射干不同有效成分體外抗病毒藥效學(xué)作用分析

徐 倩

(南昌市洪都中醫(yī)院 制劑中心，江西 南昌 330008)

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射干不同有效成分體外抗病毒藥效學(xué)作用分析

徐 倩

(南昌市洪都中醫(yī)院 制劑中心，江西 南昌 330008)

目的：觀察分析射干各有效成分的體外抗病毒藥學(xué)作用。方法：采用組織細(xì)胞培養(yǎng)方法，觀察分析射干有效成分對(duì)皰疹I(lǐng)、呼吸道合胞病毒、柯薩奇16、腺病毒3型、皰疹Ⅱ及腺病毒7型等病毒的對(duì)抗作用。結(jié)果：經(jīng)分析發(fā)現(xiàn)，除2號(hào)和6號(hào)外，射干各有效成分均沒(méi)有毒界線藥液，同時(shí)對(duì)各病毒致細(xì)胞病變均有抑制作用，如腺病毒3型和7型、柯薩奇16、呼吸道合胞病毒及皰疹等。結(jié)論：除2號(hào)和6號(hào)以外，射干不同有效成分對(duì)各種病毒均具有不同程度的對(duì)抗作用。

抗病毒；射干；有效成分；藥效學(xué)

射干是一種多年生草本植物，其根狀莖呈不規(guī)則塊狀，顏色為黃色或黃褐色，莖直立。該植物須根較多，莖高一般為1～1.5m，為實(shí)心[1-2]。本文就射干不同有效成分的體外抗病毒藥效學(xué)作用進(jìn)行分析，觀察分析射干有效成分對(duì)皰疹I(lǐng)、呼吸道合胞病毒、柯薩奇16、腺病毒3型、皰疹Ⅱ及腺病毒7型等病毒的對(duì)抗作用，具體報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

以序列號(hào)1～12分裝射干不同有效成分，本研究所用受試藥物由我院研究所提供。借助于硅膠柱對(duì)射干進(jìn)行分離，用不同比例的氯仿-甲醛液經(jīng)洗脫獲得。受試藥物中1～11號(hào)由野鳶尾苷元、鳶尾苷元及德鳶尾苷元與次野鳶尾苷元構(gòu)成，即異黃酮苷元混合物；12號(hào)則由德鳶尾苷、鳶尾苷與野鳶尾苷所構(gòu)成，即異黃酮苷混合物。在溫度為120℃及0.1MPa高壓條件下進(jìn)行滅菌，滅菌時(shí)間為20min，分裝儲(chǔ)存于冰箱內(nèi)備用，裝設(shè)容量為5mL，冰箱溫度為4℃。

所用病毒株有皰疹I(lǐng)、呼吸道合胞病毒、柯薩奇16、腺病毒3型、皰疹Ⅱ及腺病毒7型；細(xì)胞株包括非洲綠猴腎細(xì)胞、咽喉癌上皮細(xì)胞及宮頸癌細(xì)胞；試劑主要包含青鏈霉素母液、胎牛血清、TPCK胰酶、HEPES緩沖液、培養(yǎng)基及EDTA胰酶等。儀器設(shè)備有全外排式生物安全柜、二氧化碳培養(yǎng)箱及倒置顯微鏡等。

1.2 方法

(1)細(xì)胞株進(jìn)行3～5天的復(fù)蘇傳代培養(yǎng)，讓其貼壁形成為單層，在折光度和立體感均較強(qiáng)的條件下，利用EDTA胰酶進(jìn)行消化，當(dāng)貼壁細(xì)胞面有針尖樣的小孔，且松動(dòng)處于流動(dòng)態(tài)時(shí)吸盡消化液，再添加相應(yīng)細(xì)胞培養(yǎng)液，使細(xì)胞得以吹散，藍(lán)染色計(jì)數(shù)。將細(xì)胞數(shù)調(diào)至大概3×104/mL，接種96孔的細(xì)胞培養(yǎng)板中，每孔為100μ/L，18～24h后，待細(xì)胞成片切融合度達(dá)80～90%單層再應(yīng)用。

(2)按比例借助細(xì)胞培養(yǎng)液對(duì)1～12號(hào)射干有效成分進(jìn)行稀釋。在96孔培養(yǎng)板中接種細(xì)胞懸液，在二氧化碳含量5%、溫度36.5℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時(shí)間一般為24h，將原培養(yǎng)液倒掉，借助于Hank’s液對(duì)細(xì)胞進(jìn)行清洗。完成上述操作，把已稀釋的各有效成分滴加至所對(duì)應(yīng)且已成為單層的各細(xì)胞株上，放置在溫度為36.5℃的二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5～7天，每日于倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞病變，做好記錄工作。

(3)以10倍梯度降低的方式對(duì)所用病毒進(jìn)行稀釋，濃度為3×104/mL，采取染毒細(xì)胞病變法，把非洲猴腎細(xì)胞、咽喉癌上皮細(xì)胞及宮頸癌細(xì)胞接種于96孔培養(yǎng)板，并放于二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，箱內(nèi)溫度為36.5℃，培養(yǎng)時(shí)間為24h，倒掉培養(yǎng)液并利用Hank’s液對(duì)細(xì)胞進(jìn)行清洗，把所稀釋的各病毒液接種于已成為單層的細(xì)胞板，其中呼吸道合胞病毒與腺病毒3型、7型所接種的細(xì)胞為咽喉癌上皮細(xì)胞，剩余病毒所接種的細(xì)胞為非洲綠猴腎細(xì)胞，放置二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)大約5天，培養(yǎng)溫度為36.5℃，每日于倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞病變。在射干各有效成分對(duì)抗病毒致細(xì)胞病變上，進(jìn)行細(xì)胞病變抑制實(shí)驗(yàn)。

2 結(jié)果

經(jīng)測(cè)定，除2號(hào)和6號(hào)外，射干各有效成分均沒(méi)有毒界線藥液，同時(shí)對(duì)各病毒致細(xì)胞病變均有抑制作用，如腺病毒3型和7型、柯薩奇16、呼吸道合胞病毒及皰疹等。射干各有效成分不同細(xì)胞毒性測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。各病毒測(cè)定不同細(xì)胞半數(shù)感染濃度情況見(jiàn)表2。射干各有效成分對(duì)抗病毒致細(xì)胞病變結(jié)果見(jiàn)表3。

表1 射干各有效成分不同細(xì)胞毒性測(cè)定結(jié)果

3 討論

射干為鳶尾科射干屬植物，其根莖為中藥材射干主要來(lái)源，具有較為長(zhǎng)遠(yuǎn)的藥用歷史，收載于《中國(guó)藥典》，具有散血消腫、清熱解毒及利咽消痰等作用[3]。其抗病毒機(jī)理為扶正祛邪，現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，中草藥抗病毒作用主要經(jīng)病毒繁殖期間吸附、成熟、穿入及膚質(zhì)等環(huán)節(jié)被阻斷而使病毒得到抑制，或經(jīng)機(jī)體免疫能力增強(qiáng)及機(jī)體非特異性、特異性免疫能力的加強(qiáng)抑制病毒。

表2 各病毒不同細(xì)胞板半數(shù)感染劑量測(cè)定結(jié)果

本研究采用病毒先吸附而后加藥的方式，觀察分析射干不同有效成分的抗病毒作用。研究結(jié)果顯示，由野鳶尾苷、鳶尾苷及德鳶尾苷所構(gòu)成的異黃酮苷混合物與由野鳶尾苷元、鳶尾苷元、次野鳶尾苷元及德鳶尾苷元所構(gòu)成的異黃酮苷元混合物大部分成分均具備顯著的體外抗病毒作用，究其原因可能是射干各有效成分經(jīng)病毒成熟、穿入及復(fù)制等環(huán)節(jié)被阻斷，從而發(fā)揮抗病毒的功效。

表3 射干各有效成分對(duì)抗病毒致細(xì)胞病變結(jié)果

[1] 孫國(guó)祥,宋楊,張靜嫻,等.指紋定量法評(píng)估射干抗病毒注射液指紋歸屬度和藥效物質(zhì)工藝收率[J].中南藥學(xué),2009,7(6):446-451.

[2] 李國(guó)信,王光函,姜鴻,等.射干提取物在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)研究[J].中草藥,2010,41(12):2052-2053.

(責(zé)任編輯：李嵐春)

2015-05-14

徐倩(1980-)，江西省南昌市洪都中醫(yī)院主管藥師，研究方向?yàn)橹兴幹苿┧幚矸治黾百|(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

R285

A

1673-2197(2015)18-0009-02

10.11954/ytctyy.201518005