黃芪降濁顆粒的提取工藝研究

康新莉，謝 斌，盛 蓉，譚 睿

(1.西南交通大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院，四川 成都 610031； 2.成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，四川 成都 610075)

黃芪降濁顆粒的提取工藝研究

康新莉1，謝 斌1，盛 蓉2，譚 睿1

(1.西南交通大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院，四川 成都 610031； 2.成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，四川 成都 610075)

目的 優(yōu)選黃芪降濁顆粒的最佳提取工藝。方法 采用 L9（34）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，以黃芪甲苷含量和干膏得率為考察指標(biāo)，篩選黃芪降濁顆粒的提油和水提的最佳提取工藝。結(jié)果 優(yōu)選的黃芪降濁顆粒提油的最佳工藝條件為8倍量的水提取6 h；水提最佳工藝為15倍量水，煎煮3次，每次1 h。結(jié)論 優(yōu)選的生產(chǎn)工藝合理、可靠，適合現(xiàn)代化大生產(chǎn)。

黃芪降濁顆粒；提取工藝；黃芪甲苷；干膏率

近年來(lái)，糖尿病的發(fā)病率逐年增高，我國(guó)糖尿病患者將近9 240萬(wàn)人[1]。糖尿病腎病是糖尿病常見(jiàn)的慢性并發(fā)癥之一，是糖尿病致殘、致死的重要原因，在糖尿病人群中的發(fā)生率為20% ～40%[2]。黃芪降濁顆粒是一種治療糖尿病腎病的經(jīng)驗(yàn)方，由黃芪、金櫻子、川芎、雞內(nèi)金等中藥組方，有活血化瘀、托毒排膿降濁功效。由于本方以湯劑用藥，故對(duì)其水提提取工藝進(jìn)行了研究。

1 儀器與試藥

Waters 2695型高效液相色譜儀，Waters 2424型蒸發(fā)光散射（ELSD）檢測(cè)器；SL302K型電子天平(上海民橋精密科學(xué)儀器有限公司)；ZDHW型電熱套(北京中興偉業(yè)公司)；DL-1型調(diào)溫電爐（北京永光明醫(yī)療儀器廠）；HH-S6型數(shù)顯恒溫水浴鍋(北京科偉永興儀器有限公司)；DHG-9053A型數(shù)顯恒溫干燥箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）。黃芪 Astragalus membranaceus(Fisch.) Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao、金櫻子 Rosa laevigata Michx.等藥材均購(gòu)自成都市新荷花藥業(yè)公司，經(jīng)西南交通大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院譚睿教授鑒定為正品；黃芪甲苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，供含量測(cè)定用，批號(hào)為110781-200613）；乙腈為色譜純，水為重蒸水。

2 方法與結(jié)果

2.1 川芎與莪術(shù)揮發(fā)油的提取工藝研究

2.1.1 提取時(shí)間及加水量考察

川芎與莪術(shù)具有活血行氣的功效，而揮發(fā)油是其重要的活性成分，故分別測(cè)定其揮發(fā)油提取率。按處方量配比稱取川芎、莪術(shù)藥材3份，置揮發(fā)油提取器中，分別加入規(guī)定倍量水（見(jiàn)表1），浸泡過(guò)夜，按2010年版《中國(guó)藥典（一部）》附錄ⅩD揮發(fā)油測(cè)定法提取揮發(fā)油，自水微沸起記錄不同提取時(shí)間所得揮發(fā)油量。結(jié)果表明，提取時(shí)間在6 h后提取量無(wú)變化，故選擇最佳提取時(shí)間6 h；加水量為8倍、10倍時(shí)，6 h后的揮發(fā)油提取量無(wú)明顯差異?？紤]到經(jīng)濟(jì)效益，故優(yōu)選的揮發(fā)油提取最佳工藝為加8倍量的水，提取6 h。

表1 川芎和莪術(shù)揮發(fā)油提取量考察（mL）

2.1.2 驗(yàn)證試驗(yàn)

按處方量配比稱取川芎、莪術(shù)藥材3份，加8倍量水，用揮發(fā)油提取器分別提取揮發(fā)油，提取6 h，記錄揮發(fā)油量。結(jié)果，3次試驗(yàn)分別提取揮發(fā)油1.11，1.15，1.14 mL，平均1.13 mL，表明揮發(fā)油提取6 h較完全，且揮發(fā)油得率較穩(wěn)定。

2.2 水提工藝研究

2.2.1 黃芩甲苷含量測(cè)定

色譜條件：色譜柱為Diamonsil C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），柱溫為30℃，乙腈-水（36∶64）為流動(dòng)相，流速為1.0 mL／min；ELSD檢測(cè)器條件：增益20，氣壓30 psi，噴霧器加熱60%，漂移管溫度為60℃。理論板數(shù)按黃芪甲苷峰計(jì)應(yīng)不低于3 000。

溶液制備：稱取黃芪甲苷對(duì)照品13.00 mg，精密稱定，置25 mL容量瓶中，加甲醇定容，搖勻，即得對(duì)照品溶液（C=0.52 g／L）。取樣品研細(xì)，精密稱定，加水超聲，精密吸取相當(dāng)于1.975 g黃芪藥材的水提提取液，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次40 mL，合并正丁醇液，用氨試液洗滌3次，每次40 mL，棄去氨液，再用以正丁醇飽和的水溶液洗滌3次，每次40 mL，收集正丁醇液，蒸干，殘?jiān)蛹状迹? mL容量瓶中定容，搖勻，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

測(cè)定方法：分別精密吸取對(duì)照品溶液10 μL和20 μL、供試品溶液20 μL，注入液相色譜儀測(cè)定，用外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程計(jì)算黃芪甲苷含量。色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 高效液相色譜法

精密度試驗(yàn)：精密吸取同一黃芪甲苷對(duì)照品溶液，按擬訂色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次。結(jié)果峰面積值的 RSD為1.74%（n=6），表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批樣品6份，精密稱定，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果峰面積值的 RSD為1.93%（n=6），表明方法重復(fù)性較好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取同一供試品溶液，分別于0，2，4，6，8，10，12 h時(shí)進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果峰面積值的 RSD為1.84%（n=7），表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn)：取已知含量的同一批樣品6份，精密稱定，分別加入黃芪甲苷對(duì)照品溶液適量，按供試品溶液制備方法制備溶液，依法進(jìn)樣，測(cè)定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果黃芪甲苷的平均回收率為99.7%，RSD為2.3%（n=6）。

2.2.2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

處方主要以水煎為主，故考察處方其余藥材水提工藝。水提工藝研究的主要考察因素有加水量（因素A）、煎煮時(shí)間（因素B）和煎煮次數(shù)（因素C），按三因素三水平安排正交試驗(yàn)，設(shè)計(jì)按處方比例稱取79 g藥材，以綜合評(píng)分（黃芪甲苷含量占70%、浸膏得率占 30%）為考察指標(biāo)，對(duì)水提條件進(jìn)行優(yōu)選，設(shè)計(jì)因素水平見(jiàn)表2。

2.2.3 正交試驗(yàn)方法與結(jié)果

按處方量配比稱?。ǔㄜ?、莪術(shù)）藥材9份，分別按處方量配比稱取的藥材川芎、莪術(shù)提油后的藥渣，合并，按正交試驗(yàn)安排進(jìn)行提取，提取液合并，濾過(guò)，濾液濃縮，置已干燥的容器中，減壓干燥后稱重，計(jì)算干浸膏量并測(cè)定黃芪甲苷的含量。結(jié)果見(jiàn)表3及表4。

表2 水提工藝優(yōu)選因素水平表

表3 水提工藝優(yōu)選 L9(34)正交設(shè)計(jì)表

表4 水提工藝優(yōu)選方差分析結(jié)果

2.2.4 結(jié)果分析

黃芪降濁顆粒水提取工藝過(guò)程中，不同的工藝參數(shù)會(huì)影響提取效果，浸膏得率分布在12.35% ～35.92%，黃芪甲苷含量分布在0.134 7～0.387 9 mg／g，綜合評(píng)分分布在30.58～100.00分。綜合考慮，以綜合評(píng)分為指標(biāo)時(shí)，由表3可見(jiàn)，各因素作用的主次為C＞A＞B；方差分析結(jié)果表明，因素 C有顯著影響，因素A和因素 B影響較小，以A3B1C3為佳。最佳提取工藝條件為加15倍量水，煎煮3次，每次1 h。

2.2.5 驗(yàn)證試驗(yàn)

按處方比例稱取79 g處方量的藥材，按優(yōu)選的工藝提油后，藥渣與其他藥材按照優(yōu)選的工藝進(jìn)行水提取，即加15倍量水，煎煮3次，每次1 h。以干膏得率和黃芪甲苷含量為考察指標(biāo)，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表5?？梢?jiàn)，按篩選的最佳工藝提取，其干膏得率、黃芪甲苷含量基本穩(wěn)定，RSD為 1.98%（n=3），說(shuō)明該工藝穩(wěn)定、可行，確定為最佳提取工藝條件。

表5 水提工藝驗(yàn)證試驗(yàn)

3 討論

黃芪降濁顆粒是成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院經(jīng)過(guò)多年臨床實(shí)踐總結(jié)出來(lái)的經(jīng)驗(yàn)方，臨床使用多為湯劑，使用不便，為了提高患者用藥依從性，對(duì)其提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，制成適合臨床使用的顆粒制劑。本試驗(yàn)采用正交設(shè)計(jì)對(duì)其提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，確定的最佳提取工藝路線穩(wěn)定可行，適合工業(yè)化大生產(chǎn)。

建立色譜條件時(shí)，參考相關(guān)文獻(xiàn)（大多采用室溫，25～40℃），考慮到ELSD檢測(cè)器的特點(diǎn)，溫度太低不利于檢測(cè)，采用30℃柱溫進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果分離效果好、樣品穩(wěn)定；同時(shí)，參考藥典，在流速為1.0 mL／min條件下，試用乙腈-水（32∶68）、乙腈-水（36∶64）、乙腈-水（40∶60）為流動(dòng)相，結(jié)果以乙腈-水（36∶64）為流動(dòng)相時(shí)，黃芪甲苷目標(biāo)峰峰形和保留時(shí)間較好，故以此為流動(dòng)相。

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Study on Extracting Process for Huangqijiangzhuo Granules

Kang Xinli1,Xie Bin1,Sheng Rong2,Tan Rui1
(1.Southwest Jiaotong University,Chengdu,Sichuan,China 610031; 2.Teaching Hospital of Chengdu University of T.C.M,Chengdu,Sichuan,China 610075)

Objective To investigated the process of the optimum extraction for Huangqijiangzhuo Granules.M ethods The L9（34）orthogonal experiment design was adopted with the AstragalosideⅣ content and the dry extract yield as the investigating indexes for screening the optimum process conditions of the Water and Extraction for Huangqijiangzhuo Granules.Results The optimized volatile oil extraction conditions were as follows：adding 8 times the amount of water and extracting for 6 h;the optimized water extraction process conditions were as follows：adding 15 times the amount of water,decocting thrice and 1 h each time.Conclusion The optimize process is reasonable,reliable and suitable for modern mass production.

Huangqijiangzhuo Granules;extraction process;AstragalosideⅣ;dry extract rates

TQ461；R284.2

A

1006－4931(2015)23－0042－03

康新莉，女，在讀碩士研究生，藥師，研究方向?yàn)槊褡逅幬镔Y源評(píng)價(jià)，（電子信箱）1315356502＠qq.com；譚睿，女，博士研究生，教授，研究方向?yàn)橹兴庂|(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范化和新制劑研發(fā)，本文通訊作者，（電話）028-8734667（電子信箱）tanrui＠swjtu.edu.cn。

2015-03-27)