• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    Bcl-2與卵巢顆粒細(xì)胞凋亡相關(guān)性研究

    2015-04-07 09:35:43藺會(huì)蘭孫曉慧劉俊霞金立娟田碩張藝瑋楊尊會(huì)鐔麗霞
    河北醫(yī)藥 2015年9期
    關(guān)鍵詞:顆粒細(xì)胞卵母細(xì)胞卵泡

    藺會(huì)蘭 孫曉慧 劉俊霞 金立娟 田碩 張藝瑋 楊尊會(huì) 鐔麗霞

    作者單位: 050011河北省石家莊市第一醫(yī)院

    Bcl-2與卵巢顆粒細(xì)胞凋亡相關(guān)性研究

    藺會(huì)蘭孫曉慧劉俊霞金立娟田碩張藝瑋楊尊會(huì)鐔麗霞

    作者單位: 050011河北省石家莊市第一醫(yī)院

    【摘要】目的比較卵巢功能減退患者和卵巢功能正常女性顆粒細(xì)胞凋亡及Bcl-2表達(dá)情況,探討卵巢功能減退的發(fā)病機(jī)制。方法選擇接受體外受精-胚胎移植(IVF-ET)治療的不孕患者48例,其中卵巢功能減退患者23例,卵巢功能正常對(duì)照患者25例。于取卵日收集卵泡液,離心收集顆粒細(xì)胞培養(yǎng),用TUNEL檢測顆粒細(xì)胞凋亡情況。免疫組化分析顆粒細(xì)胞Bcl-2蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果卵巢功能減退組和卵巢功能正常組顆粒細(xì)胞凋亡率分別為(27 ±13) %、(18±8) %,卵巢功能減退組顆粒細(xì)胞凋亡率較對(duì)照組增高(P<0.05) ;免疫組化分析顯示Bcl-2主要在顆粒細(xì)胞胞漿中表達(dá),卵巢功能減退組Bcl-2蛋白表達(dá)較正常對(duì)照組下調(diào)(P<0.05)。結(jié)論Bcl-2可能通過調(diào)節(jié)顆粒細(xì)胞凋亡情況,影響卵泡發(fā)育及卵巢的功能。

    【關(guān)鍵詞】顆粒細(xì)胞;凋亡; Bcl-2;卵巢功能

    項(xiàng)目來源:石家莊市科學(xué)技術(shù)研究與發(fā)展指導(dǎo)計(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào): 131462553)

    E-mail: linhl2011bs@163.com

    近年來由于社會(huì)性、醫(yī)源性和自身因素的影響,卵巢功能減退發(fā)病率越來越高。尋找卵巢功能減退的發(fā)病機(jī)制對(duì)改善卵巢功能至關(guān)重要。卵泡由1個(gè)居于核心的卵母細(xì)胞及周圍的顆粒細(xì)胞和卵泡膜細(xì)胞組成。在卵泡發(fā)育過程中,顆粒細(xì)胞的增殖、分化對(duì)卵母細(xì)胞的發(fā)育成熟起重要作用。顆粒細(xì)胞凋亡與卵子閉鎖及卵巢功能減退關(guān)系密切[1]。有學(xué)者認(rèn)為當(dāng)顆粒細(xì)胞凋亡達(dá)10%以上時(shí)該卵泡發(fā)生閉鎖,從而影響卵巢功能[2]。本研究通過比較卵巢功能減退患者和正常女性顆粒細(xì)胞凋亡及Bcl-2表達(dá)情況,探討卵巢功能減退的發(fā)病機(jī)制。

    1 資料與方法

    1.1一般資料選擇我院2012年10月至2013年10月接受體外受精-胚胎移植(IVF-ET/ICSI)治療的不孕患者48例。納入標(biāo)準(zhǔn):年齡25~40歲,月經(jīng)周期25~35 d,B超檢查除外卵巢多囊改變、子宮肌瘤、子宮內(nèi)膜異位癥聲像改變,除外發(fā)熱及炎癥疾病,除外甲狀腺疾病、腎上腺疾病及其他系統(tǒng)腫瘤等?;颊吆炇鹬橥鈺8鶕?jù)基礎(chǔ)FSH值和卵巢基礎(chǔ)竇卵泡數(shù)分為卵巢功能正常對(duì)照組(FSH<8 U/L且竇卵泡數(shù)>5 枚) 25例和卵巢功能減退組(FSH>10 U/L或竇卵泡數(shù)<5枚) 23例。

    1.2控制性超促排卵方案卵巢功能正?;颊卟捎贸R?guī)長方案超促排卵。于前1個(gè)月經(jīng)周期B超監(jiān)測排卵,排卵后7 d(月經(jīng)第21~23天)開始每天皮下注射GnRH激動(dòng)劑曲普瑞林(博福益普生制藥生產(chǎn)) 0.05~0.1 mg,14 d后根據(jù)患者的年齡、AFC及基礎(chǔ)血清FSH、LH、E2水平確定促性腺激素,采用重組人促卵泡素(商品名果納芬,默克雪蘭諾公司)和尿促性激素(HMG,麗珠制藥有限公司)劑量。陰道B超開始監(jiān)測卵泡大小,根據(jù)卵泡發(fā)育情況,調(diào)整用量劑量直至注射人絨毛膜促性腺激素(HCG)日止;卵巢功能減退患者采用短方案促排卵,在超促排卵前即月經(jīng)第2天B超下進(jìn)行竇卵泡計(jì)數(shù)、有無卵巢囊腫,給予GnRH激動(dòng)劑曲普瑞林0.1 mg,1次/d,月經(jīng)的第3天給予促排卵藥物,陰道B超開始監(jiān)測卵泡大小,直至HCG日止當(dāng)1個(gè)主導(dǎo)卵泡平均直徑超過18 mm、2個(gè)主導(dǎo)卵泡平均直徑超過17 mm、3個(gè)主導(dǎo)卵泡平均直徑超過16 mm時(shí)給予人絨毛膜促性腺激素(HCG) 5 000或10 000 U肌內(nèi)注射,36 h后經(jīng)陰道超聲取卵。取卵后第3天超聲引導(dǎo)下行胚胎移植。

    1.3顆粒細(xì)胞凋亡檢測取卵后,顯微鏡下小心剝離卵母細(xì)胞,剩余卵泡液收集于無菌試管中,2 500 r/mi離心10 min,棄上清,收集顆粒細(xì)胞用TUNEL方法進(jìn)行染色:將顆粒細(xì)胞涂片用10%福爾馬林磷酸鹽緩沖液固定30 min后PBS沖洗,放入0.3%H2O2中1 h,加入0.1% TritonX-100,4℃反應(yīng)2 min,加入Tunel反應(yīng)混合物37℃濕盒中反應(yīng)1 h,加入DAB顯色,蘇木素復(fù)染,光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)胞凋亡情況并計(jì)數(shù)凋亡細(xì)胞百分比。凋亡陽性細(xì)胞在光鏡下呈棕黃色,正常細(xì)胞無著色。顯微鏡下任意選取視野,共計(jì)數(shù)500個(gè)細(xì)胞計(jì)算凋亡率(凋亡率=凋亡陽性的細(xì)胞數(shù)/細(xì)胞總數(shù)×100%)。

    1.4免疫組化法檢測顆粒細(xì)胞Bcl-2蛋白的表達(dá)吸取上層顆粒細(xì)胞放于PBS溶液中,1 000 r/min×10 min離心;棄上清,用1~2 ml的PBS重懸顆粒細(xì)胞,過300目細(xì)胞篩,即獲取顆粒細(xì)胞的單細(xì)胞懸液,取顆粒細(xì)胞的單細(xì)胞懸液1 ml,用6 ml含有10%胎牛血清的DMEM重懸細(xì)胞,PBS漂洗兩遍后,1% Triton-100室溫孵育30 min破膜; PBS漂洗3遍后,滴加3% H2O2。室溫孵育30 min; PBS漂洗3遍后,滴加封閉液,室溫孵育20 min;移除封閉液后,滴加Ⅰ抗(1∶100) 4℃過夜; PBS漂洗3遍后滴加Ⅱ抗37℃25 min; PBS漂洗3遍后滴加SABC20,37℃20 min,再用PBS漂洗DAB顯色;最后用蘇木精復(fù)染細(xì)胞核,用1%鹽酸酒精分化,用1%氨水返藍(lán),再經(jīng)過乙醇梯度脫水、松節(jié)油透明后即可封片、鏡下觀察和采集圖像。

    1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件,計(jì)量資料以±s表示,采用t檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.12組臨床資料比較卵巢功能減退組和卵巢功能正常組患者年齡、促黃體生成素(LH)、睪酮比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05) ;卵巢功能減退組和卵巢功能正常組患者FSH、E2、竇卵泡數(shù)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

    表1 2組臨床資料比較 ±s

    表1 2組臨床資料比較 ±s

    注:與卵巢功能正常組比較,*P<0.05

    指標(biāo) 卵巢功能減退組(n=23) 卵巢功能正常組(n=25)年齡(歲)33.24±4.62 30.82±4.12體重指數(shù)(kg/m2) 21.54±9.72 20.68±9.35不孕年限(年) 4.21±2.17 3.83±1.76 FSH(U/L) 11.48±1.06* 6.28±0.92 LH(U/L) 5.44±1.94 4.55±1.03 E2(pmol/ml) 215.49±57.38* 189.75±71.06 T(pmol/ml) 1.07±0.66 1.18±0.58竇卵泡數(shù)(枚) 6.53±1.88*14.34±3.29

    2.22組顆粒細(xì)胞凋亡率比較卵巢功能減退組顆粒細(xì)胞凋亡率為(27±13) %高于卵巢功能正常組的(18±8) %,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),TUNEL染色卵巢功能減退組顆粒細(xì)胞表現(xiàn)為棕黃色,正常組無著色。

    2.3免疫細(xì)胞化學(xué)檢測bcl-2蛋白的表達(dá)卵巢功能減退患者顆粒細(xì)胞陽性細(xì)胞數(shù)低于正常對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。顆粒細(xì)胞著色深度低于正常對(duì)照組。見圖1。

    3 討論

    圖1 免疫細(xì)胞化學(xué)檢測bcl-2蛋白表達(dá)(DAB顯色×400)

    卵巢功能減退是婦科常見疾病之一,近年發(fā)病率呈上升趨勢。引起卵巢功能減退的原因可能有遺傳性、免疫性、醫(yī)源性、代謝性因素,環(huán)境污染、毒物接觸及吸煙、抑郁和未產(chǎn)婦長期月經(jīng)紊亂等,其臨床表現(xiàn)主要以閉經(jīng)、不育、雌激素缺乏及促性腺激素水平升高為特征,常伴有圍絕經(jīng)期綜合征的癥狀,如潮熱、多汗、情緒不穩(wěn)定、性欲低下、陰道干澀等。處于生育期的女性提早閉經(jīng),在心理上會(huì)產(chǎn)生沉重包袱,影響婚姻生活質(zhì)量,產(chǎn)生一系列心理和社會(huì)問題。卵巢功能減退的治療方法包括:卵巢組織冷凍、激素替代、中醫(yī)中藥等[3]。

    卵巢中卵泡發(fā)育由始基卵泡、初級(jí)卵泡、次級(jí)卵泡到成熟卵泡,其中99%的卵泡在不同階段閉鎖。對(duì)發(fā)育卵泡而言,細(xì)胞凋亡的最終表現(xiàn)為卵泡閉鎖,其中顆粒細(xì)胞凋亡是導(dǎo)致卵泡閉鎖的重要直接原因。卵巢功能減退的主要原因就是卵巢顆粒細(xì)胞凋亡增加,卵泡閉鎖加速,卵母細(xì)胞的凋亡[4]。顆粒細(xì)胞是卵泡表面包裹的一層壁細(xì)胞,其與卵母細(xì)胞間存在復(fù)雜的連接機(jī)制,在卵丘周圍形成一個(gè)多層次的細(xì)胞網(wǎng)絡(luò),與卵泡進(jìn)行物質(zhì)交換及細(xì)胞間信號(hào)傳導(dǎo)。顆粒細(xì)胞一方面運(yùn)輸營養(yǎng)物質(zhì)給卵母細(xì)胞,另一方面與卵泡內(nèi)膜細(xì)胞共同作用分泌激素、生長因子等多種物質(zhì),影響卵母細(xì)胞發(fā)育,影響卵巢功能[5]。此外,顆粒細(xì)胞貯存并釋放的某些生長因子和特定蛋白質(zhì)在卵母細(xì)胞成熟及胚胎發(fā)育過程中按一定順序表達(dá)并選擇性地彌散來發(fā)揮調(diào)節(jié)胚胎發(fā)育的作用[6]。在卵泡周期性發(fā)育過程中,各個(gè)時(shí)期卵泡的閉鎖與顆粒細(xì)胞凋亡密切相關(guān)[7]。顆粒細(xì)胞凋亡增加可能影響卵母細(xì)胞的成熟,進(jìn)一步影響受精和胚胎的發(fā)育潛能[8]。有研究[9]表明顆粒細(xì)胞的凋亡與卵母細(xì)胞核的成熟、受精有關(guān)。也有研究表明顆粒細(xì)胞凋亡增加可能會(huì)引起卵母細(xì)胞核成熟延遲,導(dǎo)致受精能力下降[10,11]。卵巢顆粒細(xì)胞凋亡是處在一個(gè)非常復(fù)雜內(nèi)環(huán)境控制下完成的,并具有高度協(xié)調(diào)性,它不僅有下丘腦-垂體-卵巢軸調(diào)節(jié)作用,也有卵巢本身的旁分泌和自分泌因子的調(diào)控機(jī)制,也存在其他組織產(chǎn)生的影響細(xì)胞凋亡的物質(zhì)的作用[12]。顆粒細(xì)胞凋亡受卵泡刺激素、黃體生成素、雌孕激素、生長因子及受體和細(xì)胞活素等因素影響。線粒體DNA缺失可能會(huì)使卵泡細(xì)胞凋亡加速而引起卵巢早衰[13]lee等[14]將鼠線粒體與卵巢顆粒細(xì)胞共同培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn),線粒體具有防止顆粒細(xì)胞凋亡的作用,但具體機(jī)制尚不十分清楚。本研究中卵巢功能減退患者顆粒細(xì)胞凋亡率明顯高于卵巢功能正常者。

    參與細(xì)胞凋亡調(diào)控的重要基因有多種,其中B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2原癌基因(Bcl-2)家族對(duì)凋亡起決定作用的。Bcl-2家族位于胞質(zhì)面的線粒體外膜、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜和核膜上,已知的家族成員至少有15個(gè),抑制凋亡發(fā)生的主要成員包括Bcl-2、Bcl-XL、Bcl-W等。Bcl-2基因是一種細(xì)胞凋亡信號(hào)基因,其家族成員是細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵性調(diào)節(jié)因素。Bcl-2蛋白可存在于免疫、神經(jīng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)等正常組織中,亦存在于人卵巢組織中。有研究發(fā)現(xiàn)對(duì)鼠類卵巢顆粒細(xì)胞凋亡起決定性作用[15]。對(duì)只在卵細(xì)胞表達(dá)Bcl-2而在體細(xì)胞中無表達(dá)的小鼠研究發(fā)現(xiàn)卵細(xì)胞凋亡受抑制,這些小鼠竇前卵泡的閉鎖明顯少于野生型小鼠,說明Bcl-2有保護(hù)竇前卵泡的作用,其作用機(jī)制可能是抑制卵細(xì)胞凋亡[16]。研究表明Bcl-2不僅可以通過直接抑制卵細(xì)胞凋亡或促進(jìn)始基卵泡數(shù)量增多等途徑發(fā)揮其對(duì)卵泡的發(fā)育調(diào)節(jié)作用,其抗凋亡作用還可能通過卵泡內(nèi)顆粒細(xì)胞發(fā)揮作用。卵巢顆粒細(xì)胞的凋亡通過線粒體途徑介導(dǎo)bax表達(dá),誘導(dǎo)細(xì)胞色素C從線粒體釋放出來,繼而激活Caspase-3、Caspase-9,引發(fā)Caspases級(jí)聯(lián)反應(yīng),導(dǎo)致凋亡[17]。而Bcl-2通過抗氧化途徑起到抑制凋亡的作用[18]。有研究表明Bcl-2可以防止線粒體內(nèi)Ca2+與細(xì)胞色素C向外釋放,降低細(xì)胞代謝過程的活性氧,抑制顆粒細(xì)胞的凋亡[19]。有研究發(fā)現(xiàn)卵巢顆粒細(xì)胞中特異表達(dá)Bcl-2的轉(zhuǎn)基因鼠,排卵數(shù)明顯高于對(duì)照組[20,21]。Bcl-2過表達(dá)可拮抗bax,抑制卵泡膜細(xì)胞及顆粒細(xì)胞的凋亡,促進(jìn)其分泌雌、孕激素,進(jìn)而控制卵母細(xì)胞凋亡,延緩卵泡閉鎖,改善圍絕經(jīng)期綜合征[22,23]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明,當(dāng)顆粒細(xì)胞凋亡導(dǎo)致卵泡閉鎖時(shí),在顆粒細(xì)胞內(nèi)幾乎檢測不到凋亡抑制基因的表達(dá)產(chǎn)物Bcl-2蛋白[24]。另外Bcl-2亦可防止一些與凋亡有關(guān)的基因被激活并抑制這些基因表達(dá)產(chǎn)物的功能。本研究利用免疫組化技術(shù)檢測顆粒細(xì)胞Bcl-2蛋白的表達(dá)結(jié)果顯示,Bcl-2蛋白主要在細(xì)胞漿著色,呈棕黃色。在卵巢功能減退患者的顆粒細(xì)胞中,Bcl-2陽性細(xì)胞數(shù)以及著色深度顯著低于正常卵巢的顆粒細(xì)胞。推測Bcl-2可能參與卵巢顆粒細(xì)胞的凋亡過程,間接影響卵母細(xì)胞的凋亡,在卵巢早衰的發(fā)生和發(fā)展中起重要作用。盡管Bcl-2調(diào)節(jié)顆粒細(xì)胞凋亡的具體機(jī)制目前尚不十分清楚,但通過對(duì)Bcl-2基因的研究,并將其導(dǎo)入卵巢組織中,將會(huì)成為是治療卵巢功能減退的一種新方法,也可為臨床診斷確定分子靶點(diǎn)的研究提供參考依據(jù)。

    參考文獻(xiàn)

    1Jaskelainen M,Kyranlahti A,Anttonen M,et al.TRAIL pathway compo nents and their putative role in granulosa cell apoptosis in the human ova ry.Differentiation,2009,77: 369-376.

    2Chauhan P,Sodhi A,Tarang S.Cisplatin-treated murine peritoneal macro phages induce apoptosis in L929 cells: role of Fas-Fas ligand and tumo necrosis factor-tumor necrosis factor receptor.Anticancer Drugs,2007 18: 187-196.

    3Smith SD,Mikkelsen AL,Lindenberg S,et al.Development of human oo cytes matured in vitro for 28 or 36 hours.Fertil Steril,2000,73: 5412 5441.

    4Perez GI,Trbovich AM,Gosden RG,et al.Mitochondria and the death oocytes.Nature,2000,403: 500-501.

    5Nelson LR,Bulun SE.Estrogen production and action.J Am Acad Der matol,2001,45: S116-S124.

    6Markstrom E,Svensson Ech,Shao R,et al.Surviao factors regulating ovar ian apoptosis-dependence on follicle differentiation.Reproduction,2002 123: 23-30.

    7Makarevich AV,Markkula M.Apoptosis and cell proliferation potential bovine embryos timulated with insulin-like growth factor I during in vitro maturation and culture.BiolReprod,2002,66: 386-392.

    8Hussein MR.Apoptosis in the ovary: molecular mechanisms.Hum Repro Update,2005,11: 161-177.

    9HostE,Mikkelsen AL,Lindenberg S,et al.Apoptosis in human cumulu cells in relation to maturation stage and cleavage of the corresponding oo cyte.Acta Obstet Gynecol Scand,2000,79: 936-940.

    10Host E,Gabrielsen A,Lindenberg S,et al.Apoptosis in human cumulu cells in relation to zona pellucida thickness variation,maturation stage and cleavage of the corresponding oocyte after intracytoplasmic sperm in jection.Fertil Steril,2002,77: 5112-5151.

    11Eija B,Rosa P,Mari Francis A,et al.Apoptosis of culture dgranulosalu tein cells is reduced by insulin-like growth factor and may correlate wit embryo fragmentation and pregnancy rate.Ferti Steri,2006,85: 474 480.

    12Hughes FM,Gorospe WC.Biochemical identification of apoptosis(pro grammed celldeath) in granulosa cells: evidence for potential mecha nism underlying follicular atresia.Endocrinology,1991,129: 2415 2422.

    13Das M,Djahanbakhch O,Hacihanefioglu B,et al.Granulosa cell surviv and proliferation are altered in polycystic ovary syndrome.J Clin Endo crinol Metab,2008,93: 881-887.

    14Lee KS,Joo BS,Yong JN,et al.Cumulus cells apoptosis as anindicato to predict the quality of oocytes.J Assist Reprod Genet,2001,18: 490 498.

    15Yang M,SuiD J,Zhu S,et al.Effectsof the total flavonesofpropo-li (TFP) on Fas、Bax and Bc-l2 protein expression in myocardialischem ic reperfused injury rats.Chin Pharmacol Bull,2005,21: 799-803.

    16Morita Y,Peres GL,Maravei DV,et al.Targeted expression of Bcl-2 i mouse oocytes inhibits ovarian follicle atresia and prevents spontaneou and chemotherapy_induced oocyte apoptosis in vitro.Mol Endocrinolo gy,1999,13: 841-850.

    17Yang PM,Chen HC,Tsai JS,et al.Cadmium induces Ca2+-dependen necrotic cell death through calpain-triggered mitochondrial depolariza tion and reactive oxygen speciesmediated inhibition of nuclear factor kappaB activity.Chem Res Toxicol,2007,20: 406-415.

    18Ranjan P,Boss JM.CEBPbeta regulates TNF inducedMnSOD expressio and protection against apoptosis.Apoptosis,2006,11: 1837-1849.

    19Oltvai ZN,Millman CL,Korsmeyen SJ.Bc-l 2 heterodimier-izes in viv with a conserved homolog bax that acceleratesprogrammed cell death Cell,1993,74: 609.

    20Lalier L,Cartron PF,Juin P,et al.Bax activation and mitochondrialin sertion during apoptosis.Apoptosis,2007,12: 887-896.

    21Kim MR,Tilly JL.Currentconceptsin Bcl-2 familymemberregulationoffemalegermcelldevelopmentandsurvival.Biochim Biophys Acta,2004,1644: 205-210.

    22吳際,張麗珠,李潭,等.性激素對(duì)卵巢顆粒細(xì)胞凋亡的作用.中華婦產(chǎn)科雜志,1998,33: 157.

    23Depalo R,Nappi L,Loverro G,et al.Evidence of apoptosis in humanprimordial and primary follicles.Hum Reprod,2003,18: 2678-2682.

    24Sharabidze N,Burkadze G,Sabakhtarashvili M.Cell adhesion and apop tosis in ovarian stromal hyperplasia and hyperthecosis.Georgian Me News,2006,131: 33-37.

    (收稿日期:2014-10-11

    通訊作者:孫曉慧,050011河北省石家莊市第一醫(yī)院;

    doi:10.3969/j.issn.1002-7386.2015.09.010

    【文章編號(hào)】1002-7386(2015) 09-1316-04

    【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

    【中圖分類號(hào)】R 7111.75

    猜你喜歡
    顆粒細(xì)胞卵母細(xì)胞卵泡
    MicroRNA調(diào)控卵巢顆粒細(xì)胞功能的研究進(jìn)展
    促排卵會(huì)加速 卵巢衰老嗎?
    小鼠竇前卵泡二維體外培養(yǎng)法的優(yōu)化研究
    大腿肌內(nèi)顆粒細(xì)胞瘤1例
    補(bǔ)腎活血方對(duì)卵巢早衰小鼠顆粒細(xì)胞TGF-β1TGF-βRⅡ、Smad2/3表達(dá)的影響
    中成藥(2017年9期)2017-12-19 13:34:22
    牛卵母細(xì)胞的體外成熟培養(yǎng)研究
    凋亡抑制劑Z-VAD-FMK在豬卵母細(xì)胞冷凍保存中的應(yīng)用
    卵巢卵泡膜細(xì)胞瘤的超聲表現(xiàn)
    卵泡的生長發(fā)育及其腔前卵泡體外培養(yǎng)研究進(jìn)展
    科技視界(2014年29期)2014-08-15 00:54:11
    微囊藻毒素LR對(duì)大鼠卵巢顆粒細(xì)胞氧化損傷和凋亡的影響
    免费av不卡在线播放| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 黄色丝袜av网址大全| 日本在线视频免费播放| 久9热在线精品视频| 亚洲最大成人手机在线| 国产中年淑女户外野战色| 午夜激情福利司机影院| 日韩欧美精品免费久久 | 一级黄色大片毛片| 看片在线看免费视频| 别揉我奶头 嗯啊视频| 国模一区二区三区四区视频| 天堂√8在线中文| www日本黄色视频网| 国产在线精品亚洲第一网站| 好男人在线观看高清免费视频| 精品乱码久久久久久99久播| 欧美在线黄色| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 日本 av在线| 88av欧美| 51午夜福利影视在线观看| 一区二区三区四区激情视频 | 日韩欧美精品免费久久 | 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 国产精品免费一区二区三区在线| 国产精品亚洲一级av第二区| av欧美777| av在线老鸭窝| 色视频www国产| 99riav亚洲国产免费| av在线天堂中文字幕| 99久久精品热视频| 久久国产精品影院| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 国产亚洲欧美在线一区二区| av欧美777| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 国内精品美女久久久久久| 免费在线观看日本一区| 免费看光身美女| 乱码一卡2卡4卡精品| 亚洲性夜色夜夜综合| 最好的美女福利视频网| h日本视频在线播放| 老司机午夜福利在线观看视频| 男插女下体视频免费在线播放| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 成人毛片a级毛片在线播放| 悠悠久久av| 精品不卡国产一区二区三区| 日韩欧美在线乱码| 好男人在线观看高清免费视频| 在线观看一区二区三区| 内射极品少妇av片p| 国产精品久久久久久久久免 | 我要搜黄色片| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 热99在线观看视频| 999久久久精品免费观看国产| 全区人妻精品视频| 国产熟女xx| 国产精品亚洲av一区麻豆| 亚洲国产色片| 亚洲精品影视一区二区三区av| 露出奶头的视频| avwww免费| 国产精品影院久久| 久久欧美精品欧美久久欧美| 国产免费一级a男人的天堂| 在线天堂最新版资源| 在线a可以看的网站| 99精品在免费线老司机午夜| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 精品午夜福利视频在线观看一区| 日本三级黄在线观看| 日韩有码中文字幕| 国产精华一区二区三区| 美女免费视频网站| 激情在线观看视频在线高清| netflix在线观看网站| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 国产三级中文精品| av在线蜜桃| 女同久久另类99精品国产91| 日韩大尺度精品在线看网址| 国产中年淑女户外野战色| 两人在一起打扑克的视频| 国产真实乱freesex| 嫩草影院新地址| 天天一区二区日本电影三级| a在线观看视频网站| 一级毛片久久久久久久久女| 九色成人免费人妻av| 一进一出好大好爽视频| 欧美日韩综合久久久久久 | 国产精品野战在线观看| 久久午夜亚洲精品久久| 99国产综合亚洲精品| 天堂√8在线中文| 色吧在线观看| 亚洲精品色激情综合| 亚洲自偷自拍三级| 久久精品国产清高在天天线| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 精品一区二区免费观看| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 热99在线观看视频| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 亚洲国产高清在线一区二区三| 国产熟女xx| 在线播放国产精品三级| 91麻豆av在线| www.999成人在线观看| 99热只有精品国产| 久久久久久久午夜电影| 精品午夜福利在线看| 亚洲片人在线观看| 国产精品影院久久| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 成人欧美大片| xxxwww97欧美| 欧美色视频一区免费| 青草久久国产| 日韩欧美精品免费久久 | 动漫黄色视频在线观看| 激情在线观看视频在线高清| 一本综合久久免费| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 99久久九九国产精品国产免费| 久久国产精品影院| 国产精品国产高清国产av| 国产伦精品一区二区三区视频9| 中文字幕熟女人妻在线| 白带黄色成豆腐渣| 美女 人体艺术 gogo| 夜夜爽天天搞| 国产黄色小视频在线观看| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 在线播放无遮挡| 99久久99久久久精品蜜桃| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 一区二区三区免费毛片| 九九热线精品视视频播放| 国产野战对白在线观看| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 中文字幕久久专区| 亚洲av成人精品一区久久| 国内精品久久久久精免费| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 亚洲成人久久性| 91午夜精品亚洲一区二区三区 | 国产免费一级a男人的天堂| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 听说在线观看完整版免费高清| 一本一本综合久久| 免费在线观看日本一区| 韩国av一区二区三区四区| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 久久精品人妻少妇| 我的老师免费观看完整版| 一区福利在线观看| 两个人视频免费观看高清| 简卡轻食公司| 欧美潮喷喷水| 国产乱人视频| 天堂动漫精品| 国产亚洲av嫩草精品影院| 亚洲第一电影网av| 日韩精品中文字幕看吧| 久久久久久国产a免费观看| 亚洲精品久久国产高清桃花| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 国产精品国产高清国产av| 久久久久亚洲av毛片大全| 波多野结衣高清作品| 日本 欧美在线| 欧美黄色淫秽网站| 国产免费男女视频| 亚洲精品日韩av片在线观看| 在线免费观看的www视频| 久久午夜亚洲精品久久| 亚洲欧美日韩东京热| 亚洲av免费在线观看| 在线看三级毛片| 免费无遮挡裸体视频| 久久精品影院6| 又爽又黄无遮挡网站| 国产精品亚洲一级av第二区| 性色av乱码一区二区三区2| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 精品久久久久久,| 精品久久久久久久末码| 99久久99久久久精品蜜桃| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 好男人在线观看高清免费视频| 欧美+日韩+精品| 欧美午夜高清在线| 国产精品亚洲av一区麻豆| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 九九热线精品视视频播放| 国产成人啪精品午夜网站| 人妻夜夜爽99麻豆av| 男女之事视频高清在线观看| 午夜视频国产福利| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 黄色女人牲交| 桃色一区二区三区在线观看| 国产高清视频在线播放一区| 国产成人影院久久av| 在线国产一区二区在线| 十八禁网站免费在线| 欧美中文日本在线观看视频| av在线蜜桃| 两个人视频免费观看高清| 精品国内亚洲2022精品成人| 99久久精品热视频| 如何舔出高潮| 亚洲精品一区av在线观看| 国模一区二区三区四区视频| 亚洲欧美日韩东京热| 天堂√8在线中文| 人妻久久中文字幕网| 三级国产精品欧美在线观看| 日韩欧美精品免费久久 | www.www免费av| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片 | 男插女下体视频免费在线播放| 搡老熟女国产l中国老女人| 97超视频在线观看视频| 久久精品国产亚洲av天美| 久久欧美精品欧美久久欧美| 精品一区二区三区视频在线| 一个人看的www免费观看视频| 国产一区二区激情短视频| 欧美另类亚洲清纯唯美| 国产男靠女视频免费网站| 亚洲五月婷婷丁香| 日韩精品中文字幕看吧| 日韩欧美免费精品| 看片在线看免费视频| 亚洲综合色惰| 精品午夜福利视频在线观看一区| av在线观看视频网站免费| 十八禁人妻一区二区| 91九色精品人成在线观看| 男女床上黄色一级片免费看| 天堂影院成人在线观看| eeuss影院久久| 一进一出抽搐动态| 亚洲第一区二区三区不卡| 欧美成人性av电影在线观看| 一本综合久久免费| 亚洲最大成人av| 黄色丝袜av网址大全| 亚洲自拍偷在线| 一本一本综合久久| 激情在线观看视频在线高清| 国产精品爽爽va在线观看网站| 午夜福利成人在线免费观看| 深夜a级毛片| 99在线视频只有这里精品首页| h日本视频在线播放| 久久中文看片网| 男人狂女人下面高潮的视频| 国产免费一级a男人的天堂| 嫩草影院入口| 99久久九九国产精品国产免费| 中文字幕熟女人妻在线| 国产激情偷乱视频一区二区| АⅤ资源中文在线天堂| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 亚洲精品成人久久久久久| 精品人妻熟女av久视频| 不卡一级毛片| 久久九九热精品免费| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 嫩草影院新地址| 欧美高清成人免费视频www| 国产精品一区二区三区四区久久| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 性欧美人与动物交配| 中文字幕av成人在线电影| 午夜福利视频1000在线观看| 在线天堂最新版资源| 最近中文字幕高清免费大全6 | 国产黄片美女视频| 日日干狠狠操夜夜爽| 日韩欧美在线乱码| a级毛片a级免费在线| av在线老鸭窝| 欧美午夜高清在线| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 亚洲经典国产精华液单 | 亚洲电影在线观看av| 欧美激情在线99| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 久久久久久久久大av| 男人狂女人下面高潮的视频| 精品久久久久久,| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 亚洲精品久久国产高清桃花| 日本成人三级电影网站| 国模一区二区三区四区视频| 国语自产精品视频在线第100页| 综合色av麻豆| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| av中文乱码字幕在线| 99久久无色码亚洲精品果冻| 99国产精品一区二区三区| 精品国产三级普通话版| 国产成人av教育| 永久网站在线| 好男人在线观看高清免费视频| 欧美区成人在线视频| 毛片一级片免费看久久久久 | 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 国产精品久久视频播放| 国语自产精品视频在线第100页| 51午夜福利影视在线观看| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 淫秽高清视频在线观看| 中文字幕高清在线视频| 国产欧美日韩精品亚洲av| 脱女人内裤的视频| www.999成人在线观看| 最近最新中文字幕大全电影3| 最新中文字幕久久久久| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 精品人妻视频免费看| bbb黄色大片| 色哟哟哟哟哟哟| 久久性视频一级片| 久久精品91蜜桃| 亚洲五月天丁香| 99久久九九国产精品国产免费| 嫩草影院新地址| 欧美激情国产日韩精品一区| 69人妻影院| 麻豆一二三区av精品| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 成人美女网站在线观看视频| 天堂动漫精品| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 国产高清视频在线观看网站| 精品久久久久久久久久久久久| 亚洲精品日韩av片在线观看| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 国产主播在线观看一区二区| 精品久久久久久成人av| 精华霜和精华液先用哪个| 男人和女人高潮做爰伦理| 在线观看66精品国产| av在线天堂中文字幕| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 国产av麻豆久久久久久久| 精品久久国产蜜桃| 成人欧美大片| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片 | 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 亚洲专区中文字幕在线| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 亚洲精品亚洲一区二区| x7x7x7水蜜桃| 亚洲国产精品sss在线观看| 日本黄色片子视频| 精品人妻视频免费看| 免费看日本二区| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 日本黄色片子视频| www日本黄色视频网| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| av欧美777| 亚洲avbb在线观看| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 色尼玛亚洲综合影院| 久久这里只有精品中国| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 欧美黑人欧美精品刺激| 国产伦精品一区二区三区四那| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 成人欧美大片| 我要看日韩黄色一级片| 亚洲最大成人中文| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| av天堂中文字幕网| 在现免费观看毛片| 国产爱豆传媒在线观看| 国产中年淑女户外野战色| av中文乱码字幕在线| 国产69精品久久久久777片| 午夜影院日韩av| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 国产精品av视频在线免费观看| 在线播放国产精品三级| 99热只有精品国产| 午夜视频国产福利| 日本免费a在线| 日韩国内少妇激情av| 欧美在线一区亚洲| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 亚洲欧美日韩高清专用| 91字幕亚洲| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 波多野结衣高清无吗| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 亚洲欧美日韩无卡精品| 日韩欧美在线二视频| 亚洲av.av天堂| 国产 一区 欧美 日韩| 亚州av有码| 美女被艹到高潮喷水动态| 一个人免费在线观看的高清视频| 欧美激情国产日韩精品一区| 最近最新免费中文字幕在线| 精品一区二区三区人妻视频| 国产成人av教育| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 亚洲色图av天堂| 日韩高清综合在线| 两个人的视频大全免费| 精品无人区乱码1区二区| 亚洲欧美日韩无卡精品| 亚洲第一电影网av| 国产av不卡久久| 国产精品野战在线观看| 天美传媒精品一区二区| 欧美日韩综合久久久久久 | 欧美黄色淫秽网站| 亚洲美女视频黄频| 高潮久久久久久久久久久不卡| 久久久久久久午夜电影| 亚洲最大成人中文| 一本久久中文字幕| 又粗又爽又猛毛片免费看| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| av国产免费在线观看| 国产成人啪精品午夜网站| 丰满人妻一区二区三区视频av| 成人一区二区视频在线观看| 亚洲av一区综合| 欧美激情久久久久久爽电影| www.www免费av| 国产高清视频在线播放一区| 首页视频小说图片口味搜索| 丰满的人妻完整版| 国产探花在线观看一区二区| 欧美在线黄色| 丁香欧美五月| 国产视频内射| 国产野战对白在线观看| 欧美日韩福利视频一区二区| 九九在线视频观看精品| 午夜福利在线观看吧| 国语自产精品视频在线第100页| 一级毛片久久久久久久久女| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 国产欧美日韩一区二区精品| 国产免费男女视频| 国产高清视频在线观看网站| 国产成人欧美在线观看| 全区人妻精品视频| 免费看美女性在线毛片视频| 级片在线观看| 久久人人精品亚洲av| 高清毛片免费观看视频网站| 韩国av一区二区三区四区| 色吧在线观看| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 九九在线视频观看精品| 深爱激情五月婷婷| 99热这里只有是精品50| 国产三级在线视频| 午夜精品在线福利| 成人国产综合亚洲| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 精品久久久久久成人av| 91午夜精品亚洲一区二区三区 | 99久久无色码亚洲精品果冻| 赤兔流量卡办理| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 一级黄片播放器| 精品不卡国产一区二区三区| 免费观看人在逋| 国产精品电影一区二区三区| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 免费av观看视频| 日韩欧美三级三区| 免费看日本二区| 精品人妻偷拍中文字幕| 亚洲精华国产精华精| 757午夜福利合集在线观看| 综合色av麻豆| 国产色婷婷99| 黄色女人牲交| 欧美中文日本在线观看视频| 91久久精品电影网| 男女视频在线观看网站免费| 天堂av国产一区二区熟女人妻| av欧美777| 夜夜夜夜夜久久久久| 两个人的视频大全免费| 久久午夜福利片| 色5月婷婷丁香| 国产欧美日韩精品亚洲av| 日韩欧美在线二视频| 日韩欧美精品v在线| 一进一出抽搐动态| 日本黄色视频三级网站网址| 免费人成视频x8x8入口观看| 搡老熟女国产l中国老女人| 99在线人妻在线中文字幕| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 村上凉子中文字幕在线| av女优亚洲男人天堂| av福利片在线观看| 中文字幕熟女人妻在线| 中文字幕久久专区| 一进一出好大好爽视频| 欧美另类亚洲清纯唯美| 亚洲美女黄片视频| 亚洲人成电影免费在线| 久久精品91蜜桃| 色精品久久人妻99蜜桃| 国产精品99久久久久久久久| 麻豆国产97在线/欧美| 欧美一级a爱片免费观看看| 成人特级av手机在线观看| 啦啦啦韩国在线观看视频| www.999成人在线观看| 国产色爽女视频免费观看| 少妇的逼好多水| 中文字幕av在线有码专区| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 国产亚洲精品av在线| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 国产伦一二天堂av在线观看| 啪啪无遮挡十八禁网站| 日韩中文字幕欧美一区二区| 成人性生交大片免费视频hd| 欧美+亚洲+日韩+国产| bbb黄色大片| a级一级毛片免费在线观看| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 国产精品不卡视频一区二区 | 国产精品99久久久久久久久| 亚洲黑人精品在线| 国产精品98久久久久久宅男小说| 高清毛片免费观看视频网站| 免费av不卡在线播放| 三级国产精品欧美在线观看| 宅男免费午夜| 99热这里只有是精品50| 淫秽高清视频在线观看| 一本综合久久免费| 国产黄色小视频在线观看| 色综合婷婷激情| 欧美日韩乱码在线| 国产亚洲精品av在线| 一个人免费在线观看电影| 亚洲成av人片在线播放无| 免费看a级黄色片| 精品熟女少妇八av免费久了| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 久久久精品大字幕| 一a级毛片在线观看| 国产高清三级在线| 综合色av麻豆| 免费无遮挡裸体视频| 日韩亚洲欧美综合| 婷婷精品国产亚洲av在线| 内地一区二区视频在线| 久久人人爽人人爽人人片va | 男人舔女人下体高潮全视频| 国产在线精品亚洲第一网站| 久久久精品欧美日韩精品| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 日韩高清综合在线| 成人国产一区最新在线观看| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 少妇的逼好多水| 国产免费男女视频| 高清毛片免费观看视频网站| 国产乱人视频| 色av中文字幕| 免费电影在线观看免费观看| 99热这里只有是精品50| 亚洲av电影在线进入| 黄色一级大片看看| 给我免费播放毛片高清在线观看| 国产三级中文精品| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 国产成人福利小说| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 亚洲精华国产精华精| 在线观看av片永久免费下载| 亚洲人与动物交配视频| 亚洲精品成人久久久久久| 亚洲在线观看片| 欧美性感艳星| 在线天堂最新版资源| 热99re8久久精品国产| 亚洲国产精品999在线| 又爽又黄a免费视频| 亚洲精品粉嫩美女一区| 赤兔流量卡办理|