與儀器 夏枯草注射液（10 mL／支，2 g生藥／mL），江西新世紀(jì)民星動物保健品有限公司，批號：20100501；血清天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、尿素氮（BUN）、肌酐（Crea），濟(jì)南希森美康醫(yī)用電子有限公司；十萬分之一電子分析天平（AB204－N，METTLER TOLEDO）；全自動生化分析儀（Sysmex chemix－180，日本 FURUNO ELECTRIC）；血細(xì)胞計數(shù)儀（SWELAB AC900＋，瑞典Boule Medical AB）。

2 方法

2.1 分組 將大鼠隨機(jī)分為大、中、小劑量組及對照組，每組20只。試驗組給藥劑量為0.2 mL／100 g體重，每天1次肌內(nèi)注射，連續(xù)給藥4周，對照組給予等體積生理鹽水。每天觀察動物精神狀態(tài)、行為、活動、毛色、二便等一般體征，每7 d稱重1次，并依體重變化調(diào)整藥量。給藥結(jié)束后，每組取14只大鼠，禁食12 h，進(jìn)行血液學(xué)指標(biāo)檢查、血液生化學(xué)指標(biāo)檢查，系統(tǒng)尸檢和病理組織學(xué)檢查。各組余下動物停藥進(jìn)行可逆性觀察2周后，同前批動物一樣進(jìn)行處理［9］。

2.2 觀察和檢測指標(biāo)

2.2.1 一般觀察 每天觀察并記錄各組動物一般行為活動等情況。

2.2.2 血液學(xué)指標(biāo)檢查 大鼠尾靜脈取血，用血細(xì)胞計數(shù)儀測定血紅蛋白（HGB）、紅細(xì)胞（RBC）、血小板（PLT）、白細(xì)胞（WBC）及分類。

2.2.3 血液生化學(xué)指標(biāo)檢查 大鼠采血，分離血漿，用生化分析儀測定血清天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、尿素氮（BUN）、肌酐（Crea）等指標(biāo)。

2.2.4 系統(tǒng)尸檢和病理組織學(xué)檢查 對心、肝、脾、肺、腎進(jìn)行稱重及肉眼觀察有無異常，分別計算每100 g動物體重的臟器比重量（g／l00 g體重）即臟器系數(shù)，并對上述臟器用10%福爾馬林固定、切片厚5 μm、H·E染色，用200倍顯微鏡觀察進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。

2.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 20.0進(jìn)行統(tǒng)計分析。數(shù)據(jù)經(jīng)過方差齊性檢驗，用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間差異比較用獨立樣本t檢驗。

3 結(jié)果

3.1 一般觀察 給藥期間和停藥2周內(nèi)，各組大鼠精神、行為、活動、毛色、二便等一般體征均未見異常，也未出現(xiàn)因藥物毒性而致死亡的情況。

3.2 體重 各給藥組，給藥4周與停藥2周后的體重明顯增長，經(jīng)t檢驗，與對照組比較無顯著變化（P＞0.05）（表1、表2）。

表1 夏枯草注射液對大鼠給藥4周體重增長的影響結(jié)果表 （g）（±s）

表1 夏枯草注射液對大鼠給藥4周體重增長的影響結(jié)果表 （g）（±s）

同列數(shù)據(jù)標(biāo)注字母不同者差異顯著，以下表同

組別 0周 1周 2周 3周 4周對照 97.32±3.24a 118.22±5.92a 128.62±5.50a 138.45±8.21a 156.53±19.32a小劑量 97.34±3.01a 113.26±5.64a 127.75±6.56a 135.26±7.58a 159.50±18.16a中劑量 97.35±3.62a 116.29±5.98a 130.38±6.37a 136.42±3.80a 156.72±16.32a大劑量 96.53±3.45a 110.98±5.23a 129.65±8.61a 133.39±6.91a 151.61±16.62a

表2 夏枯草注射液對大鼠停藥2周體重增長的影響結(jié)果表 （g）（±s）

表2 夏枯草注射液對大鼠停藥2周體重增長的影響結(jié)果表 （g）（±s）

組別 0周 1周 2周對照 157.43±17.22a 170.13±16.13a 188.30±15.87a小劑量 159.15±16.25a 174.21±18.63a 189.60±18.32a中劑量 158.56±15.46a 173.14±20.65a 183.50±17.36a大劑量 156.21±16.53a 174.01±20.89a 185.53±11.99a

3.3 血常規(guī)指標(biāo)變化 各給藥組，給藥4周后與停藥2周后的紅細(xì)胞（RBC）計數(shù)、白細(xì)胞（WBC）計數(shù)、白細(xì)胞分類（DC）、血紅蛋白（HGB）含量的檢測結(jié)果和凝血時間，經(jīng)t檢驗，與對照組比較均無明顯變化（P＞0.05）（表3）。

3.4 血清生化指標(biāo)變化 各給藥組，給藥4周后與停藥2周后AST、ALT、Crea、BUN的檢測結(jié)果，經(jīng)t檢驗，與正常對照組比較無明顯變化（P＞0.05）（表4）。

表3 夏枯草注射液對血常規(guī)指標(biāo)的影響結(jié)果表 （±s）

表3 夏枯草注射液對血常規(guī)指標(biāo)的影響結(jié)果表 （±s）

指標(biāo) 時間 n 對照組 小劑量組 中劑量組 大劑量組RBC／（1012／L）給藥4周 14 8.56±1.87a 8.53±189a 8.25±1.23a 8.89±1.67a停藥2周 6 8.54±1.12a 8.31±1.63a 8.64±1.26a 8.36±1.86aHGB／（g·L－1）PLT／（109／L）WBC／（109／L）L／%給藥4周 14 118.30±12.22a 114.32±23.43a 117.32±16.35a 114.20±19.15a停藥2周 6 116.55±12.78a 111.23±11.21a 117.74±35.56a 116.31±18.66a給藥4周 14 556.5±42.44a 575.2±46.03a 599.0±55.13a 560.3±153.43a停藥2周 6 654.3±88.45a 529.3±61.78a 598.3±191.75a 619.7±154.36a給藥4周 14 6.97±1.24a 6.53±1.23a 6.54±1.56a 6.44±1.78a停藥2周 6 6.75±1.68a 6.24±1.87a 6.53±1.51a 6.32±1.86a給藥4周 14 90.01±3.91a 82.23±6.50a 83.54±2.52a 85.76±5.85a停藥2周 6 90.52±4.35a 83.65±6.89a 90.30±4.56a 87.52±5.97aN／%給藥4周 14 6.21±1.17a 7.35±3.52a 7.21±4.31a 7.54±2.85a停藥2周 6 6.81±0.32ab 5.56±4.32b 6.98±7.95a 6.65±3.36ab

表4 夏枯草注射液對血清生化指標(biāo)的影響結(jié)果表 （±s）

表4 夏枯草注射液對血清生化指標(biāo)的影響結(jié)果表 （±s）

指標(biāo) 時間 n 對照組 小劑量組 中劑量組 大劑量組ALT／（U·L－1）給藥4周 14 45.52±6.56a 44.35±5.43a 46.44±1.33a 46.32±15.79a停藥2周 6 53.43±3.32a 53.81±20.12a 49.23±8.50a 48.34±9.78aAST／（U·L－1）BUN／（mmol·L－1）給藥4周 14 98.16±27.12ab 99.53±18.67a 96.65±10.23b 102.31±14.63ab停藥2周 6 96.87±55.23a 105.21±19.23a 98.42±20.14a 101.65±13.87a給藥4周 14 5.01±1.67a 6.78±1.34a 6.33±2.24a 6.44±2.10a停藥2周 6 5.81±1.23a 6.32±1.31a 6.68±2.02a 6.64±1.65aCrea／（μmol·L－1）給藥4周 14 51.87±3.47a 59.34±3.21a 58.83±5.62a 58.31±2.12a停藥2周 6 54.91±3.23a 59.38±7.34a 59.75±6.62a 58.40±2.15a

3.5 系統(tǒng)尸檢和病理組織學(xué) 給藥30 d后與停藥2周后，動物尸體解剖，肉眼逐個觀察各臟器，未見異常變化。取大鼠心、肝、脾、肺、腎分別稱重，計算出臟器系數(shù)，各組之間的臟器系數(shù)無明顯變化（P＞0.05）（表5）。各臟器病理組織學(xué)檢查未發(fā)現(xiàn)異常（圖1）。

表5 夏枯草注射液對臟器系數(shù)的影響結(jié)果表 （±s）

表5 夏枯草注射液對臟器系數(shù)的影響結(jié)果表 （±s）

指標(biāo) 時間 n 對照組 小劑量組 中劑量組 大劑量組心給藥30 d 14 0.371±0.0430a 0.367±0.0213a 0.334±0.0252a 0.343±0.0659a停藥2周 6 0.365±0.0532a 0.360±0.0451a 0.343±0.0879a 0.361±0.0443a肝 脾肺給藥30 d 14 3.361±0.2045a 3.356±0.6150a 3.321±0.5922a 3.225±0.0198a停藥2周 6 3.378±0.3442a 3.398±0.2654a 3.329±0.5632a 3.578±0.7643a給藥30 d 14 0.370±0.3215a 0.329±0.3213a 0.340±0.2100a 0.332±0.0897a停藥2周 6 0.371±0.1223a 0.368±0.2391a 0.345±0.2112a 0.334±0.0768a給藥30 d 14 0.640±0.12357a 0.612±0.1321a 0.632±0.1766a 0.634±0.0754a停藥2周 6 0.630±0.5467a 0.632±0.1124a 0.623±0.1543a 0.623±0.1236a腎給藥30 d 14 0.632±0.48776a 0.632±0.658a 0.623±0.1279a 0.628±0.0974a停藥2周 6 0.683±0.4334a 0.653±0.321a 0.654±0.1349a 0.670±0.1732a

圖1 主要臟器組織病理切片結(jié)果圖

4 討論與小結(jié)

亞慢性毒性試驗是指在試驗動物部分生存期內(nèi)，每日反復(fù)接觸受試物后在一定時期內(nèi)所引起的不良反應(yīng)，目的是在估計和評價某種藥物的毒性時，獲得受試物急性毒性資料后，還需進(jìn)行亞慢性毒性試驗。通過該試驗可獲得一定時期內(nèi)反復(fù)接觸受試物后引起的健康效應(yīng)、受試物作用靶器官和受試物體內(nèi)蓄積能力資料，為臨床設(shè)計動物用藥劑量和一些觀察指標(biāo)提供參考依據(jù)［10－11］。 陳壁鋒等［8］研究表明，給大鼠口服夏枯草浸膏90 d，其外觀體征、糞便、尿液、行為、活動、步態(tài)均未出現(xiàn)異常，未出現(xiàn)動物死亡，體重、攝食量及食物利用率指標(biāo)、血液學(xué)、血液生化學(xué)指標(biāo)與對照組比較差異不顯著性，肝、脾、腎、睪丸的重量及臟／體比值與對照組比較差異不顯著，未見與受試物有關(guān)的病理改變，與本文研究結(jié)果一致。

試驗所采集的數(shù)據(jù)包括健康狀況、體重情況，以及血液學(xué)、血液生化學(xué)等參數(shù)。夏枯草注射液大鼠連續(xù)給藥4周和停藥2周后，大、中、小劑量組均未見明顯的毒性反應(yīng)。試驗大鼠在健康狀況、體重情況，以及可能的急性反應(yīng)、血液學(xué)、血液生化學(xué)等參數(shù)指標(biāo)與對照組相比無顯著性差異，剖檢和組織學(xué)觀察主要內(nèi)臟器官的形態(tài)、組織結(jié)構(gòu)均未發(fā)現(xiàn)異常變化，故未發(fā)現(xiàn)夏枯草注射液明顯的長期毒性。試驗結(jié)果表明夏枯草注射液安全范圍大，具有較高的臨床用藥安全性。

參考文獻(xiàn)：

［1］中國獸藥典委員會.中華人民共和國獸藥典二○一○年版二部［S］.

［2］劉鐘杰，許劍琴.中獸醫(yī)學(xué)（第三版）［M］.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2002：168.

［3］秦 蕊，陸 軍.夏枯草的化學(xué)成分及藥理作用的研究進(jìn)展［J］.中國醫(yī)藥指南，2012，10（36）：435－436.

［4］杜 暉，王春雨.X－5型大孔樹脂分離純化夏枯草中兩種五環(huán)三萜酸［J］.時珍國醫(yī)國藥，2008，19（6）：1416－18

［5］鄧子煜，徐先祥，張小鴻，等.夏枯草藥理學(xué)研究進(jìn)展［J］.安徽醫(yī)學(xué)，2012，33（7）：937－939.

［6］王放銀，段林東，趙良忠.夏枯草抗菌成分的提取和抗菌效果的研究［J］.西南農(nóng)業(yè)大學(xué)報，2004，26（6）：7743.

［7］馬德恩，王竹梅，馬愛英.夏枯草的抗炎作用及其對免疫器官影響的研究［J］.山西醫(yī)藥雜志，1983，12（2）：4－7.

［8］陳壁鋒，趙 敏，楊國光，等.夏枯草急性和亞慢性毒性［J］.中國毒理學(xué)會第六屆全國毒理學(xué)大論文，2013.

［9］陳 奇.中藥藥理研究方法學(xué)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社.2006：110－113.

［10］郭迎春，邸 靜，楊 英，等.人參葉口服液對靶動物肉雞的安全性試驗［J］.中國獸醫(yī)雜志，2011，47（5）：27－29.

［11］易金娥，袁 慧，袁莉蕓，等.阿維菌素微囊對大鼠急性和亞慢性毒性試驗［J］.動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2008，29（2）：27－30.

（編 輯：陳 希）

Effects of Prunella Vulgaris Injection on the Long－term Toxicity of Rats

HOU Li－li1，CHENG Jian－guo1，MI Yan－fei1，YAN Yong－xin2
（1.shanxi Institute of veterinary Drug Control，Taiyuan030027，China；2.Jiangxi new century minxing animal health products co.，LTD，Nanchang330096，China）

In order to understand the toxic reaction and degree on organism of rats by long－term use of prunella vulgaris injection，so as to we can guide the longterm clinical medication safety.Rats were given prunella vulgaris injection by intramuscular route，at the end of 4 weeks and within 2 weeks，observing the general behaviour of rats，using techniques of hematology and biochemical experimental，investigating the long－term toxicity of prunella vulgaris injection.The results showed that the general conditions，activities and faeces of the rats that both in the dosing period and recovery period had no abnormal change，hematology，biochemical experiment and pathological examination of main organs had no obvious abnormal change.Therefore，continuous intramuscular injection of prunella vulgaris had no obvious toxicity，which showed the prunella vulgaris injection were safety.

prunella vulgaris injection；rats；long－term toxicity

2015－02－09

A

1002－1280（2015）04－0051－05

S853.74

侯麗麗，高級獸醫(yī)師，從事中獸藥檢測及方法研究工作。E－mail：kyzp_090＠163.com