斷奶應激對母馬血液生化和激素的影響

肖海霞，托乎提·阿及德，石國慶，張莉，李海（1.石河子大學動物科技學院，新疆石河子83000；.新疆畜牧科學院畜牧研究所，新疆烏魯木齊830000；3.新疆農墾科學院，新疆石河子83000；4.中國農業(yè)科學院北京畜牧獸醫(yī)研究所，北京100193；.昭蘇縣畜牧獸醫(yī)局，新疆昭蘇83600）

斷奶應激對母馬血液生化和激素的影響

肖海霞1，2，托乎提·阿及德2，石國慶1，3*，張莉4*，李海5
（1.石河子大學動物科技學院，新疆石河子832000；2.新疆畜牧科學院畜牧研究所，新疆烏魯木齊830000；3.新疆農墾科學院，新疆石河子832000；4.中國農業(yè)科學院北京畜牧獸醫(yī)研究所，北京100193；5.昭蘇縣畜牧獸醫(yī)局，新疆昭蘇835600）

為研究斷奶應激對母馬血液生化和激素的影響，選擇15匹斷奶馬駒的英純血母馬，測定母馬斷奶前、斷奶當天和斷奶后10個血液指標。根據斷奶馬駒月齡和母馬年齡分別對母馬測定指標進行R2.14.2語言分析。結果表明：斷奶當天所有母馬葡萄糖（GLU）含量都顯著高于斷奶前（P＜0.05）；斷奶當天，7月齡和8月齡斷奶馬駒的母馬游離脂肪酸（FFA）含量顯著低于斷奶前（P＜0.05），而6月齡斷奶馬駒的母馬斷奶前后差異不顯著；6～9歲母馬在斷奶當天白蛋白（ALB）含量最高，游離脂肪酸（FFA）和皮質醇（COR）含量最低，其中游離脂肪酸（FFA）與斷奶前差異顯著，皮質醇（COR）和白蛋白（ALB）與斷奶后差異顯著（P＜0.05），而10～13歲母馬的白蛋白（ALB）、游離脂肪酸（FFA）和皮質醇（COR）含量在斷奶前后差異都不顯著。由此可知在馬駒斷奶時應重點關注6月齡斷奶馬駒的母馬和10～13歲母馬。

血液生化指標；激素；斷奶；母馬

近年來動物福利問題日益成為人們關注的熱點。一般認為在良好福利條件下，動物的生產表現較好，生理生化指標也比較正常。在生產實踐中，馬駒斷奶會使母馬產生應激，其生產性能、血液生理生化和行為指標都會產生波動，并對母馬機體造成危害，降低母馬的動物福利，經濟效益受損。血液的生化和激素成分是家畜生命活動的物質基礎，是機體生理功能和代謝過程的內在反映，也是評價動物健康狀況和判斷家畜應激程度的參考依據［1］。因此，了解家畜血液生化和激素指標對提高家畜生產性能和家畜的動物福利，減少應激對家畜的影響以及指導生產者對應激采取相應的措施具有重要的實際意義。用于評價家畜應激狀態(tài)的血液指標通常有葡萄糖［2-3］、總蛋白和球蛋白［3-4］、β-羥丁酸［3］、尿素氮［5］、肌酸激酶［6］、游離脂肪酸［7-8］、皮質醇［2，9］和去氫表雄酮［10］等。目前，在仔豬、羔羊和犢牛上都已開展斷奶應激的研究［1，4，6，11-13］，但關于母馬斷奶應激的研究鮮有報道。本試驗采用突然斷奶法將英純血母馬和馬駒完全分離，根據斷奶馬駒月齡和母馬年齡分別分析斷奶前后測定的10個血液指標的變化，為實際生產中提高母馬的健康福利、制定母馬斷奶應激監(jiān)測技術和改進飼養(yǎng)管理技術措施等方面提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 試驗時間和地點試驗于2013年11月18日—12月10日在新疆伊犁哈薩克自治州昭蘇縣新疆伊犁馬研究繁育中心進行。

1.2 試驗動物和分組選擇健康的15匹斷奶馬駒的英純血母馬進行試驗，母馬的年齡在6～13歲，均為經產胎次，其中2胎次8匹，6胎次7匹。根據馬駒的斷奶月齡將母馬分成3組，第1組：6月齡斷奶馬駒的母馬5匹；第2組：7月齡斷奶馬駒的母馬5匹；第3組：8月齡斷奶馬駒的母馬5匹。根據母馬的年齡分成2組：A組為6～9歲母馬7匹，B組為10～13歲母馬8匹。

1.3 斷奶方法及飼養(yǎng)管理

1.3.1 斷奶方法斷奶前母馬與馬駒一起單廄飼喂；采用突然斷奶的方法，將母馬和馬駒先驅趕到對應馬圈里，然后將馬駒單獨放置在馬駒圈內，使母馬和馬駒完全隔離。

1.3.2 飼養(yǎng)管理斷奶前母馬和馬駒單廄飼喂，斷奶后母馬單廄飼喂。母馬斷奶前后的飼喂方式相同：每匹母馬每天飼喂2次混合飼料，每次1 kg；每天3次苜蓿，每次3 kg；每天2次干草，每次3 kg。使其充足飲水并自由采食定量分配的飼草。

1.4 樣品采集與處理

1.4.1 采血時間母馬血樣分別于斷奶前第10天（以下簡稱斷奶前）、斷奶當天和斷奶后第12天（以下簡稱斷奶后）晨飼2 h后采集。

1.4.2 采血和處理方法由頸靜脈采血10 mL，傾斜放置4℃冰箱靜置一夜析出血清后，以3 000 r/min離心20 min，收集血清于-20℃低溫冰箱保存?zhèn)溆茫?～5 mL送北京華英生物技術研究所檢測。

1.5 血液生化和激素指標測定方法總蛋白（TP）：雙縮脈法；白蛋白（ALB）：溴甲酚綠法；球蛋白（GLB）：總蛋白一白蛋白；尿素氮（BUN）：兩點動力法；葡萄糖（GLU）：葡萄糖氧化酶法；肌酸激酶（CK）：采用連續(xù)監(jiān)測法（N-乙酰半胱氨酸法）；游離脂肪酸（FFA）：改良比色法；β-羥丁酸（β-HB）：酶法；皮質醇（COR）：放射免疫測定；去氫表雄酮（DHEA-S）：放射免疫測定。

1.6 統(tǒng)計分析由于在試驗過程中1匹母馬意外死亡，3匹母馬出現腸扭轉未能采樣，因此只有11匹母馬有檢測結果。根據斷奶馬駒月齡和母馬年齡分別進行整理分析，整理統(tǒng)計分析工具主要采用Excel軟件、R2.14.2語言、Duncan′s多重比較法，試驗結果用平均值±標準誤表示。

2 結果與分析

有研究表明，斷奶應激會導致血液葡萄糖（GLU）［11］、β-羥丁酸（β-HB）［11］、肌酸激酶（CK）［6，12］、游離脂肪酸（FFA）［13］和皮質醇濃度升高［14-15］；而總蛋白（TP）、球蛋白（GLB）［16-17］、尿素氮（BUN）［12］和去氫表雄酮（DHEA）濃度下降［10］。這些指標的變化不利于家畜機體的生理功能及代謝過程，會對家畜機體造成危害，損害家畜的動物福利，降低經濟效益。因此，在生產實際中可以參考這些指標來判斷家畜應激程度，并盡可能避免應激或將應激降至最小。

2.1 不同時期所有母馬血清生化和激素指標變化由表1可見，所有母馬的GLU、FFA和COR在不同時期發(fā)生顯著的變化，其中，斷奶當天GLU含量最高，并且與斷奶前差異顯著（P＜0.05）。斷奶當天FFA和COR含量最低，其中FFA與斷奶前差異顯著（P＜0.05），而COR與斷奶后差異顯著（P＜0.05）。

表1 所有母馬不同斷奶時期血液生化和激素指標的測定結果

2.2 不同斷奶月齡馬駒的母馬斷奶前后血液生化和激素指標變化

2.2.1 具體時期不同斷奶月齡馬駒的母馬血清生化和激素指標的影響由表2可知，在斷奶前、斷奶當天和斷奶后3個時期，6、7、8月齡斷奶馬駒的母馬所測定的10個血清指標之間都沒有明顯的變化（P＞0.05）。

2.2.2 具體斷奶月齡馬駒的母馬在不同時期的血清生化和激素指標變化由表3可見，FFA濃度在7月齡和8月齡斷奶馬駒的母馬斷奶前后發(fā)生了顯著變化，其中斷奶當天7月齡和8月齡的FFA濃度最低，并且它們都與斷奶前差異顯著（P＜0.05），而6月齡斷奶馬駒的母馬的FFA濃度在斷奶前后差異不顯著（P＞0.05）。其余9個指標在不同月齡斷奶馬駒的不同時期之間差異都不顯著（P＞0.05）。

2.2.3 不同胎次斷奶月齡馬駒的母馬血清生化和激素指標變化由表4可知，對于不同斷奶月齡馬駒的母馬，不同胎次只在DHEA-S水平上表現明顯的變化，6胎次DHEA-S濃度顯著高于2胎次的DHEA-S，其他9個指標之間差異不顯著（P＞0.05）。

2.3 不同年齡母馬斷奶前后的血液生化和激素指標變化

2.3.1 具體時期不同年齡母馬血清生化和激素指標的變化由表5可知，6～9歲母馬和10～13歲母馬在斷奶前、斷奶當天和斷奶后3個時期的10個血清生化和激素指標之間都沒有明顯的變化（P＞0.05）。

2.3.2 不同年齡母馬在不同時期的血清生化和激素變化由表6可見，ALB、FFA和COR濃度在6～9歲母馬的斷奶前后發(fā)生了顯著變化，GLU濃度在10～13歲母馬的斷奶前后發(fā)生了顯著變化，其中斷奶當天6～9歲母馬的ALB濃度最高并且與斷奶后差異顯著（P＜0.05）；斷奶當天FFA和COR濃度最低，其中FFA與斷奶前差異顯著（P＜0.05），COR與斷奶后差異顯著（P＜0.05）。10～13歲母馬斷奶當天的GLU最高并且與斷奶前差異顯著（P＜0.05），其余指標差異都不顯著（P＞0.05）。

表2 具體時期不同斷奶月齡馬駒母馬的血液生化和激素指標測定結果

表3 不同月齡斷奶馬駒母馬在不同時期的血液生化和激素指標的變化

表4 不同胎次斷奶月齡馬駒母馬的血液生化和激素指標

2.3.3 不同胎次母馬的血清生化和激素指標變化由表7可知，不同胎次母馬所測定的10個指標之間差異不顯著（P＞0.05）。

3 討論

3.1 不同時期所有母馬血清生化和激素指標變化本試驗發(fā)現馬駒斷奶前后，所有母馬的GLU、FFA和COR含量都發(fā)生顯著變化。血液中的GLU是糖在體內的運輸形式，是測定機體能量平衡的一個重要指標，與家畜生產性能密切相關。應激是對擾亂機體正常生理功能所作出的反應，大多家畜應激時血清GLU濃度會升高，因為發(fā)生應激時，胰高血糖素和兒茶酚胺能促進糖原降解提供葡萄糖供能，同時增強了淋巴、肌肉和結締組織中的糖異生作用。斷奶應激會影響母馬的生理、健康和營養(yǎng)福利。楊培歌等［8］報道地面溫度過低使生長豬產生應激并且體內血糖含量顯著升高。

本研究結果表明，斷奶當天所有組別的母馬GLU含量都顯著高于斷奶前，這與Lynch［11］對犢牛的斷奶應激研究結果一致，說明馬駒斷奶會導致所有母馬產生斷奶應激。與6月齡和7月齡斷奶馬駒的母馬相比，8月齡斷奶馬駒的母馬GLU含量在斷奶當天和斷奶后都是最低的，說明8月齡斷奶馬駒的母馬所產生的斷奶應激低于7月齡和6月齡斷奶馬駒的母馬。而在斷奶當天和斷奶后，6～9歲母馬比10～13歲母馬的GLU含量低，從而說明在GLU水平上所反映的應激程度是6～9歲母馬小于10～13歲母馬。

表5 具體時期不同年齡母馬血液生化和激素指標

表6 不同年齡母馬在不同時期的血液生化和激素指標的變化

表7 不同胎次母馬的血液生化和激素指標

3.2 不同斷奶月齡馬駒的母馬斷奶前后的血液生化和激素指標變化在應激、饑餓、長時間運動等生理條件下，脂肪組織中脂肪的動員都會加強，此時下丘腦一垂體一腎上腺軸的激活會導致血漿中游離脂肪酸增加［13］。與程發(fā)祥［13］研究結果相反。本試驗中斷奶當天，7月齡和8月齡斷奶馬駒的母馬FFA含量顯著低于斷奶前，而6月齡斷奶馬駒的母馬斷奶前后差異不顯著，從而說明7月齡和8月齡斷奶馬駒的母馬在FFA水平上所反映的斷奶應激反應程度上低于6月齡斷奶馬駒的母馬。

3.3 不同年齡母馬斷奶前后的血液生化和激素指標變化血清總蛋白、白蛋白、球蛋白含量是評價血清蛋白質營養(yǎng)重要指標之一。應激條件下，家畜體內皮質醇分泌增多，蛋白分解加快，從而使血清蛋白含量降低［16］。冷靜等［17］發(fā)現不同日齡斷奶仔豬在斷奶后7 d內的TP、ALB和GLB均會迅速降低。與冷靜等［17］結果相反，本研究發(fā)現6～9歲母馬在斷奶當天ALB含量最高，并且與斷奶前差異顯著，而10～13歲母馬的ALB含量在斷奶前后差異不顯著從而說明6～9歲母馬在ALB水平上所表現的斷奶應激程度小于10～13歲母馬。與程發(fā)祥［13］研究結果相反，本研究中的6～9歲母馬在斷奶當天FFA含量最低，并且與斷奶前差異顯著，從而說明6～9歲母馬在FFA水平上所表現的斷奶應激程度較小。

應激時家畜的下丘腦分泌促腎上腺皮質激素釋放激素，促進垂體分泌促腎上腺皮質激素，使腎上腺皮質激素合成和釋放增加，從而使體內皮質醇濃度上升。湯繼順等［14］研究發(fā)現，26日齡的杜長×大×三元雜交仔豬在斷奶后1周內血清皮質醇含量極顯著升高。Erber等［15］研究發(fā)現，斷奶當天采用突然斷奶法、代乳母馬法和逐步斷奶的馬駒在斷奶當天的皮質醇顯著增加。本試驗中斷奶當天，6～9歲母馬COR濃度顯著低于斷奶后，而10～13歲母馬COR濃度斷奶當天和斷奶后均有上升的趨勢，從而說明不同年齡母馬在皮質醇濃度水平上反映出斷奶應激程度是10～13歲母馬高于6～9歲的母馬。

3.4 不同胎次母馬血清生化和激素指標的變化去氫表雄酮（DHEA-S）濃度的下降已經被作為應激反應的指標［10］。本試驗發(fā)現，不同斷奶月齡馬駒的母馬的6胎次DHEA-S濃度顯著高于2胎次的母馬，說明對于不同斷奶月齡馬駒的母馬胎次小的母馬應激程度較高；而不同胎次在6～9歲和10～13歲母馬之間差異不顯著，這個可能是由于年齡越大，生產胎次相對越多，分析不同斷奶月齡馬駒的母馬時，不同的斷奶馬駒年齡組中既有胎次高的又有胎次低的，因此之間會存在差異，而不同年齡母馬的胎次基本與母馬年齡的變化趨勢一致，因此導致不同年齡母馬胎次間差異不顯著。

綜上所述，除了GLU、FFA和COR外，其余7個測定指標在斷奶前后都沒有顯著變化，但是從顯著差異的指標變化可以發(fā)現6月齡斷奶馬駒的母馬斷奶應激程度較高，可能是因為馬駒的斷奶月齡小，斷奶前6月齡馬駒對母馬的依賴性高于7月齡和8月齡馬駒，斷奶后6月齡斷奶馬駒的母馬所表現的念親性就高于其他兩組，從而導致應激反應大。而從母馬年齡分組的比較分析發(fā)現，10～13歲母馬的應激程度略高于6～9歲母馬可能是因為10～13歲母馬在代謝水平和免疫力上低于6～9歲母馬。

4 結論

6月齡斷奶馬駒的母馬和10～13歲母馬在馬駒斷奶時所表現的斷奶應激程度較高，因此在馬駒斷奶實際生產中應予以重點關注，盡量避免和減少斷奶應激對母馬的影響，從而提高母馬的健康福利。同時可以將血液葡萄糖（GLU）、游離脂肪酸（FFA）和皮質醇（COR）的含量作為母馬是否處于應激狀態(tài)的輔助性檢測指標，這對生產者采取應對應激措施具有一定指導意義。

致謝：本試驗得到了新疆伊犁馬研究繁育中心居馬洪、江阿努爾和努爾蘭以及石河子大學毋狀元的大力支持，在此表示衷心地感謝！

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：0258-7033（2015）19-0075-05

2015-03-09；

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國家公益性行業(yè)（農業(yè)）科研專項（201003075）；自治區(qū)重大專項項目（201230116—8）；自治區(qū)高新項目（201411106）作者簡介：肖海霞（1975-），女，在職博士，副研究員，主要從事動物遺傳育種與繁殖的研究，E-mail：xhxqzp@163.com

*通訊作者：石國慶，博士，研究員，E-mail：nkkxyxms@163.com