復發(fā)型PNS患兒腎組織P-糖蛋白170的表達及其臨床意義

付 輝，張 靜，吳小磊

(1.唐山市婦幼保健院兒內(nèi)科，河北 唐山063000；2.唐山職業(yè)技術(shù)學院臨床醫(yī)學系，河北 唐山063000)

復發(fā)型PNS患兒腎組織P-糖蛋白170的表達及其臨床意義

付 輝1，張 靜2，吳小磊1

(1.唐山市婦幼保健院兒內(nèi)科，河北 唐山063000；2.唐山職業(yè)技術(shù)學院臨床醫(yī)學系，河北 唐山063000)

目的探討復發(fā)型原發(fā)性腎病綜合征(PNS)患兒腎組織P-糖蛋白170(P-gp170)的表達及其臨床意義。方法共選取2012年1月至2013年12月間我院住院診治的58例PNS患兒，包括初發(fā)未用糖皮質(zhì)激素(GC)組13例，復發(fā)未用GC組18例，復發(fā)用GC組27例，穿刺取得腎組織，另取12例正常腎組織作為對照組。采用免疫組化法檢測并比較各組腎組織中P-gp170的表達，分析P-gp170表達與復發(fā)型PNS患兒病程、首次復發(fā)與初發(fā)間隔時間、糖皮質(zhì)激素用量的關(guān)系。結(jié)果初發(fā)未用GC組、復發(fā)未用GC組和復發(fā)用GC組三組腎組織P-gp170的表達均高于正常對照組，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，而復發(fā)未用GC組與初發(fā)未用GC組P-gp170的表達差異則無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，復發(fā)用GC組P-gp170的表達又高于復發(fā)未用GC組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。復發(fā)用GC組中P-gp170表達與病程、糖皮質(zhì)激素用量呈正相關(guān)(r=0.651，r=0.788，P＜0.05)，而與首次復發(fā)與初發(fā)間隔時間呈負相關(guān)(r=-0.794，P＜0.05)。結(jié)論復發(fā)PNS患兒腎組織中P-gp170高表達，其表達與PNS患兒病程、復發(fā)時間及糖皮質(zhì)激素用量有關(guān)，對P-gp170進行檢測可有效指導PNS患兒的臨床治療，判斷預后。

兒童；原發(fā)性腎病綜合征；P-糖蛋白170

原發(fā)性腎病綜合征(Primary nephrotic syndrome，PNS)是小兒常見的一種腎臟疾病，約占小兒腎病綜合征(NS)的90%，其典型臨床表現(xiàn)為“三高一低”即大量蛋白尿、高脂血癥、明顯浮腫、低蛋白血癥[1]。目前PNS的具體病因和發(fā)病機制仍不十分明確。雖然糖皮質(zhì)激素(Glucocorticoid，GC)是國內(nèi)外治療PNS的首選藥物，多數(shù)患兒早期足量應用預后較好，但臨床發(fā)現(xiàn)最初對GC敏感的患兒在治療一段時間后卻會表現(xiàn)出對GC的耐藥現(xiàn)象，約20%對GC不敏感的患兒不能得到理想的治療效果。而對GC耐藥則是引起患兒PNS反復復發(fā)，病情遷延不愈主要原因，研究表明激素耐藥型腎病綜合征的復發(fā)率可達70%以上[2]，反復復發(fā)又可進一步導致對GC的敏感性下降，使臨床后續(xù)治療更加困難，很可能發(fā)展為終末期腎病及腎功能衰竭。因此，盡快找出GC耐藥的原因及病情復發(fā)的因素極其重要，可為制定合理治療方案，改善預后提供依據(jù)。而目前對激素耐藥在通過調(diào)整激素用量、劑型或使用免疫抑制劑等措施的治療效果并不很滿意，且副作用明顯，故激素耐藥是研究的熱點和棘手問題。目前有研究表明作為多藥耐藥基因1(MDR1)的表達產(chǎn)物之一的P-糖蛋白170(Permeability-glycoprotein170，P-gp170)在激素耐藥型腎病綜合征患兒外周血的表達高于激素敏感者[3]，但有關(guān)P-gp170在腎組織的表達研究較少，本研究通過觀察P-gp170在PNS患兒腎組織中的表達、分布，探討其與GC治療療效及PNS復發(fā)的關(guān)系，為臨床治療提供有價值依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年1月至2013年12月間我院住院診治的資料完整的58例PNS患兒，診斷均符合2008年中華醫(yī)學會兒科學分會腎臟病學組西安會議制定的標準[4]。其中男性36例，女性22例，中位年齡5.3歲。分為初發(fā)未用糖皮質(zhì)激素(GC)組13例，復發(fā)未用GC組18例，復發(fā)用GC組27例。穿刺取得腎組織，隨訪1年。另取12例因外傷于我院外科行腎切除的正常腎組織作為對照組，男性7例，女性5例，中位年齡5.5歲。排除既往有腎臟疾病史者，各組間的性別、年齡比較差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，具有可比性。本研究獲得患者及家屬知情同意并簽署知情同意書。

1.2 方法 所有研究對象各取1.0cm×1.0cm×0.5cm大小的腎組織福爾馬林溶液固定，石蠟切片，二甲苯脫水，滅活。采用免疫組織化學SABC(鏈酶親和素-生物素-過氧化物酶)法檢測各組腎組織中P-gp170表達水平，檢測所用試劑盒及鼠抗人抗體P-gp170均購自武漢明德生物科技有限公司，并嚴格按說明書進行操作。在光學顯微鏡下觀察組織切片，嚴格控制光亮度，用同一臺顯微鏡并統(tǒng)一拍攝條件，使用Image-Pro Plus6.0彩色圖文分析軟件觀察測定免疫反應物，按文獻[5]方法測定每個觀察視野(×100)A區(qū)域(腎小球、近曲小管、遠曲小管及間質(zhì))的灰度(GA)、陽性產(chǎn)物相的灰度(Gα)及面積密度(AAα)，按公式PU=100×∣Gα-GA∣/[(1-AAα)Gmax]計算觀察視野中的P-gp170蛋白陽性單位PU值。

1.3 觀察指標 觀察各組腎小管及腎間質(zhì)P-gp170表達水平，以及P-gp170表達與復發(fā)用GC組患兒的病程、首次復發(fā)與初發(fā)間隔時間(＜3個月、3～6個月、＞6個月)、糖皮質(zhì)激素的使用劑量(小劑量、中劑量、大劑量)的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計學方法 應用SPSS19.1統(tǒng)計軟件包進行數(shù)據(jù)分析。計量資料以均數(shù)±標準差(±s)表示，多組間比較采用方差分析，復發(fā)用GC組數(shù)據(jù)的相關(guān)分析采用Spearman秩相關(guān)分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 各組腎組織中P-gp170蛋白表達情況比較 P-gp170在各組腎組織中的近曲小管、遠曲小管及間質(zhì)表達，而在腎小球表達甚少或無表達，且PNS患兒P-gp170表達在近曲小管高于遠曲小管高于腎間質(zhì)(P＜0.05)。在近曲小管、遠曲小管及腎間質(zhì)，初發(fā)未用GC組、復發(fā)未用GC組、復發(fā)用GC組患兒P-gp170的表達PU值均明顯高于正常對照組，差異均有統(tǒng)計學意義(均P＜0.05)，而復發(fā)未用GC組與初發(fā)未用GC組P-gp170的表達差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，復發(fā)用GC組P-gp170的表達均明顯高于復發(fā)未用GC組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，見表1。

表1 各組腎小管及腎間質(zhì)P-gp170表達水平比較(±s，PU值)

表1 各組腎小管及腎間質(zhì)P-gp170表達水平比較(±s，PU值)

組別 近曲小管 遠曲小管 腎間質(zhì)初發(fā)未用GC組(n=13)復發(fā)未用GC組(n=18)復發(fā)用GC組(n=27)正常對照組(n=12)F值P值23.85±1.1224.63±1.2831.52±1.3710.83±1.09750.3310.00021.53±1.1022.21±1.2628.22±1.3010.24±1.03611.4510.00016.79±1.0917.47±1.2023.57±1.289.62±1.01403.0870.000

2.2 P-gp170表達與復發(fā)用GC組患兒臨床指標的相關(guān)性 復發(fā)用GC組P-gp170表達與患兒病程長短及糖皮質(zhì)激素用量呈正相關(guān)性(r=0.651和r=0.788，均P＜0.05)，而與首次復發(fā)和初發(fā)間隔時間呈負相關(guān)性(r=-0.794，P＜0.05)，見表2。

表2 復發(fā)用GC組不同臨床指標P-gp170的表達水平(±s，PU值)

表2 復發(fā)用GC組不同臨床指標P-gp170的表達水平(±s，PU值)

觀察指標P-gp170r值P值病程(年)＜11～2＞2首次復發(fā)與初發(fā)間隔時間(月)＜33～6＞6 GC用量小劑量中劑量大劑量0.651＜0.0519.13±1.1722.51±1.2429.93±1.31 -0.794＜0.0529.26±1.3324.83±1.2521.55±1.230.788＜0.0520.08±1.0226.81±1.3333.47±1.35

3 討 論

小兒原發(fā)性腎病綜合征(PNS)是一組多因素導致的腎小球濾過膜對血漿蛋白通透性增高，而引起大量蛋白質(zhì)從尿中流失的臨床綜合征。糖皮質(zhì)激素(GC)是最基本的也是主要的治療藥物之一，PNS患兒對GC的反應性一定程度決定了其預后。然而部分PNS患兒存在對GC的抵抗或耐藥，影響了臨床治療效果，會導致PNS的復發(fā)，嚴重威脅患兒的生活質(zhì)量。因此，為避免激素耐藥的PNS患兒不必要的大量激素使用及其帶來的副作用，通過有效的客觀指標盡早盡快診斷，及時調(diào)整治療方案，對控制PNS的復發(fā)意義重大。在腫瘤化療藥物治療耐藥機制的研究中發(fā)現(xiàn)多耐藥基因(MDR1)編碼的跨膜糖蛋白P-gP170與耐藥有密切關(guān)系。P-gP170具有藥泵功能，能把進入細胞的大多數(shù)化療藥物、激素、蛋白等泵出到細胞外，從而使細胞內(nèi)藥物濃度降低，引起細胞對藥物的耐受[5]。已有少量研究報道耐藥型PNS患兒外周血P-gp170表達高于敏感型PNS，而有關(guān)PNS患兒腎組織的P-gp170表達情況及其與激素治療效果的關(guān)系研究甚少。腎組織是糖皮質(zhì)激素主要作用的靶器官，故有理由認為PNS患兒的部分腎組織可能存在P-gp170的異常表達，且懷疑與GC耐藥有關(guān)[6]。本研究觀察PNS患兒腎組織P-gp170表達分布及其與患兒臨床指標間的關(guān)系，探討P-gp170在PNS患兒GC耐藥及病情復發(fā)中的機制。

本研究結(jié)果顯示P-gp170在PNS患兒腎組織及正常腎組織中的腎小管及間質(zhì)表達，腎小球幾乎無表達。PNS患兒P-gp170表達在近曲小管高于遠曲小管高于腎間質(zhì)(P＜0.05)，說明P-gp170表達主要是參與了某些代謝物質(zhì)的轉(zhuǎn)運和排泄，同時P-gp170在GC作用的主要部位腎小管的高表達說明其與GC的反應狀態(tài)有一定關(guān)系。初發(fā)未用GC組、復發(fā)未用GC組、復發(fā)用GC組患兒P-gp170的表達均明顯高于正常對照組(均P＜0.05)，而復發(fā)未用GC組與初發(fā)未用GC組P-gp170的表達差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，復發(fā)用GC組P-gp170的表達又高于復發(fā)未用GC組(P＜0.05)，說明PNS患兒腎組織中P-gp170的表達升高，且其可能與PNS的復發(fā)及GC的應用有關(guān)，復發(fā)PNS患兒可能在應用GC治療中而產(chǎn)生了耐藥現(xiàn)象；且本研究表明P-gp170表達與GC用量呈明顯正相關(guān)關(guān)系(P＜0.05)，說明可能是應用GC后誘導了P-gp170的表達增加而導致繼發(fā)耐藥，從而進一步影響GC的療效。P-gp170可能是PNS患兒GC耐藥的因素之一，這與相關(guān)研究一致[7]。本研究顯示復發(fā)用GC組的P-gp170表達與PNS患兒病程呈正相關(guān)，而與首次復發(fā)和初發(fā)間隔時間呈明顯負相關(guān)，認為PNS患兒腎組織P-gp170的表達影響其預后，P-gp170表達較高的患兒其復發(fā)可能性加大，病程延長。因此，P-gp170的表達可反映細胞內(nèi)GC的水平及患兒對激素的敏感性。

綜上所述，我們建議在對PNS患兒進行腎組織病理學檢查的同時可進行腎組織P-gp170表達的檢測，將有助于判斷PNS患兒對GC的反應性，預測其臨床療效，并可針對不同P-gp170水平患兒制定個性化的治療方案，如應用一些能抑制P-gp170轉(zhuǎn)運泵功能的藥物等。同時尚需進一步探討P-gp170的表達與GC應用時間的長短和PNS病理分型的關(guān)系，為深入探討P-gp170在GC耐藥及在PNS復發(fā)中的作用，尋找臨床有效應對措施提供理論依據(jù)。

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Expression and clinical significance of P-glycoprotein170 in renal tissue in children with relapsed primary nephrotic syndrome.

FU Hui1,ZHANG Jing2,WU Xiao-lei1.1.Department of Pediatric Internal Medicine,Tangshan Maternal and Child Health Care Hospital,Tangshan063000,Hebei,CHINA;2.Department of Clinical Medicine,Tangshan Vocational and Technical College,Tangshan063000,Hebei,CHINA

ObjectiveTo explore the expression and clinical significance of P-glycoprotein170(P-gp170) in renal tissue of children with relapsed primary nephrotic syndrome(PNS).MethodsFifty-eight children with PNS diagnosed in our hospital from January2012 to December2013 were selected,including13 cases of incipient PNS without glucocorticoid(GC)treatment(incipient PNS without GC group),18 cases of relapsed PNS without GC treatment(elapsed PNS without GC group),27 cases of relapsed PNS with GC treatment(elapsed PNS with GC group),and kidney tissues were collected through puncture.Twelve cases of normal renal tissues were selected as control group.The expression of P-gp170 of renal tissues in all groups were detected by immunohistochemical method,and the correlations between P-gp170 expression and disease course,recurrence time,the dosage of glucocorticoid were analyzed.ResultsThe expression of P-gp170 were higher in incipient PNS without GC group,relapsed PNS without GC group and relapsed PNS with GC group than control group,and the differences had statistical significance(allP＜0.05).P-gp170 expression had no statistically significant difference between relapsed PNS without GC group and incipient PNS without GC group(allP＞0.05),and P-gp170 expression were higher in relapsed PNS with GC group than relapsed PNS without GC group,with statistically significant differences(allP＜0.05).P-gp170 expression were positively correlated with duration,dosage of glucocorticoid in relapsed PNS with GC group(r=0.651,r=0.788,P＜0.05),and was negatively correlated with recurrence time(r=0.794,P＜0.05).ConclusionP-gp170 is highly expressed in renal tissue of children with relapsed PNS.Its expression is closely related with duration,recurrence time and dosage of glucocorticoid.Testing the P-gp170 can effectively guide the clinical treatment of children with PNS and judge the prognosis.

Children;Primary nephrotic syndrome(PNS);P-glycoprotein170

R726.9

A

1003—6350（2015）20—2982—03

2015-04-16)

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.20.1086

付 輝。E-mail：fhts15@163.com