培土清心顆粒的抗炎效果研究*

莫秀梅，劉俊峰，陳玉興，曾小慧，薛素琴，趙 巍，陳達(dá)燦△

(1.廣東省中醫(yī)院，廣州 510120;2.廣東省中醫(yī)研究所，廣州 510095;3.廣州中醫(yī)藥大學(xué)，廣州 510004)

培土清心顆粒的抗炎效果研究*

莫秀梅1，劉俊峰1，陳玉興2，曾小慧2，薛素琴1，趙 巍3，陳達(dá)燦1△

(1.廣東省中醫(yī)院，廣州 510120;2.廣東省中醫(yī)研究所，廣州 510095;3.廣州中醫(yī)藥大學(xué)，廣州 510004)

目的:評(píng)價(jià)培土清心顆粒對(duì)實(shí)驗(yàn)性炎癥動(dòng)物模型的抗炎效果。方法:選擇SPF級(jí)NIH小鼠及SPF級(jí)SD大鼠，采用區(qū)組隨機(jī)實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行分組，包括正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、陽性藥物對(duì)照組以及培土清心顆粒高、中、低劑量組，分別創(chuàng)建二甲苯致小鼠耳廓腫脹、冰醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高以及大鼠棉球肉芽腫3種動(dòng)物模型，對(duì)造模成功后的動(dòng)物進(jìn)行灌胃，觀察評(píng)價(jià)培土清心顆粒的抗炎作用。結(jié)果:培土清心顆粒對(duì)二甲苯所致小鼠耳廓腫脹、冰醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高及棉球所致大鼠肉芽組織增生均有明顯抑制作用。結(jié)論:培土清心顆粒具有良好的抗急慢性炎癥效果，其抗炎作用與西藥吲哚美辛腸溶片和中成藥消風(fēng)止癢顆粒的效果相當(dāng)。

培土清心顆粒;特應(yīng)性皮炎;抗炎

特應(yīng)性皮炎(atopic dermatitis，AD)是一種慢性、頑固反復(fù)發(fā)作性、炎性皮膚病，其確切的發(fā)病機(jī)制目前尚不明確，一般認(rèn)為與一定遺傳和環(huán)境因素相關(guān)，是機(jī)體皮膚屏障功能障礙或免疫反應(yīng)失衡所導(dǎo)致的一系列變應(yīng)性或非變應(yīng)性炎癥反應(yīng)［1］。因此，修復(fù)皮膚屏障、抑制變態(tài)反應(yīng)、阻斷炎癥介質(zhì)是控制AD皮膚炎癥病變的重要手段。迄今為止還沒有完全根治和控制AD復(fù)發(fā)的有效治療方法。常用的激素、抗組胺藥、免疫抑制劑等西藥更由于毒副作用明顯而受到嚴(yán)格限制，這使得包括中醫(yī)藥在內(nèi)的替代醫(yī)學(xué)治療日益受到廣泛關(guān)注［2］。培土清心顆粒是由廣東省中醫(yī)院皮科臨床經(jīng)驗(yàn)方制備而成的顆粒劑，主要用于治療特應(yīng)性皮炎、濕疹等頑固、反復(fù)發(fā)作性、瘙癢性皮膚病，經(jīng)多年驗(yàn)證可以有效減輕AD患者皮損嚴(yán)重程度，控制瘙癢，改善生存質(zhì)量，臨床療效確切且副作用少［3］。為探討培土清心顆粒的療效機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)觀察了藥物對(duì)3種急慢性炎癥動(dòng)物模型的影響，研究其抗炎作用效果，為培土清心顆粒劑的新藥研發(fā)提供重要的藥效依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物

NIH SPF級(jí)小鼠，雌雄各半，體質(zhì)量11～13 g，由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供(合格證號(hào)44007200010439、44007200010356)。SD SPF級(jí)大鼠，雌雄各半，體質(zhì)量80～100 g，由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供(合格證號(hào)44007200011185)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境:廣東省中醫(yī)藥工程技術(shù)研究院SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室(設(shè)施使用許可證號(hào) SYXK(粵)2010-0059)。

1.2 藥品與試劑

培土清心顆粒由廣東省中醫(yī)藥工程技術(shù)研究院中藥制劑研究室提供(批號(hào)201307001)。消風(fēng)止癢顆粒，吉林紫鑫藥業(yè)股份有限公司(國(guó)藥準(zhǔn)字Z22025024，批號(hào)140205)。吲哚美辛腸溶片(消炎痛)，江蘇亞邦愛普森藥業(yè)有限公司(國(guó)藥準(zhǔn)字H32021431，25 mg×100 s，批號(hào)1303002)。

1.3 試劑

二甲苯，廣州市中南化學(xué)試劑有限公司(批號(hào)130817);冰醋酸，廣州化學(xué)試劑廠(批號(hào)20130901-2);EVANSBLUE，UNI-CHEM(批號(hào)GD4061465);乙醚，廣州化學(xué)試劑廠產(chǎn)品(批號(hào)20130916-1)。

1.4 儀器

JJ3000動(dòng)物電子秤，G＆G公司產(chǎn)品;BS224S電子天平(1/萬)，德國(guó)SARTORIUS產(chǎn)品;UV-2501PC型紫外分光光度計(jì)，日本SHIMADZU公司產(chǎn)品;0.8 cm金屬打孔器，廣州市正宏醫(yī)療器械設(shè)備有限公司提供。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 15.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，方差齊、正態(tài)分布以及組間均數(shù)兩兩比較采用SNK法，方差不齊或非正態(tài)分布采用Dunnett’s T3法，多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響［4］

表1顯示，NIH小鼠84只，雌雄各半，按體質(zhì)量隨機(jī)均分為7組，分別為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、吲哚美辛腸溶片9.75 mg·kg－1組、消風(fēng)止癢顆粒5.85 g顆?！g－1組、培土清心顆粒3.12 g顆?！?kg－1組、培土清心顆粒1.56 g顆?！g－1組、培土清心顆粒0.78 g顆粒·kg－1組。各給藥組按20 ml· kg－1分別劑量灌胃給藥，正常對(duì)照組、模型對(duì)照組給予等體積蒸餾水灌胃，每日1次，連續(xù)給藥7 d。末次給藥間隔30 min后，除正常對(duì)照組外，其余各組每只小鼠右耳均勻涂抹二甲苯溶液20 μL，正常對(duì)照組小鼠右耳涂抹同等量生理鹽水溶液，4 h后脫頸椎處死小鼠，剪下雙側(cè)耳，用直徑8 mm金屬打孔器分別打下小鼠雙側(cè)耳片、稱重，以左右兩側(cè)耳質(zhì)量的差值作為小鼠二甲苯耳廓炎癥腫脹度，計(jì)算抑制率((對(duì)照組耳廓腫脹度－給藥組耳廓腫脹度)/對(duì)照組耳廓腫脹度×100%)。結(jié)果表明，模型對(duì)照組小鼠耳廓腫脹度較正常對(duì)照組顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。培土清心顆粒3.12 g顆?！?kg－1、1.56 g顆?！g－1、0.78 g顆?！g－1組小鼠耳廓腫脹度較模型對(duì)照組明顯減小，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。

2.1 對(duì)冰醋酸所致腹腔毛細(xì)血管通透性增高小鼠的影響［4］

表2顯示，SPF級(jí)NIH小鼠84只，雌雄各半，按體質(zhì)量隨機(jī)分為7組，分別為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、吲哚美辛腸溶片9.75 mg·kg－1組、消風(fēng)止癢顆粒5.85 g顆?！g－1組、培土清心顆粒3.12 g顆?！g－1組、培土清心顆粒1.56 g顆?！g－1組、培土清心顆粒0.78 g顆?！g－1組。各給藥組按20 ml ·kg－1劑量灌胃給藥，各對(duì)照組給予等體積蒸餾水灌胃，每天1次，連續(xù)給藥7 d。末次給藥后1 h，各小鼠均以0.5%伊文思藍(lán)生理鹽水溶液按照劑量0.1 mL·10 g－1尾靜脈注射。正常對(duì)照組小鼠隨即腹腔注射生理鹽水溶液0.2 mL·只－1，其余各組小鼠腹腔注射0.6%冰醋酸溶液0.2 mL·只－1。20 min后脫頸椎處死小鼠，剪開小鼠腹腔，用6 mL生理鹽水洗滌數(shù)次，將所有洗滌液吸出加生理鹽水至10 mL，3000 r/min離心10 min，于590 nm處取上清液比色測(cè)定A值，計(jì)算抑制率((對(duì)照組A值－給藥組A值)/對(duì)照組A值×100%)。結(jié)果表明，模型對(duì)照組小鼠腹腔洗滌液A值較正常對(duì)照組顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。培土清心顆粒3.12 g顆?！g－1、1.56 g顆?！g－1、0.78 g顆?！g－1組小鼠腹腔洗滌液A值較模型對(duì)照組顯著減小，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。

表1 培土清心顆粒對(duì)二甲苯所致耳廓腫脹小鼠的影響(±s)

表1 培土清心顆粒對(duì)二甲苯所致耳廓腫脹小鼠的影響(±s)

注:與正常對(duì)照組比較:*P＜0.05，＊＊P＜0.01;與模型對(duì)照組比較:#P＜0.05，##P＜0.01

組別 鼠數(shù) 劑 量 耳廓腫脹度(mg)抑制率(%)正 常 對(duì) 照 組 12 等體積 －0.175±0.771—46.4模 型 對(duì) 照 組 12 等體積 10.850±4.615＊＊ —吲哚美辛腸溶片 12 9.75 mg·kg－1 6.158±3.075## 43.2消風(fēng)止癢顆粒 12 5.85 g顆粒·kg－1 5.058±3.042## 53.4培土清心顆粒 12 3.12 g顆?！g－1 5.383±2.339## 50.4培土清心顆粒 12 1.56 g顆?！g－1 5.683±3.147## 47.6培土清心顆粒 12 0.78 g顆粒·kg－1 5.811±2.557##

表2 培土清心顆粒對(duì)腹腔毛細(xì)血管通透性增高小鼠的影響(±s)

表2 培土清心顆粒對(duì)腹腔毛細(xì)血管通透性增高小鼠的影響(±s)

注:與正常對(duì)照組比較:＊＊P＜0.05，P＜0.01;與模型對(duì)照組比較:##P＜0.05，P＜0.01

組別 鼠數(shù) 劑 量 A值(mg) 抑制率(%)正 常 對(duì) 照 組 12 等體積 0.078±0.032—25.4模 型 對(duì) 照 組 12 等體積 1.138±0.384＊＊ —吲哚美辛腸溶片 12 9.75 mg·kg－1 0.477±0.194## 58.1消風(fēng)止癢顆粒 12 5.85 g顆粒·kg－1 0.840±0.222## 26.2培土清心顆粒 12 3.12 g顆?！g－1 0.797±0.130## 30.0培土清心顆粒 12 1.56 g顆粒·kg－1 0.807±0.209## 29.1培土清心顆粒 12 0.78 g顆?！g－1 0.849±0.162##

2.2 對(duì)棉球肉芽腫大鼠的影響［5-6］

表3顯示，SD大鼠60只，雌雄各半，按體質(zhì)量隨機(jī)均分為6組，分別為對(duì)照組、吲哚美辛腸溶片6.75 mg·kg－1組、消風(fēng)止癢顆粒4.05 g顆粒·kg－1組、培土清心顆粒2.16 g顆?！g－1組、培土清心顆粒1.08 g顆?！g－1組、培土清心顆粒0.54 g顆?！g－1組。各組大鼠乙醚淺麻醉，無菌操作下經(jīng)胸腹部切口1 cm，將2個(gè)無菌棉球(每個(gè)棉球重20 mg，高壓滅菌)分別植入大鼠兩側(cè)腋窩皮下，切口縫合，碘酊消毒。植入棉球當(dāng)天各給藥組大鼠按劑量灌胃給藥，給藥體積為10 mL·kg－1，對(duì)照組同法灌胃給予蒸餾水10 mL·kg－1，每天1次，連續(xù)7 d。末次給藥后30 min脫頸椎處死大鼠，取出大鼠兩側(cè)腋窩皮下棉球，稱棉球濕重，置60℃烘箱烘6 h至恒重，稱棉球干重。以棉球濕重、棉球干重?cái)?shù)值減去原棉球質(zhì)量(20 mg×2)即為肉芽腫濕重、肉芽腫干重，計(jì)算抑制率。肉芽腫干重抑制率(%)=(對(duì)照組肉芽腫干重－給藥組肉芽腫干重)/對(duì)照組肉芽腫干重×100%。結(jié)果表明，與對(duì)照組比較，培土清心顆粒2.16 g顆?！g－1、1.08 g顆?！g－1、0.54 g顆粒·kg－1組大鼠肉芽腫濕重、干重?cái)?shù)值均明顯減小(P＜0.01)。

表3 培土清心顆粒對(duì)棉球肉芽腫大鼠的影響(±s，n=10)

表3 培土清心顆粒對(duì)棉球肉芽腫大鼠的影響(±s，n=10)

注:與正常對(duì)照組比較:*P＜0.05，＊＊P＜0.01

組別 劑 量 肉芽腫濕重(mg) 肉芽腫干重(mg) 肉芽腫干重抑制率(%)對(duì) 照 組 等體積 675.730±48.969 97.900±9.582—16.8吲 哚 美 辛 腸 溶 片 6.75 mg·kg－1 518.110±55.223＊＊ 74.230±9.108＊＊ 24.2消 風(fēng) 止 癢 顆 粒 4.05 g顆?！g－1 548.610±65.294＊＊ 80.360±7.267＊＊ 17.9培 土 清 心 顆 粒 2.16 g顆?！g－1 547.660±98.216＊＊ 77.430±6.994＊＊ 20.9培 土 清 心 顆 粒 1.08 g顆?！g－1 563.540±71.527＊＊ 76.170±11.258＊＊ 22.2培 土 清 心 顆 粒 0.54 g顆?！g－1 554.560±79.304＊＊ 81.480±10.181＊＊

3 討論

皮膚是人體和外界環(huán)境之間的第一道屏障，包括化學(xué)、微生物、機(jī)械性刺激等各種因素攻擊皮膚導(dǎo)致的損傷、抗損傷和修復(fù)等一系列復(fù)雜反應(yīng)，就是機(jī)體的防御性反應(yīng)—炎癥(inflammation)。變質(zhì)、滲出和增生是炎癥的基本病理變化［7］。頑固反復(fù)發(fā)作的瘙癢和皮損是特應(yīng)性皮炎患者的主要臨床表現(xiàn)。AD急性發(fā)作期主要表現(xiàn)為廣泛的紅斑、丘疹、水皰甚至滲出、糜爛等，慢性緩解期則以皮膚干燥、粗糙、肥厚、色素沉著為主，兩者往往交替反復(fù)、纏綿不愈。其組織病理與其他皮炎濕疹病理表現(xiàn)一致，無特異性，均為各種原因刺激誘發(fā)的皮膚炎癥反應(yīng)。

炎癥根據(jù)病程通?？煞譃榧毙匝装Y和慢性炎癥兩大類。急性炎癥以滲出性病變?yōu)槠涮卣?，炎?xì)胞以粒細(xì)胞浸潤(rùn)為主;慢性炎癥常以增生性病變?yōu)橹?，其炎?xì)胞則以巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞為主。本實(shí)驗(yàn)采用3種模型來觀察培土清心顆粒的抗炎效果。其中二甲苯和冰醋酸所致的小鼠模型均屬于急性炎癥模型，通過較高濃度的炎性物質(zhì)刺激，導(dǎo)致皮膚血管局部充血、擴(kuò)張和炎癥細(xì)胞聚集，急性滲出、水腫，從而形成皮膚急性炎性病灶，是用于評(píng)價(jià)藥物對(duì)炎癥早期毛細(xì)血管通透性影響的主要模型，反映藥物對(duì)急性炎癥的抑制作用［8-9］。棉球肉芽腫實(shí)驗(yàn)屬于增生性炎癥實(shí)驗(yàn)，棉球埋入小鼠局部皮下后可產(chǎn)生與臨床某些炎癥后期病理變化相似的肉芽增生，棉球誘導(dǎo)的小鼠肉芽腫模型造成的病理變化符合慢性炎癥模型，是常用的篩選抑制炎癥增殖期藥物的模型［10-11］。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，培土清心顆粒對(duì)二甲苯所致小鼠耳廓腫脹、冰醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高以及棉球所致大鼠肉芽組織增生均有明顯抑制作用。這與培土清心顆粒組方中連翹、白鮮皮、白茅根、珍珠粉等單味中藥的抗炎作用一致［12-15］?？梢姡嗤燎逍念w?？擅黠@抑制炎癥急性期的滲出、水腫以及慢性期的肉芽腫增生，表明該藥對(duì)皮膚的急慢性炎癥均有較好的治療作用，其抗炎效果與西藥吲哚美辛腸溶片、中成藥消風(fēng)止癢顆粒相當(dāng)。

本試驗(yàn)從抗炎角度初步闡釋了培土清心顆粒治療特應(yīng)性皮炎的療效機(jī)制。但特應(yīng)性皮炎的病機(jī)十分復(fù)雜，加之中藥治療具有多途徑、多靶點(diǎn)、多效性等特點(diǎn)，因此對(duì)培土清心顆粒的確切治療機(jī)制探討還有待多角度、多環(huán)節(jié)開展深入研究，為中藥新藥的開發(fā)和利用提供重要的理論依據(jù)。

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Pharmacodynamic Research of the Anti-inflammation Effect on PeiTu QingXin(PTQX)Granules

MO Xiu-mei1，LIU Jun-feng1，CHEN Yu-xing2，ZENG Xiao-hui2，XUE Su-qing1，ZHAO Wei3，CHEN Dan-can1△
(1.Guangdong Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine(TCM)，Guangzhou 510120，China;2.Guangdong Provincial Institute of TCM，Guangzhou 510095，China;.3.Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510004，China)

Objective:To observe the effect on anti-inflammation of PeiTu QingXin(PTQX)granules.Method: Selecting the modols of xylene-induced mouse ear swelling、abdominal cavity capillary permeability increased by aceticacid and cotton pellet granuloma in rats for the study，Treated with PTQX granules，and observing the manifestations to deducing the anti-inflammation eflect of drugs.Results:All doses groups of PTQX granules can obviously reduce xylene-induced mouse ear swelling、aceticacid induced abdominal cavity capillary permeability increasing and cotton pellet granuloma in rats.Conclusion:PTQX granules has well anti-inflammatory propertiem.Anti-inflammatory effect of PTQX granules is similar to indometacin and Xiaofengzhiyang granules.

PeiTu QingXin(PTQX)granules;atopic dermatits;anti-inflammation eflects

R758.2

B

1006-3250(2015)06-0744-03

2015-04-08

廣東省中醫(yī)藥管理局(粵中醫(yī)［2013］17號(hào));廣東省財(cái)政廳(粵財(cái)工［2014］76號(hào)，2014KT1524);廣東省財(cái)政廳(粵財(cái)工［2013］134號(hào));廣東省財(cái)政廳(粵財(cái)工［2011］572號(hào))

莫秀梅，主治醫(yī)師，醫(yī)學(xué)博士，從事中醫(yī)藥治療變態(tài)反應(yīng)性皮膚病的臨床與研究。

△通訊作者:陳達(dá)燦，教授，博士研究生導(dǎo)師，從事中醫(yī)藥治療變態(tài)反應(yīng)性皮膚病的臨床與研究，Tel:020-81887233，E-mail:4910702@163.com。