復(fù)方瓜子金苦味物質(zhì)矯味研究

★ 何華山 劉旭海 余銀芳 (.國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局專利局專利審查協(xié)作江蘇中心 江蘇 蘇州5000;.江中藥業(yè)股份有限公司 南昌330096)

復(fù)方瓜子金含片是由瓜子金、大青葉、白花蛇舌草、野菊花、紫花地丁及海金沙六味中藥所制成的復(fù)方制劑。具有清熱利咽，散結(jié)止痛，祛痰止咳之功效;用于風(fēng)熱襲肺或痰熱雍肺所致的咽部紅腫、咽痛、發(fā)熱、咳嗽，急性咽炎、慢性咽炎急性發(fā)作及上呼吸道感染見(jiàn)上述證侯者［1］。原制劑味苦、口感差，不利于口含服用，致使患者依從性差。本課題運(yùn)用現(xiàn)代制藥技術(shù)，對(duì)本品的制劑工藝進(jìn)行了改進(jìn)，確定了最佳矯味工藝。

1 儀器與試藥

Agilent 1200/1100高效液相色譜儀(自動(dòng)進(jìn)樣器，DAD檢測(cè)器);UV-1206紫外分光光度計(jì)(日本SHIMADZU);瓜子金、大青葉、白花蛇舌草等六味藥材(安徽省亳州市中信中藥飲片廠)，經(jīng)江西中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室范崔生教授鑒定其來(lái)源，經(jīng)檢測(cè)符合《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版一部有關(guān)各項(xiàng)規(guī)定)。

2 方法與結(jié)果

2.1 苦味溯源研究 復(fù)方瓜子金含片由瓜子金、大青葉、白花蛇舌草、野菊花、紫花地丁及海金沙6味藥組成，味道極苦，采用單純的矯味方法并不能掩去苦味。因此，本實(shí)驗(yàn)首先對(duì)復(fù)方苦味來(lái)源進(jìn)行追蹤，以明確苦味來(lái)源，從而對(duì)苦味藥材采用有針對(duì)性方法進(jìn)行矯味。

按復(fù)方處方量分別稱取瓜子金37.5g、大青葉87.5g、白花蛇舌草62.5g、野菊花62.5g、紫花地丁50g及海金沙50g，分別置于6個(gè)圓底燒瓶中，加8倍量60%乙醇回流提取2次，每次1.5h，合并提取液，過(guò)濾，回收乙醇，按處方比例進(jìn)行濃縮，靜置冷卻至室溫。由于人類對(duì)香、甜、淡、苦等口感的分辨力極強(qiáng)，僅需對(duì)提取液進(jìn)行簡(jiǎn)單口嘗即能分辨各藥物的口感，因此將各藥物提取液經(jīng)10名志愿者口嘗即可鑒定苦味來(lái)源。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 苦味溯源考察結(jié)果表

從考察結(jié)果中可看出，復(fù)方瓜子金含片的苦味主要來(lái)自野菊花。其他5味藥材單提液，則味淡，苦味輕。因此，可將野菊花單獨(dú)提取，對(duì)野菊花提取物進(jìn)行掩味［2］，另將瓜子金、大青葉、白花蛇舌草、紫花地丁及海金沙5味藥材合提。

2.2 野菊花提取物矯味工藝研究

2.2.1 矯味方法的選擇 目前，苦味抑制方法多樣，但就其矯味機(jī)理，主要有以下幾點(diǎn):1、對(duì)苦味進(jìn)行掩蓋，如加入甜味劑等;2、對(duì)味蕾進(jìn)行麻痹，如加入薄荷腦，檸檬酸等;3、降低苦味物質(zhì)在唾液中的溶解度，如對(duì)苦味物質(zhì)進(jìn)行包衣，或者制成微囊等;4、改變苦味物質(zhì)的物理化學(xué)形態(tài)，如包合法利用苦味物質(zhì)進(jìn)入β-環(huán)糊精的空穴結(jié)構(gòu)內(nèi)，從而掩蓋苦味［2］。由于復(fù)方瓜子金含片是一類用于局部治療咽炎的制劑，要求藥物能夠在口腔內(nèi)部釋放，從而發(fā)揮藥效，而包衣法制備的片劑在溶化完包衣層之后，苦味依然存在，因此不采用包衣法矯味。

由于人們對(duì)苦味的分離閾是極低的，即使微摩爾也可被感覺(jué)到，為使矯味實(shí)驗(yàn)更為精準(zhǔn)，將口感指標(biāo)分為4級(jí)，“-”表示口感較差，苦味較濃，難以忍受;“+”表示口感一般，感受到苦味，不想忍受;“++”表示口感較好，感受到苦味，可以忍受;“+++”表示口感好，沒(méi)有任何苦味。

本實(shí)驗(yàn)以口感為考察指標(biāo)，對(duì)矯味劑法、麻醉味蕾法、包合法進(jìn)行篩選，方法如下:

(1)矯味劑法:取藥粉適量(過(guò)100目篩)，選用常用的矯味劑蔗糖、蛋白糖、三氯蔗糖、乳糖、安賽蜜、阿斯巴甜進(jìn)行篩選。試驗(yàn)方法:分別按常量加入以上六種矯味劑，經(jīng)10名志愿者口嘗，反復(fù)調(diào)節(jié)用量，進(jìn)行篩選。

(2)麻痹味蕾法:取藥粉適量(過(guò)100目篩)，選用薄荷腦、檸檬酸作為麻痹劑，分別按常量加入2種麻痹劑，經(jīng)10名志愿者口嘗，反復(fù)調(diào)節(jié)用量，進(jìn)行篩選。

(3)包合法:取藥粉適量(過(guò)100目篩)，按一定方法制備總黃酮含量確切的包合物，經(jīng)10名志愿者口嘗，反復(fù)調(diào)節(jié)用量，進(jìn)行篩選。

試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 野菊花提取物矯味方法考察結(jié)果表

結(jié)果表明，包合法對(duì)野菊花提取物的矯味作用效果較好，這是因?yàn)橐熬栈ㄌ崛∥镞M(jìn)入β-環(huán)糊精的空穴結(jié)構(gòu)內(nèi)，改變了其物理化學(xué)形態(tài)，苦味得到很好的改善;相比于口含包衣制劑由于包衣層溶化而直接暴露藥物成分，導(dǎo)致矯味效果差的缺點(diǎn)，包合法由于能夠改變野菊花提取物的物理化學(xué)形態(tài)，從而能夠達(dá)到改善苦味和使有效成分在口腔內(nèi)部進(jìn)行吸收的雙重效果。而矯味劑及味蕾麻痹劑對(duì)野菊花的矯味作用并不明顯，原因是人們對(duì)苦味的分離閾是極低的，即使微摩爾也可被感覺(jué)到，而且苦味的感覺(jué)也比甜味持續(xù)的時(shí)間長(zhǎng)，單純的矯味劑并不能掩蓋野菊花提取物的苦味。因此，本研究采用包合法對(duì)野菊花提取物苦味進(jìn)行掩蓋。

2.2.2 包合物制備方法考察 包合物的制備方法有飽和水溶液法、超聲法、膠體磨法、冷凍干燥法、噴霧干燥法等。本研究根據(jù)現(xiàn)有生產(chǎn)設(shè)備及實(shí)驗(yàn)條件，對(duì)飽和水溶液法和膠體磨法進(jìn)行比較。

(1)飽和水溶液法［3］取β-環(huán)糊精8g加100mL蒸餾水，水浴加熱使其溶解，降至50℃時(shí)，加入1g野菊花提取物(野菊花提取物溶于適量60%乙醇中)，用磁力攪拌器攪拌3h，冷藏24h，抽濾，沉淀物于60℃干燥，收集包合物。

(2)膠體磨法［4］取β-環(huán)糊精8g加10mL蒸餾水，研磨使之成糊狀物，稱取1g野菊花提取物，于膠體磨中研磨30min，冷藏24h，抽濾，沉淀物于60℃干燥，收集包合物。

將上述兩種方法制得的包合物進(jìn)行比較，測(cè)定其包合物收得率、總黃酮包合率，結(jié)果見(jiàn)表3。結(jié)果表明:膠體磨法法制備包合物，包合物得率與包合率均比飽和水溶液法高，這主要是因?yàn)樵陲柡退芤喊线^(guò)程中，由于用水量較大，野菊花提取物的水溶性較大，導(dǎo)致總黃酮不易進(jìn)入β-環(huán)糊精的環(huán)狀中空?qǐng)A筒型的結(jié)構(gòu)中，使得包合率及包合物收得率低于膠體磨法。因此，本研究確定采用膠體磨法法對(duì)野菊花提取物進(jìn)行包合。

表3 兩種野菊花提取物包合方法的比較

2.2.3 膠體磨法包合工藝條件的優(yōu)化 (1)β-環(huán)糊精與野菊花提取物的比例

分別稱取β-環(huán)糊精6，8，10，12g四份，置研缽中，分別加入等量蒸餾水，即6，8，10，12mL，研磨使之成糊狀物。精密加入1g野菊花提取物，繼續(xù)研磨40min，冷藏放置24h，抽濾，抽干，再分別用5mL蒸餾水洗滌包合物，收集濾渣，置60℃烘箱中烘干，稱重并按測(cè)定法測(cè)定總黃酮含量。分別計(jì)算總黃酮收得率和包合物收得率，結(jié)果見(jiàn)表4。結(jié)果表明:隨著β-環(huán)糊精與野菊花提取物的配比的升高，總黃酮的包合率及包合物收得率變化呈現(xiàn)出拋物線走向，原因是隨著β-環(huán)糊精的量的增加，野菊花提取物包合越完全，但當(dāng)β-環(huán)糊精與野菊花提取物的配比到達(dá)8倍時(shí)，基本包合完全，再隨著β-環(huán)糊精的增加，已經(jīng)沒(méi)有野菊花提取物進(jìn)入β-環(huán)糊精空腔中。因此，本研究確定β-環(huán)糊精與野菊花提取物的配比為8∶1。

表4 β-環(huán)糊精與野菊花提取物的配比的考察

(2)加水量的考察

稱取β-環(huán)糊精8g四份置研缽中，按配比為0.8，1，1.2，1.5，分別加入6.4，8，9.6，12mL蒸餾水，研磨使之成糊狀物。精密加入1g野菊花提取物，繼續(xù)研磨40min，5℃冰箱中放置24h，抽濾，抽干，再分別用5mL蒸餾水洗滌包合物，收集濾渣，置60℃烘箱中烘干，稱重并按測(cè)定法進(jìn)行紫外-可見(jiàn)分光光度法測(cè)定總黃酮含量。分別計(jì)算總黃酮收得率和包合物收得率，結(jié)果見(jiàn)表5。結(jié)果表明:包合物收得率隨著加水量的增加而緩慢降低，原因是加水量的增加使更多的包合物溶解于水中;而總黃酮包合率呈現(xiàn)出拋物線走向，到β-環(huán)糊精:水為1∶1時(shí)，包合率最高，達(dá)到77.31%，因此本研究確定β-環(huán)糊精與水比例為1∶1。

表5 包合加水量的考察

(3)包合時(shí)間考察

稱取β-環(huán)糊精8g四份，加8mL蒸餾水，研磨使之成糊狀物，分別稱取1g野菊花提取物，于膠體磨中分別研磨40，50，60，70min，冷藏放置24h，抽濾，抽干，再分別用5mL蒸餾水洗滌包合物，收集濾渣，置60℃烘箱中烘干，稱重并按測(cè)定法進(jìn)行紫外-可見(jiàn)分光光度法測(cè)定總黃酮含量。分別計(jì)算總黃酮收得率和包合物收得率。結(jié)果見(jiàn)表6。結(jié)果表明:隨著包合時(shí)間的增加，野菊花提取物包合率和包合物收得率兩項(xiàng)指標(biāo)都有一定的提高，但當(dāng)包合時(shí)間達(dá)到60min后，包合率和包合物收得率基本趨于穩(wěn)定。因此，確定野菊花提取物包合工藝包合時(shí)間為60min。

(4)結(jié)論

通過(guò)對(duì)野菊花提取物包合工藝的主要影響因素β-環(huán)糊精與野菊花提取物的配比、包合溫度以及包合時(shí)間三者進(jìn)行單因素考察，確定野菊花提取物包合工藝最佳條件為:β-環(huán)糊精:野菊花提取物(g∶g)=8∶1、β-環(huán)糊精:水(g∶mL)=1∶1、包合時(shí)間為60min。

表6 包合時(shí)間的考察

2.2.4 野菊花提取物包合工藝驗(yàn)證試驗(yàn) 為考察該野菊花提取物包合工藝的穩(wěn)定性，進(jìn)行3次平行試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表7。結(jié)果表明:由上表可知，野菊花提取物包合率和包合物收得率兩項(xiàng)指標(biāo)都較穩(wěn)定，兩者RSD＜3%。因此，表明該野菊花提取物包合工藝穩(wěn)定可行。所得野菊花包合物口感好，完全去除了原野菊花的苦味。

表7 包合工藝驗(yàn)證試驗(yàn)(n=3)

2.3 含片制劑 以甘露醇為填充劑、阿斯巴甜為甜味劑、薄荷腦為清涼劑、硬脂酸鎂為潤(rùn)滑劑、30%乙醇溶液為潤(rùn)濕劑，混以野菊花包合物和其余五味藥物浸膏粉，制備得到的復(fù)方瓜子金含片很好的掩蓋了含片中的苦味，具有口感好，便于服用的特點(diǎn)。

3 討論

本研究首先對(duì)處方中六味藥材進(jìn)行苦味溯源，發(fā)現(xiàn)其苦味主要來(lái)自野菊花，因此將野菊花另提處理，提取物經(jīng)精制后，采用β-環(huán)糊精對(duì)野菊花提取物進(jìn)行包合，野菊花提取物經(jīng)包合后，能夠掩蓋野菊花濃烈的苦味，使矯味工藝易于進(jìn)行，改善含片口感，提升產(chǎn)品品質(zhì)。

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