八種蒙藥制劑微生物限度檢查方法驗(yàn)證

鬧鬧爾再

(新疆巴音郭楞蒙古自治州食品藥品檢驗(yàn)所，新疆 庫(kù)爾勒 841000)

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八種蒙藥制劑微生物限度檢查方法驗(yàn)證

鬧鬧爾再

(新疆巴音郭楞蒙古自治州食品藥品檢驗(yàn)所，新疆 庫(kù)爾勒 841000)

目的：利用驗(yàn)證試驗(yàn)，為8種蒙藥制劑制定微生物限度檢查方法。方法：采用常規(guī)法和培養(yǎng)基稀釋法對(duì)5株陽性菌進(jìn)行回收率試驗(yàn)，確定8種蒙藥制劑是否含抑菌成分。結(jié)果：根據(jù)回收率試驗(yàn)結(jié)果，8種蒙藥制劑試驗(yàn)菌的回收率均達(dá)到70.0%以上，符合驗(yàn)證要求。結(jié)論：經(jīng)驗(yàn)證的方法有效去除了8種蒙藥制劑的抑菌成分，可用于制劑的質(zhì)量控制。

蒙藥制劑；微生物限度檢查；驗(yàn)證試驗(yàn)

表5 三七皂苷R1對(duì)SW620結(jié)腸癌細(xì)胞存活的影響

組別藥品濃度(μg·mL-1)吸收值抑制率(%)空白對(duì)照--0.801±0.0380100.00.607±0.023**24.1三七皂苷R150.00.597±0.029**25.425.00.565±0.034**29.312.50.648±0.052**18.9

注：與空白對(duì)照組比較*P<0.05，**P<0.01。

表6 大黃素、蘆薈大黃素對(duì)SW620結(jié)腸癌細(xì)胞存活的影響

組別藥品濃度(μg·mL-1)吸收值抑制率(%)空白對(duì)照--0.866±0.0330100.00.474±0.020**45.3大黃素50.00.486±0.034**43.925.00.788±0.074**9.012.50.871±0.0220100.00.262±0.012**69.7蘆薈大黃素50.00.283±0.021**67.325.00.361±0.035**58.312.50.567±0.057**34.4

注：與空白對(duì)照組比較*P<0.05，**P<0.01。

表7 大黃酸對(duì)SW620結(jié)腸癌細(xì)胞存活的影響

組別藥品濃度(μg·mL-1)吸收值抑制率(%)空白對(duì)照--0.837±0.0270100.00.537±0.047**35.8大黃酸50.00.606±0.027**27.625.00.624±0.015**25.512.50.639±0.033**23.6

注：與空白對(duì)照組比較*P<0.05，**P<0.01。

1 儀器與材料

1.1 儀器(見表1)

表1 儀器

1.2 供試品

調(diào)元大補(bǔ)二十五味丸、沉香八味散、消食十味散、楓香脂十味散、白葡萄七味散、杜鵑十六味散、檀香清肺八味散、小兒清肺八味散等,均來自新疆巴音郭楞蒙古自治州第二人民醫(yī)院。

1.3 培養(yǎng)基、稀釋劑及試液(見表2)

表2 培養(yǎng)基、稀釋劑及試液

1.4 試驗(yàn)用菌種(見表3)

表3 實(shí)驗(yàn)用菌種

實(shí)驗(yàn)用菌種來自中國(guó)食品藥品檢定研究院。

2 方法學(xué)驗(yàn)證與結(jié)果

2.1 菌液制備方法

分別取適量枯草芽孢桿菌、乙型副傷寒沙門菌、大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株轉(zhuǎn)移至10mL滅菌后的營(yíng)養(yǎng)肉湯中，37℃恒溫培養(yǎng)18～24h；取白色念珠菌適量，接種于改良馬丁培養(yǎng)基中，在25℃下恒溫培養(yǎng)24～48h。分別取1mL上述培養(yǎng)物，分別置于盛有9mL無菌生理鹽水溶液的試管中，使其為10-5～10-7的菌懸液[1]。

將黑曲霉轉(zhuǎn)移在改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基上，25℃培養(yǎng)7天，用3mL無菌生理鹽水洗脫孢子，取1mL加入9mL無菌生理鹽水溶液中，使其為10-5～10-7的孢子懸液[1]。

2.2 供試液制備

取樣品10g，置錐形瓶中，加無菌NaCl-蛋白胨緩沖液(pH7.0)至100mL，2 000r/min振搖10min，即得。

2.3 細(xì)菌、霉菌及酵母菌檢查方法驗(yàn)證[1]

2.3.1 平皿法 取“2.2”項(xiàng)下供試液(1∶10)1mL，及“2.1”中的驗(yàn)證用試驗(yàn)菌，分別注入平皿中，按規(guī)定培養(yǎng)并測(cè)回收率；平行做菌液組、稀釋劑對(duì)照組和供試品對(duì)照組[2]。結(jié)果見表4。

2.3.2 培養(yǎng)基稀釋法 取0.2mL“2.2”項(xiàng)下供試液/皿，加入驗(yàn)證菌各10-5～10-7，按照“2.3.1”項(xiàng)下方法進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果見表5。

2.4 控制菌檢查方法的驗(yàn)證[1]

2.4.1 大腸埃希菌 取供試液(1∶10)10mL及1mL 10-5～10-7大腸埃希菌，注入100mL膽鹽乳糖培養(yǎng)基(BL)中，于37℃下培養(yǎng)24h，觀察培養(yǎng)基澄清度的變化；之后取渾濁管中的培養(yǎng)物適量做熒光反應(yīng)與靛基質(zhì)試驗(yàn)。另取適量的培養(yǎng)物劃線接種于MacC平板上，37℃培養(yǎng)24h，觀察其菌落的生長(zhǎng)形態(tài)特征[2]。同時(shí)以金黃色葡萄球菌代替大腸埃希菌，照上述方法進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果見表6。

表4 平皿法接種陽性對(duì)照菌回收率試驗(yàn)結(jié)果 (%)

表5 培養(yǎng)基稀釋法(0.2mL/皿)接種陽性對(duì)照菌回收率試驗(yàn)結(jié)果 (%)

表6 大腸埃希菌檢查法驗(yàn)證

2.4.2 大腸菌群 取供試液(1∶10)1mL及10-5～10-7大腸埃希菌轉(zhuǎn)移至9mL乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)24h，取適量發(fā)酵管中的培養(yǎng)物劃線接種于MacC平板上，37℃培養(yǎng)18～24h，觀察其菌落的生長(zhǎng)形態(tài)特征[1]。同時(shí)將大腸埃希菌金換成黃色葡萄球菌，按上述方法進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果見表7。

表7 大腸菌群檢查法驗(yàn)證

2.4.3 沙門菌 取供試品10g，加200mL的無菌營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，2 000r/min，5min混勻，加入預(yù)先制備好的沙門菌懸液1mL，培養(yǎng)18～24h，取培養(yǎng)物1mL，接種于10mL TTB中培養(yǎng)18～24h。同時(shí)取金黃色葡萄球菌代替沙門菌，同上述方法進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果見表8。

3 討論

微生物限度檢查是藥品安全性檢查的重要項(xiàng)目。由于蒙藥制劑是含有多種成分的復(fù)方制劑，其成分種類繁多復(fù)雜，處方中任一成分均有可能具有抑菌活性，大多數(shù)蒙藥還含有生藥原粉或動(dòng)物藥，可影響蒙藥制劑微生物限度檢查的準(zhǔn)確性，因此需按規(guī)定進(jìn)行大腸菌群、沙門菌檢查方法驗(yàn)證。

從表1中結(jié)果可以看出，通過平皿法驗(yàn)證，白葡萄七味散、杜鵑十六味散、消食十味散、檀香清肺八味散、調(diào)元大補(bǔ)二十五味丸等5種藥品用常規(guī)平皿法驗(yàn)證，可使5株試驗(yàn)菌的回收率均達(dá)到70.0%以上，提示以上5種藥品沒有抗菌作用。楓香脂十味散平皿法回收率試驗(yàn)顯示，采用平皿法可完全回收白色念珠菌、黑曲霉菌和大腸埃希菌，但金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌的回收率很低，分別為6.0%、0%；表明這兩株菌的生長(zhǎng)幾乎完全被抑制，藥物有明顯的抑菌作用。沉香八味散、小兒清肺八味散等2種藥品除了枯草芽孢桿菌外，其他4株菌的回收率超過70%，而枯草芽孢桿菌無法回收，回收率分別為0%、25.0%，藥物有明顯的抑菌作用。以上結(jié)果表明楓香脂十味散、沉香八味散、小兒清肺八味散等3種藥品含抑菌成分，必須采用適當(dāng)?shù)姆椒ㄈコ咕钚裕匦逻M(jìn)行菌落計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證。

從表2中可以看出，為了消除蒙藥制劑中的抑菌成分，本次實(shí)驗(yàn)采用了培養(yǎng)基稀釋法，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明每皿0.2mL可消除抑菌成分對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)的影響。沉香八味散、楓香脂十味散、小兒清肺八味散等3種藥品的陽性對(duì)照菌的回收率均達(dá)到70.0%以上，基本消除抑菌活性。因此培養(yǎng)基稀釋法(每皿0.2mL)可用于以上3種蒙藥制劑的細(xì)菌數(shù)檢查。

從表3至表5可以看出，以上8種蒙藥制劑對(duì)控制菌(大腸埃希菌、大腸菌群、沙門菌)無抑制作用，控制菌檢查可采用常規(guī)法。

4 結(jié)語

調(diào)元大補(bǔ)二十五味丸、消食十味散、白葡萄七味散、杜鵑十六味散和檀香清肺八味散按平皿法進(jìn)行細(xì)菌數(shù)檢查；沉香八味散、楓香脂十味散、小兒清肺八味散采用培養(yǎng)基稀釋法(每皿0.2mL)進(jìn)行細(xì)菌數(shù)檢查；本試驗(yàn)中8種藥品的霉菌和酵母菌菌落數(shù)須用平皿法進(jìn)行檢查，而控制菌的檢查按常規(guī)法即可。本次試驗(yàn)結(jié)果可供藥品檢驗(yàn)部門參考。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2010:附錄79-88.

[2] 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典委員會(huì).衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·蒙藥分冊(cè)[S].1997.

(責(zé)任編輯：尹晨茹)

2015-01-30

鬧鬧爾再(1974-)，女，蒙古族，新疆巴音郭楞蒙古自治州食品藥品檢驗(yàn)所副主任藥師，研究方向?yàn)槭称匪幤窓z驗(yàn)。

R446.5;R915

A

1673-2197(2015)12-0014-03

10.11954/ytctyy.201512006

蒙醫(yī)藥學(xué)是我國(guó)甚至世界傳統(tǒng)醫(yī)藥學(xué)的重要組成部分；蒙醫(yī)藥歷史悠久，療效確切，作用緩和，在民間被廣泛應(yīng)用。調(diào)元大補(bǔ)二十五味丸、沉香八味散、消食十味散、楓香脂十味散、白葡萄七味散、杜鵑十六味散、檀香清肺八味散、