2015年版《中國藥典》微生物限度檢查法潔凈環(huán)境及計數(shù)培養(yǎng)基修訂分析探討

景榮先 張國林

1.蘇州市立醫(yī)院本部藥學(xué)部,江蘇蘇州 215002；2.蘇州市食品藥品檢驗所,江蘇蘇州 215104

微生物限度檢查是用于檢查非無菌制劑及其原料、輔料等是否符合規(guī)定的方法[1-2]。為防止污染,確保檢查結(jié)果的準確性,微生物限度檢查必須在受控的潔凈環(huán)境中進行,并嚴格執(zhí)行檢驗過程的無菌操作。培養(yǎng)基是進行微生物限度及無菌檢查的主要載體,其質(zhì)量合格與否及選擇的合理性直接關(guān)系到檢查結(jié)果的準確性和可靠性。2015年版中國藥典對微生物限度檢查的潔凈環(huán)境、培養(yǎng)基及檢查方法進行了修訂。該文比較分析2015年版中國藥典與2010年版中國藥典在非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查時潔凈受控環(huán)境與計數(shù)培養(yǎng)基異同點,為更規(guī)范執(zhí)行新版中國藥典提供參考。

1 2015年版與2010年版中國藥典微生物檢查項目異同

微生物限度檢查法主要用于檢查非規(guī)定滅菌的制劑及其原料、輔料等是否符合規(guī)定的標準方法。2010年版中國藥典微生物限度檢查法中檢查的項目包括細菌數(shù)、霉菌數(shù)、酵母菌數(shù)及控制菌(大腸埃希菌、大腸菌群、沙門菌、銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、梭菌及白色念珠菌)[1]；而2015年版中國藥典對計數(shù)法微生物檢查項目界定為嗜溫細菌和真菌,同時將控制菌檢查中的“大腸菌群”修訂為“耐膽鹽格蘭陰性菌”[2],見表1。

表1 2015年版與2010年版中國藥典微生物檢查項目異同

2010年版中國藥典中規(guī)定微生物限度檢查的計數(shù)項目中細菌培養(yǎng)溫度為30～35℃,霉菌和酵母菌培養(yǎng)溫度為23～28℃,因此,樣品中可能存在的極端微生物在此條件下無法檢出。因此,2015年版中國藥典對計數(shù)法檢查項目界定為嗜溫細菌和真菌具有合理性。大腸菌群是能發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸、產(chǎn)氣的一類需氣或兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌,主要來源于糞便,是判定食品、藥品等是否被糞便污染的重要指標；而耐膽鹽革蘭氏陰性菌是一類在膽汁酸中可以存活并繁殖的革蘭氏陰性菌,其范圍比大腸菌群更廣,包括腸桿菌科、產(chǎn)單孢菌屬及家單孢菌屬等,且該方法在大腸菌群檢測上更容易操作和進行結(jié)果判讀[3]。同時,現(xiàn)行的美國藥典也是采用檢查耐膽鹽革蘭氏陰性菌進行報告。

2 2015年版《中國藥典》微生物限度檢查法環(huán)境修訂與分析

微生物限度檢查時潔凈環(huán)境是保證檢查結(jié)果準確性的重要保證。2010年版中國藥典中規(guī)定“微生物限度檢查應(yīng)在環(huán)境潔凈度10000級下的局部潔凈度100級的單向流空氣區(qū)域內(nèi)進行”,而2015年版中國藥典要求“微生物計數(shù)試驗應(yīng)在受控環(huán)境下的局部潔凈度不低于B級的單向流空氣區(qū)域內(nèi)進行”。新舊版藥典的變化首先是潔凈環(huán)境潔凈度稱謂上的變化：2015年版中國藥典與2010年藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范的稱謂一致,將環(huán)境潔凈度的等級按照A、B、C、D級進行劃分。2010年版中國藥典的潔凈度等級劃分樣式目前多應(yīng)用于無菌醫(yī)療器具生產(chǎn)及保健品、化妝品生產(chǎn)廠房等潔凈度的劃分。雖然D級與10 000級環(huán)境在潔凈環(huán)境的關(guān)鍵項目塵埃數(shù)和沉降菌控制方面無明顯差別：D和10 000級潔凈環(huán)境控制≤5μm和≤0.5μm粒子數(shù)為≤29 000/3 520 000個/m3和≤20 000/3 500 000個/m3(靜態(tài)),而二者對沉降菌的控制相同,均為≤10個/平皿(靜態(tài))。

為防止檢驗過程造成污染影響檢驗結(jié)果,目前微生物限度檢查時的潔凈環(huán)境一般要求不低于其生產(chǎn)時的潔凈環(huán)境度,而目前非無菌制劑生產(chǎn)環(huán)境主要處于C級或D級潔凈環(huán)境下。同時,考慮到潔凈環(huán)境的潔凈度越高,相應(yīng)的運行成本越高、風(fēng)險越大[4-5],因此,將微生物限度檢查的潔凈環(huán)境定位于“受控環(huán)境(C級或D級)下的局部潔凈度不低于B級(A級或B級)的單向流空氣區(qū)域內(nèi)進行”是合理的。見表2。

表2 2015年版《中國藥典》微生物限度檢查法環(huán)境修訂與分析

3 2015年版《中國藥典》微生物限度檢查法技術(shù)培養(yǎng)基比較

2010年版中國藥典微生物限度檢查法中計數(shù)檢查的項目包括細菌數(shù)、霉菌和酵母菌數(shù)；而2015年版中國藥典對計數(shù)法檢查項目界定為嗜溫細菌和真菌。2010年版細菌和霉菌及酵母菌計數(shù)采用的是營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基和玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基,而2015年版中國藥典檢查嗜溫細菌和真菌采用的是胰酪胨大豆瓊脂培養(yǎng)基和沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基。有研究表明胰酪胨大豆瓊脂培養(yǎng)基上細菌的生長狀態(tài)更佳,該培養(yǎng)基更適合于細菌的計數(shù)檢查[6]。另外,新版中國藥典增加了含抗生素的玫瑰紅鈉和沙氏葡萄糖瓊脂選擇性培養(yǎng)基用于因沙氏葡萄糖瓊脂上因細菌生長而造成的霉菌和酵母菌計數(shù)不合格的情況,克服了2010年版中國藥典的不足。另外,2015年版中國藥典取消了酵母浸出粉胨瓊脂培養(yǎng)基用于酵母菌計數(shù)的方法。2015年版中國藥典的以上修訂均與現(xiàn)行的美國藥典要求趨向于一致。見表3。

表3 2015年版《中國藥典》微生物限度檢查法技術(shù)培養(yǎng)基比較

4 討論

與2010年版中國藥典相比,2015年版中國藥典對微生物限度檢查及無菌檢查方法進行了較大的修訂,包括培養(yǎng)基的選擇、驗證方法、檢查是的潔凈環(huán)境等多個方面。該文主要分析了新版藥典中微生物限度檢查在計數(shù)培養(yǎng)基和潔凈環(huán)境方面的變化?？傮w上來看,新版藥典微生物限度檢查與無菌檢查修訂后在培養(yǎng)基選擇、方法驗證、潔凈環(huán)境的控制方面均向現(xiàn)行的美國藥典靠攏。兩國藥典標準的一致性為藥品生產(chǎn)企業(yè)通過GMP認證及出口貿(mào)易均具有積極的意義。本文中參考的內(nèi)容來自于《中國藥典》2015年版總則(草案)第二次公開征求意見稿,其內(nèi)容可能與正式稿有所出入。如正式稿內(nèi)容有所變化,一切以正式稿為準。

[1] 國家藥典委員會.中國藥典2010年版[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社.

[2] 曾婧娉,崔蓉,李全興,等.苯酚滴耳液微生物限度檢查方法的建立與驗證[J]. 中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué),2015,32(1):78-81.

[3] 國家藥典委員會.關(guān)于《中國藥典》2015年版總則(草案)第二次公開征求意見的通知[EB/OL].(2014-07-28)http://www.chp.org.cn/cms/newscenter/news/000623.html.

[4] 朱文娟.大腸菌群檢查與膽汁耐受革蘭陰性菌檢查比較研究[J]. 中國醫(yī)藥指南,2012,10(34):109-111.

[5] 李立,張利群. 潔凈室凈化空調(diào)系統(tǒng)的節(jié)能淺探[J]. 潔凈與空調(diào)技術(shù),2014(3):46-47.

[6] 陳偉盛,朱榮峰,關(guān)倩明.統(tǒng)計分析在潔凈室污染評估及風(fēng)險分析中的應(yīng)用研究[J]. 中國醫(yī)藥工業(yè)雜志,2014(10):1004-1008.

[7] 由亞寧,陳雪芹,周志云,等.2005年版《中國藥典》和《歐洲藥典》菌落計數(shù)培養(yǎng)基比較[J]. 中國藥事,2010,24(6):587-589.