CCK-8對(duì)足底電擊誘導(dǎo)的嗎啡CPP重燃的影響

賈　慧，劉　濤，文　迪，孫東磊，臧國慶，于　峰，閆玉仙，馬春玲

(1.武警后勤學(xué)院，天津　300309;2.河北醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院法醫(yī)學(xué)系，河北省法醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河北石家莊　050017;3.云南省第二人民醫(yī)院急診內(nèi)科，云南昆明　650021)

?

CCK-8對(duì)足底電擊誘導(dǎo)的嗎啡CPP重燃的影響

賈慧1，2，劉濤3，文迪2，孫東磊2，臧國慶2，于峰2，閆玉仙1，馬春玲2

(1.武警后勤學(xué)院，天津300309;2.河北醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院法醫(yī)學(xué)系，河北省法醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河北石家莊050017;3.云南省第二人民醫(yī)院急診內(nèi)科，云南昆明650021)

摘要:目的建立嗎啡條件性位置偏愛(CPP)模型，觀察不同劑量的外源性CCK-8對(duì)足底電擊誘導(dǎo)的嗎啡CPP重燃的影響，并探討其相關(guān)機(jī)制。方法建立足底電擊誘導(dǎo)的嗎啡CPP重燃模型，在CPP重燃前給予側(cè)腦室注射CCK-8(0.1、1 μg)，以觀察外源性CCK-8對(duì)足底電擊誘導(dǎo)嗎啡CPP重燃的影響。另外，CPP重燃前共同給予側(cè)腦室注射CCK-8和CCK受體拮抗劑(CCK1受體拮抗劑L-364，718、CCK2受體拮抗劑L-365，260)、CCK-8和阿片受體拮抗劑(非選擇性阿片受體拮抗劑納洛酮、高選擇性μ阿片受體拮抗劑CTAP)，以探討CCK-8抑制足底電擊誘導(dǎo)嗎啡CPP重燃的相關(guān)機(jī)制。結(jié)果①足底電擊成功重燃CPP的表達(dá)，并且0.1和1 μg CCK-8有效抑制了CPP重燃過程。②CCK1受體拮抗劑L-364，718和阿片受體拮抗劑納洛酮、CTAP均可阻斷CCK-8對(duì)足底電擊誘導(dǎo)嗎啡CPP重燃的抑制作用。結(jié)論CCK-8可以通過CCK1受體抑制足底電擊誘導(dǎo)的嗎啡CPP重燃，并且這種作用與阿片受體相關(guān)。

關(guān)鍵詞:嗎啡;八肽膽囊收縮素;膽囊收縮素受體;復(fù)吸;條件性位置偏愛;內(nèi)源性阿片肽

阿片依賴是一種慢性復(fù)發(fā)性腦病，以強(qiáng)迫用藥、停藥后出現(xiàn)戒斷綜合癥和復(fù)吸等為主要特征［1］。最近研究認(rèn)為，許多非阿片受體作用系統(tǒng)可能是阿片依賴防治中的重要靶點(diǎn)。膽囊收縮素(cholecystokinin，CCK)是一種典型的神經(jīng)肽，廣泛存在于中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)，發(fā)揮多種生物學(xué)功能［2］。本室以往研究發(fā)現(xiàn)，側(cè)腦室給予不同劑量的CCK-8干預(yù)可減輕納洛酮引起的急性催促戒斷癥狀［3］、抑制嗎啡誘導(dǎo)大鼠條件性位置偏愛(conditoned place preference，CPP)的形成［4］，但是其對(duì)應(yīng)激等因素誘導(dǎo)CPP重燃過程的作用尚不明確。本研究將建立足底電擊誘導(dǎo)的嗎啡CPP重燃實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，觀察不同劑量CCK-8對(duì)足底電擊誘導(dǎo)嗎啡CPP重燃的作用，并探討其相關(guān)機(jī)制。

1　材料與方法

1.1藥品和試劑鹽酸嗎啡(morphine hydrochloride)為沈陽第一制藥廠產(chǎn)品;八肽膽囊收縮素(cholecystokinin，CCK-8)、納洛酮(naloxone)和CTAP (D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Arg-Thr-Pen-Thr-NH2)均購自美國Sigma公司，CCK1受體拮抗劑組L-364，718和CCK2受體拮抗劑組L-365，260購自英國Tocris公司。

1.2動(dòng)物清潔級(jí)健康♂Wistar大鼠，體質(zhì)量190～210 g，由河北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，室溫(22±1)℃，濕度50%，自然晝夜循環(huán)非直接光照條件生活，自由攝食、飲水。

1.3大鼠腦立體定位及腦室注射首先用40 mg ·kg－1戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉大鼠，而后將其固定在大鼠腦立體定位儀上，核團(tuán)定位以前囟為參照零點(diǎn)，確定一側(cè)核團(tuán)的位置后，用微型牙科鉆打孔，將微量注射套管(外徑0.6 mm，內(nèi)徑0.4 mm)插入腦內(nèi)(AP-1.67; ML+ 0.92; DV-3.10)，并用牙科水泥將其固定于顱骨表面。手術(shù)完畢后預(yù)防性給予抗生素3 d。注射時(shí)插入內(nèi)注射管(外徑0.4 mm，內(nèi)徑0.25 mm)，連接PE管和微量注射器進(jìn)行注射。手術(shù)后大鼠單籠飼養(yǎng)7 d后開始實(shí)驗(yàn)，側(cè)腦室注射體積2 μL，注射速度0.5 μL·min－1，注射完后留針5 min。實(shí)驗(yàn)完畢后通過套管注射1 μL 0.1%臺(tái)盼藍(lán)，觀察腦室是否藍(lán)染，剔除定位不準(zhǔn)確動(dòng)物的數(shù)據(jù)。

1.4大鼠條件性位置偏愛

1.4.1大鼠條件性位置偏愛測(cè)試系統(tǒng)大鼠條件性位置偏愛測(cè)試系統(tǒng)為上海吉量科技有限公司產(chǎn)品，包括條件位置偏愛測(cè)試箱、視頻接收系統(tǒng)及計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)。測(cè)試箱由大小相同的兩個(gè)箱體(內(nèi)徑:長(zhǎng)×寬×高，30 cm×30 cm×40 cm)和一個(gè)中間箱(內(nèi)徑:長(zhǎng)×寬×高，8 cm×30 cm×40 cm)組成。實(shí)驗(yàn)環(huán)境要求隔音、隔光，充分排除外界因素對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的干擾。

1.4.2條件位置偏愛分(CPP score)記錄15 min內(nèi)動(dòng)物在兩箱的活動(dòng)時(shí)間，條件位置偏愛分為兩箱活動(dòng)時(shí)間之差。

1.4.3嗎啡誘導(dǎo)CPP的建立(無偏設(shè)計(jì)，見Fig 1A)第1階段(d 1) :預(yù)適應(yīng)期。使動(dòng)物適應(yīng)偏愛箱兩次(8:00和16:00)，每次15 min，剔除偏愛分大于150 s的動(dòng)物。將符合條件的動(dòng)物按隨機(jī)對(duì)照及對(duì)等平衡的原則進(jìn)行分組，保證每組10～12只動(dòng)物，平均分配至左、右兩箱作為偏愛側(cè)進(jìn)行訓(xùn)練。第2階段(d 2～8) :形成期，共7 d。動(dòng)物每天接受兩次訓(xùn)練任務(wù)，間隔6 h。給予皮下注射10 mg·kg－1嗎啡后放入偏愛箱，關(guān)閉偏愛箱的隔門，每次訓(xùn)練45 min。具體程序: d 1上午為伴藥訓(xùn)練，下午為非伴藥訓(xùn)練; d 2上午非伴藥訓(xùn)練，下午為伴藥訓(xùn)練，依此類推。第3階段(d 9) :表達(dá)期。訓(xùn)練結(jié)束后d 2 8:00進(jìn)行CPP測(cè)試，記錄并計(jì)算CPP得分。第4階段(d 10～20) :消退期。大鼠不給任何藥物處理(自然熄滅)，每5天進(jìn)行1次測(cè)試觀察位置偏愛是否消失，約需10d。第5階段(d 21) :重燃期(復(fù)吸)。各組大鼠均給予足底電擊(強(qiáng)度:0.5 mA，每次0.5 s，間隔40 s) 15min后，再次記錄15 min內(nèi)大鼠在左右兩箱的停留時(shí)間，觀察CPP效應(yīng)是否重建。

1.5實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及分組

1.5.1足底電擊誘導(dǎo)的CPP重燃模型的建立實(shí)驗(yàn)分為鹽水對(duì)照組和嗎啡組。大鼠均按“1.4.3”中程序給藥及訓(xùn)練，在條件性訓(xùn)練期，嗎啡組給予皮下注射10 mg·kg－1嗎啡后進(jìn)行條件化訓(xùn)練，鹽水組注射等體積生理鹽水。重燃期給予足底電擊后進(jìn)行CPP測(cè)試，記錄并計(jì)算CPP得分。

1.5.2外源性CCK-8對(duì)足底電擊誘導(dǎo)嗎啡CPP重燃的影響按“1.4.3”第1～4階段程序給藥及訓(xùn)練，在條件性訓(xùn)練期所有大鼠均給予皮下注射10 mg·kg－1嗎啡后訓(xùn)練。表達(dá)測(cè)試時(shí)不給予任何藥物放入偏愛箱，打開隔門，測(cè)試15 min內(nèi)在左、右兩箱的停留時(shí)間，按照CPP得分隨機(jī)分組分為嗎啡+鹽水組、嗎啡+不同劑量(0.1、1 μg) CCK-8組。第5階段重燃前各組大鼠分別側(cè)腦室注射鹽水(2 μL) 或CCK-8(0.1、1 μg) 15 min之后，立即給予足底電擊，完成后立即放入偏愛箱，記錄并計(jì)算CPP得分。

Fig 1 Model establishment of morphine-induced conditioned place preference (CPP)

1.5.3CCK-8抑制足底電擊誘導(dǎo)的嗎啡CPP重燃的受體機(jī)制實(shí)驗(yàn)分為嗎啡+ CCK-8(1 μg)+ DMSO組、嗎啡+ CCK-8+ CCK1受體拮抗劑(L-364，718，10 μg)組、嗎啡+ CCK-8+ CCK2受體拮抗劑(L-365，260，10 μg)組，在CPP復(fù)燃測(cè)試前15 min側(cè)腦室共同給予CCK-8及CCK受體拮抗劑，以探討CCK-8抑制足底電擊誘導(dǎo)的嗎啡CPP重燃的受體機(jī)制;同時(shí)設(shè)置嗎啡+ CCK1受體拮抗劑組、嗎啡+ CCK2受體拮抗劑組，測(cè)試前15 min單獨(dú)給予CCK受體拮抗劑，以觀察CCK受體拮抗劑本身對(duì)足底電擊誘導(dǎo)的嗎啡CPP重燃的影響。

1.5.4CCK-8通過上調(diào)內(nèi)源性阿片肽抑制足底電擊誘導(dǎo)的CPP重燃實(shí)驗(yàn)分為嗎啡+ CCK-8(1 μg)+鹽水組、嗎啡+ CCK-8+納洛酮(5 μg)組、嗎啡+ CCK-8+ CTAP (10 μg)組，在CPP復(fù)燃測(cè)試前15min側(cè)腦室共同給予CCK-8及非選擇性阿片受體拮抗劑納洛酮或高選擇性μ阿片受體拮抗劑CTAP進(jìn)行干預(yù)，以探討CCK-8是否可以通過上調(diào)內(nèi)源性阿片肽系統(tǒng)抑制足底電擊誘導(dǎo)的CPP重燃;并同時(shí)設(shè)置嗎啡+納洛酮組、嗎啡+ CTAP組，測(cè)試前15min單獨(dú)給予納洛酮或CTAP，以觀察納洛酮或CTAP本身的作用。

2　結(jié)果

2.1足底電擊誘導(dǎo)的CPP重燃模型的建立按照本實(shí)驗(yàn)中的方法成功建立了條件位置偏愛模型(F1，7=97.81，P＜0.01，F(xiàn)ig 1B)，給予10 mg·kg－1嗎啡皮下注射后進(jìn)行條件位置偏愛訓(xùn)練，CPP得分與訓(xùn)練前相比明顯增加(P＜0.01) ;不給予任何藥物處理及訓(xùn)練自然熄滅后，條件位置偏愛成功消退，CPP得分明顯下降(P＜0.01)，恢復(fù)至訓(xùn)練前水平;給予足底電擊15 min后，重新建立條件位置偏愛(P＜0.01)。

2.2外源性CCK-8對(duì)足底電擊誘導(dǎo)嗎啡CPP重燃的影響建立大鼠條件位置偏愛模型，并自然熄滅10 d，給予足底電擊進(jìn)行重燃前分別側(cè)腦室注射生理鹽水或CCK-8(0.1、1 μg)，再次進(jìn)行CPP測(cè)試。結(jié)果發(fā)現(xiàn)(Fig 2)，足底電擊成功重燃CPP的表達(dá)，并且CCK-8有效抑制了嗎啡CPP重燃過程(F2，26=16.411，P＜0.01)，采用Bonferroni法進(jìn)行組間比較后發(fā)現(xiàn)，與鹽水對(duì)照組(0 μg CCK-8組)相比，0.1 μg和1 μg CCK-8明顯降低了足底電擊重燃后的CPP得分(P＜0.01)。

Fig 2 CCK-8 (0.1，1 μg) significantly inhibited the foot shock-primed reinstatement of morphine-induced CPP.

2.3CCK-8抑制足底電擊誘導(dǎo)嗎啡CPP重燃的相關(guān)機(jī)制

2.3.1CCK1受體拮抗劑阻斷CCK-8對(duì)足底電擊誘導(dǎo)CPP重燃的抑制作用分別用CCK1受體拮抗劑L-364，718或CCK2受體拮抗劑L-365，260與CCK-8共同干預(yù)，以探討CCK-8抑制足底電擊誘導(dǎo)嗎啡CPP重燃的受體機(jī)制(Fig 3)。結(jié)果顯示，Mor+ CCK-8+ L-364，718組與Mor+ CCK-8+ DMSO組相比，L-364，718能夠明顯阻斷CCK-8的作用(P＜0.01)，而Mor+ CCK-8+ L-365，260組與Mor+ CCK-8+ DMSO組相比差異無顯著性(P＞0.05)。但是，與CPP重燃后水平相比，CCK2受體拮抗劑L-365，260單獨(dú)作用，也可以抑制足底電擊誘導(dǎo)的CPP重燃(P＜0.01)。結(jié)果表明，外源性CCK-8是通過CCK1受體抑制足底電擊誘導(dǎo)的CPP重燃，而內(nèi)源性CCK可能通過CCK2受體促進(jìn)足底電擊誘導(dǎo)的嗎啡CPP重燃。

Fig 3 CCK1 receptor antagonist L-364，718 blocked the inhibitory effect of CCK-8 on foot shock-primedreinstatement of morphine-induced CPP

2.3.2阿片受體拮抗劑阻斷CCK-8對(duì)足底電擊誘導(dǎo)CPP重燃的抑制作用為探討CCK-8是否可以通過上調(diào)內(nèi)源性阿片肽系統(tǒng)抑制足底電擊誘導(dǎo)嗎啡CPP重燃，我們?cè)贑PP重燃測(cè)試前15 min側(cè)腦室共同給予CCK-8及非選擇性阿片受體拮抗劑納洛酮或高選擇性μ阿片受體拮抗劑CTAP進(jìn)行干預(yù)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，納洛酮或CTAP和CCK-8共同作用，均能阻斷CCK-8的作用(P＜0.01)，納洛酮和CTAP本身對(duì)足底電擊誘導(dǎo)嗎啡CPP重燃無明顯影響(P＞0.05)，表明外源性CCK-8抑制足底電擊誘導(dǎo)嗎啡CPP重燃的作用可能與內(nèi)源性阿片系統(tǒng)相關(guān)。

3　討論

藥物依賴是一種主要以中樞神經(jīng)系統(tǒng)適應(yīng)性或者可塑性改變?yōu)榛A(chǔ)的慢性復(fù)發(fā)性腦病。隨著反復(fù)用藥，用藥者對(duì)藥物的行為反應(yīng)一方面表現(xiàn)為耐受，另一方面又表現(xiàn)為增強(qiáng)，即敏化;敏化使機(jī)體形成對(duì)藥物的病理性渴求，促進(jìn)強(qiáng)迫性覓藥及復(fù)吸行為。復(fù)吸是指吸毒者在完成脫毒治療以后，由于種種原因重新開始濫用毒品的行為，是目前成癮研究的重點(diǎn)和難點(diǎn)［5］。

Fig 4 Opioid receptor antagonists naloxone and CTAP block the inhibitory effect of CCK-8 on foot shock-primedreinstatement of morphine-induced CPP

CCK-8是目前已知作用最強(qiáng)的內(nèi)源性“抗阿片肽”，可通過CCK1和CCK2兩種受體亞型發(fā)揮多種生物學(xué)功能。大量研究表明，當(dāng)體內(nèi)阿片物質(zhì)過多時(shí)將引起抗阿片肽CCK的生成釋放增多，起到負(fù)反饋調(diào)節(jié)作用，內(nèi)源性阿片系統(tǒng)與CCK系統(tǒng)之間的相對(duì)平衡在抗傷害性感受、疼痛調(diào)控及阿片依賴過程中起重要作用［6］。但是，CCK-8作為一種最強(qiáng)效CCK受體激動(dòng)劑，其相關(guān)研究并未得到與CCK受體拮抗劑完全相反的結(jié)論。在Itoh等［7］報(bào)道CCK-8能抗阿片鎮(zhèn)痛的同時(shí)，Doi等［8］卻報(bào)道CCK-8本身有鎮(zhèn)痛作用，Rezayat等［9］還發(fā)現(xiàn)CCK可以降低納洛酮誘導(dǎo)嗎啡戒斷小鼠模型的跳躍反應(yīng)。在脊髓薄片的離體實(shí)驗(yàn)中，大劑量CCK-8可以引起脊髓甲硫腦啡肽免疫活性物質(zhì)的釋放，因此推測(cè)CCK-8還可引起阿片肽的釋放。我們的前期研究系統(tǒng)考察了外源性CCK-8對(duì)嗎啡依賴的影響，并發(fā)現(xiàn)外源性CCK-8可明顯抑制嗎啡誘導(dǎo)的CPP表達(dá)過程［4］。在本研究中，足底電擊進(jìn)行重燃前側(cè)腦室注射不同劑量的CCK-8，發(fā)現(xiàn)CCK-8可明顯抑制足底電擊誘導(dǎo)的嗎啡CPP重燃，與本室以往研究結(jié)果一致［5］。藥物產(chǎn)生的欣快感與正性強(qiáng)化相關(guān)聯(lián)，而戒斷癥狀與負(fù)性強(qiáng)化有關(guān)，二者均參與了復(fù)吸過程。一些實(shí)驗(yàn)證據(jù)表明，CCK可以通過CCK2受體調(diào)節(jié)谷氨酸-GABA能系統(tǒng)，使杏仁核失去抑制，產(chǎn)生了焦慮和恐慌樣行為，這種負(fù)性情緒強(qiáng)化了對(duì)藥物的尋求［10］。但是，我們發(fā)現(xiàn)CCK-8可以通過CCK1受體上調(diào)SH-SY5Y細(xì)胞前腦啡肽原(PENK)的表達(dá)［11］，抑制嗎啡戒斷誘導(dǎo)條件性位置厭惡的表達(dá)［12］，并通過CCK1受體上調(diào)內(nèi)源性阿片肽緩解戒斷過程中的焦慮癥狀［13］。本研究中，CCK1受體拮抗劑和阿片受體拮抗劑均可阻斷CCK-8對(duì)足底電擊誘導(dǎo)嗎啡CPP重燃的抑制作用。因此，我們考慮CCK-8可以通過CCK1受體緩解戒斷過程中的負(fù)性情緒，從而抑制復(fù)吸過程，且CCK受體的不同亞型可能在嗎啡成癮過程中發(fā)揮不同作用。

另外，復(fù)吸的某些主要特征被認(rèn)為是記憶的另一種形式，是大腦特定神經(jīng)系統(tǒng)中由不良適應(yīng)所介導(dǎo)的異常方式的學(xué)習(xí)和記憶。例如:長(zhǎng)期慢性給予阿片類物質(zhì)，可通過正常的學(xué)習(xí)記憶系統(tǒng)產(chǎn)生病理反應(yīng)，并使用藥者形成強(qiáng)迫性用藥行為;當(dāng)成癮者停止用藥或者脫毒后，再次遇到與以往用藥相關(guān)的環(huán)境或其他線索，通過刺激中樞部分記憶環(huán)路即可誘發(fā)復(fù)吸。以往研究已證實(shí)CCK-8參與動(dòng)物學(xué)習(xí)、記憶過程［14］，我們還發(fā)現(xiàn)外源性CCK-8可以抑制藥物相關(guān)性記憶，并一定程度上降低長(zhǎng)期給予藥物對(duì)正常空間學(xué)習(xí)記憶的損害作用［15］。因此，CCK-8還可能通過學(xué)習(xí)及記憶機(jī)制干預(yù)嗎啡依賴的過程。

綜上所述，我們通過在體動(dòng)物水平的實(shí)驗(yàn)證明了CCK-8可明顯抑制足底電擊誘導(dǎo)的嗎啡CPP重燃過程。CCK-8可能從正性和負(fù)性兩方面干預(yù)嗎啡依賴過程，使其具有成為治療嗎啡成癮用藥的可能。但CCK-8具有明顯的濃度效應(yīng)及特殊的量效曲線，還需我們進(jìn)一步研究CCK受體不同亞型的作用模式，完善和明確CCK-8在嗎啡成癮過程中作用及其生物學(xué)機(jī)制。

(致謝:本研究在河北醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院法醫(yī)學(xué)系，河北省法醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室完成，感謝對(duì)本研究的指導(dǎo)和支持)

參考文獻(xiàn):

［1］Leshner A I.Addiction is a brain disease，and it matters［J］.Science，1997，278(5335) : 45－7

［2］陳大慶，倪宏.縮膽囊素生物學(xué)作用的多樣性［J］.國外醫(yī)學(xué)兒科學(xué)分冊(cè)，2002，29(3) : 164－6.

［2］Chen D Q，Ni H.The diversity of cholecystokinin biology function ［J］.Foreign Med Sci (Sect Pediat)，2002，29(3) :164－6.

［3］文迪，馬春玲，叢斌，等.側(cè)腦室注射八肽膽囊收縮素及其受體拮抗劑對(duì)嗎啡依賴大鼠戒斷癥狀的影響［J］.中國藥理學(xué)通報(bào)，2011，27(10) :1363－8.

［3］Wen D，Ma C L，Cong B，et al.Effects of CCK-8 and its receptor antagonists given intracerebroventricularly on withdrawal symptomof morphine dependent rats［J］.Chin Pharmacol Bull，2011，27 (10) :1363－8.

［4］Wen D，Cong B，Ma C，et al.The effects of exogenous CCK-8 on the acquisition and expression of morphine-induced CPP［J］.Neurosci Lett，2012，510: 24－8.

［5］Koob G F.Hedonic homeostatic dysregulation as a driver of drugseeking behavior［J］.Drug Discov Today Dis Models，2008，5 (4) :207－5.

［6］Hebb A L，Poulin J F，Roach S P，et al.Cholecystokinin and endogenous opioid peptides: Interactive influence on pain，cognition and emotion［J］.Prog Neuro psychopharmacol Biol Psychiatry，2005，29(8) : 1225－38.

［7］Itoh S，Katsuura G，Maeda Y.Caerulein and cholecystokinin suppress beta-endorphin-induced analgesia in the rat［J］.Eur J Pharmacol，1982，80(4) : 421－5.

［8］Doi T，Jurna I.Analgesic effect of intrathecal morphine demonstrated in ascending nociceptive activity in the rat spinal cord an in effectiveness of caerulein and CCK-8［J］.Brain Res，1982，234 (2) : 399－407.

［9］Rezayat M，Azizi N，Zarrindast M R，et al.On the mechanism (s) of cholecystokinin (CCK) : Receptor stimulation attenuates morphine dependence in mice［J］.Pharmacol Toxicol，1997，81 (3) :124－9.

［10］Perez de la Mora M，Hernandez-Gomez A，Arizmendi-Garcia Y， et al.Role of the amygdaloid cholecystokinin (CCK)/gastrin-2 receptors and terminal networks in the modulation of anxiety in the rat.Effects of CCK-4 and CCK-8S on anxiety-like behaviour and ［3H］GABA release［J］.Eur J Neurosci，2007，26(12) : 3614－30.

［11］文迪，馬春玲，叢斌，等.CCK-8與內(nèi)源性阿片系統(tǒng)在嗎啡依賴中的相互作用［J］.中國藥理學(xué)通報(bào)，2010，26(11) : 1445－50.

［11］Wen D，Ma C L，Cong B，et al.Interaction of CCK-8 and endogenous opioid system in the opioid dependence［J］.Chin Pharmacol Bull，2010，26(11) :1445－50

［12］Yu H，Wen D，Ma C，et al.Effects of exogenous cholecystokinin octapeptide on acquisition of naloxone-precipitated withdrawal-induce conditioned place aversion in rats［J］.PLOS One，2012，7 (7) : e41860.

［13］Wen D，Sun D，Zang G，et al.Cholecystokinin octapeptide induces endogenous opioid-dependent anxiolytic effects in morphinewithdrawal rats［J］.Neuroscience，2014，277: 14－25

［14］Hadjiivanova C，Belcheva S，Belcheva I.Cholecystokinin and learning and memory processes［J］.Acta Physiol Pharmacol Bulg，2003，27(2-3) : 83－8.

［15］Yang S，Wen D，Dong M，et al.Effects of cholecystokinin－8 on morphine－induced spatial reference memory impairment in mice ［J］.Behavioral Brain Res，2013，256: 346－53.

Effects of CCK-8 on foot shock primed reinstatement of morphine-induced CPP

JIA Hui1，2，LIU Tao3，WEN Di2，SUN Dong-lei2，ZANG Guo-qing2，YU Feng，YAN Yu-xian1，MA Chun-ling2
(1.Logistics University of People’s Armed Police Torce，Tianjin 300309，China; 2.Dept of Forensic Medicine，Basic Medical College，Hebei Medical University; Hebei Key Laboratory of Forensic Medicine，Shijiazhuang 050017，China; 3.Dept of Emergency Internal Medicine，the Second People's Hospital of Yunnan Province，Kunming 650021，China)

Abstract:AimTo explore the effects of exogenous CCK-8 on foot shock primed reinstatement of morphineinduced CPP and its mechanism.Methods The model of morphine induced conditioned place preference was established.Doses of CCK-8 (0.1，1 μg) were given intracerebroventricularly before CPP reinstatement，and the effects of exogenous CCK-8 on foot shock primed reinstatement of morphine-induced CPP were examined.Furthermore，CCK receptor antagonists (CCK1 receptor antagonist L-364，718 and CCK2 receptor antagonist L-365，260) and opioid receptor antagonists (opioid receptor antagonist naloxone and μopioid receptor antagonists CTAP) were co-administrated with CCK-8 before CPP reinstatement to explore the mechanisms of CCK-8 inhibiting foot shock primed reinstatement of morphine-induced CPP.Results①Foot shock successfully provoked the reinstatement of CPP，and CCK-8 (0.1，1 μg) effectively inhibited the reinstatement of morphine-induced CPP.②CCK1 receptor antagonist L-364，718，opioid receptor antagonists naloxone and CTAP could block the inhibitory effects of CCK-8 on foot shock primed reinstatement of morphine-induced CPP.③CCK-8 itself had no effect on sensitivity threshold of rats to foot shock.ConclusionCCK-8 can inhibit foot shock primed reinstatement of morphine-induced CPP via CCK1 receptor.This function of CCK-8 is related to opioid receptor.

Key words:morphine; CCK-8; CCK receptor; relapse; conditioned place preference; endogenous opioid peptide

作者簡(jiǎn)介:賈慧(1981－)，女，碩士生，研究方向:藥物成癮機(jī)制，E-mail: wdl998@ sohu.com;閆玉仙(1968－)，女，博士，碩士生導(dǎo)師，研究方向:藥物成癮機(jī)制，通訊作者，E-mail: yyx19683@126.com;馬春玲(1964－)，女，博士，博士生導(dǎo)師，研究方向:法醫(yī)毒理學(xué)，E-mail: chunlingma@126.com

基金項(xiàng)目:國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No 81273337) ;河北省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No H2013206157)

收稿日期:2015－01－18，修回日期:2015－02－26

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

文章編號(hào):1001－1978(2015) 06－0848－05中國圖書分類號(hào): R341.6; R749.61; R971.2; R977.6

doi:10.3969/j.issn.1001－1978.2015.06.022