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    葆青口服液抗D-半乳糖致大鼠皮膚衰老的實驗

    2015-04-06 09:08:54王蒙蒙翟曉翔
    福建中醫(yī)藥 2015年3期
    關鍵詞:羥脯氨酸半乳糖雌二醇

    王蒙蒙,翟曉翔

    (1.南京中醫(yī)藥大學,江蘇南京210046;2.南京中醫(yī)藥大學附屬徐州市中醫(yī)院,江蘇徐州221000)

    葆青口服液抗D-半乳糖致大鼠皮膚衰老的實驗

    王蒙蒙1,2,翟曉翔2

    (1.南京中醫(yī)藥大學,江蘇南京210046;2.南京中醫(yī)藥大學附屬徐州市中醫(yī)院,江蘇徐州221000)

    目的 探討葆青口服液抗皮膚衰老的作用機制。 方法 清潔級成年SD雌性大鼠每日頸背部皮下注射20%的D-半乳糖1000 mg/(kg/d)造成大鼠衰老模型,2周后治療組分別灌服葆青口服液0.01 mL/(g/d)、戊酸雌二醇0.01 mL/(g/d)、當歸芍藥散水煎劑0.01 mL/(g/d),42 d后測定大鼠皮膚組織含水量、羥脯氨酸、大鼠血清雌二醇(E2)含量,考察其對大鼠子宮指數(shù)及卵巢指數(shù)的影響。 結果 與模型組比較,治療組大鼠皮膚組織含水量、羥脯氨酸、雌二醇含量明顯升高(P<0.01),各指標改善程度葆青口服液組明顯優(yōu)于當歸芍藥散水煎劑組,對大鼠子宮指數(shù)、卵巢指數(shù)有明顯提高作用(P<0.01)。 結論 葆青口服液對D-半乳糖致衰老大鼠皮膚有明顯的抗衰老作用,其作用與延緩卵巢衰老有關。

    葆青口服液;當歸芍藥散;皮膚衰老;D-半乳糖;抗皮膚衰老;作用機制

    葆青口服液以張仲景《金匱要略》中的當歸芍藥散為基礎方,經(jīng)現(xiàn)代工藝改良,添加膠原蛋白等功能性輔料制成。當歸芍藥散養(yǎng)血調(diào)肝,健脾滲濕,為調(diào)和肝脾方。隨著現(xiàn)代醫(yī)學研究的深入,當歸芍藥散逐漸被用于治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病、心系疾病、消化系統(tǒng)疾病、外科雜癥、皮膚病等。20世紀80年代,日本學者首次用當歸芍藥散治療老年癡呆癥療效顯著,此后其抗衰老的機制及應用得到重視。為探討葆青口服液抗皮膚衰老的作用機制,我們采用D-半乳糖制作皮膚衰老大鼠模型,觀察其對皮膚衰老的影響,現(xiàn)報道如下。

    1 實驗材料

    1.1 實驗動物 清潔級,8~12周齡,雌性,SD大鼠40只,體質(zhì)量180~220 g,徐州醫(yī)學院基礎醫(yī)學院實驗動物中心提供,合格證號:SCXK蘇2011-0003。飼養(yǎng)于徐州醫(yī)學院基礎醫(yī)學院實驗室,溫度23~25℃,相對濕度50%~60%,自由進水、進食。

    1.2 藥物和試劑 葆青口服液(當歸9 g,白芍30 g,茯苓12 g,白術12 g,澤瀉15 g,川芎9 g,膠原蛋白多肽),由華南農(nóng)業(yè)大學食品工程學院加工。當歸芍藥散常規(guī)煎服的水煎劑(當歸9 g,白芍30 g,茯苓12 g,白術12 g,澤瀉15 g,川芎9g),徐州中醫(yī)院藥劑科提供。戊酸雌二醇片(DELPHARM Lille S.A.S.,批號:國藥準字J20130009),1 mg/片,溶于100 mL生理鹽水中制成濃度為0.01 mg/mL的溶液;D-半乳糖(上海源葉生物科技有限公司);血清雌二醇放免測定試劑盒(北京華英生物技術研究所);羥脯氨酸(hydroxyproline,HPY)試劑盒(南京建成生物有限公司)。

    1.3 主要器材和儀器 JA2003N電子天平(上海佑科儀器儀表有限公司);ZW-A微量振蕩器(蘇州威爾實驗用品有限公司);KDC-40低速離心機(安徽中科中佳科學儀器有限公司);Bio Tek全自動酶標儀、DHG-9246A電熱恒溫鼓風干燥箱、DK-8D電熱恒溫水槽(上海精宏實驗設備有限公司);Thermo Scientific Forma 900 Series超低溫冰箱、立鶴牌電熱恒溫培養(yǎng)箱(山東濰坊精鷹醫(yī)療器械有限公司)。

    2 實驗方法

    2.1 動物分組 將篩選合格的大鼠隨機分為5組,每組8只,空白對照組按1 mL/(200 g/d)頸背部皮下注射生理鹽水,其它4組用20%的D-半乳糖生理鹽水溶液,按1 000 mg/(kg/d)頸背部皮下注射,每日1次,2周后空白組及模型組灌服生理鹽水0.01 mL/ (g/d),葆青口服液組按0.01 mL/ (g/d)給大鼠灌服。戊酸雌二醇溶液按0.01 mL/(g/d)給大鼠灌服,當歸芍藥散水煎劑組按0.01 mL/ (g/d),連續(xù)42 d,注射按無菌操作進行。

    2.2 取材及指標測定 實驗結束前1天,4組大鼠禁食1 d,并選取大鼠背部脫毛,先用剪刀剪去鼠背上的粗毛,再用一次性備皮刀將剩余的絨毛剃除干凈,使背部皮膚充分暴露,面積2 cm×3 cm。

    2.2.1 取材 用10%水合氯醛3~4 mL/kg腹腔注射麻醉,用采血針和真空采血試管在腹主動脈處取全血3~5 mL,將血液迅速放入37℃電熱恒溫培養(yǎng)箱,4℃、3 000 r/min離心10 min,提取血清,放入-70℃冰箱保存?zhèn)溆谩2裳Y束后,立即解剖大鼠,取出雙側(cè)卵巢及子宮,剔除附著的脂肪組織,用濾紙擦拭,吸取表面的血液,保證卵巢及子宮的完整和清潔,并迅速剪取大鼠背部脫毛處的全層皮膚適量(不含皮下脂肪),分2份,1份1 cm×1 cm待測皮膚濕重,1份精確稱取皮膚組織濕重30~50 mg,按試劑盒說明書要求用堿水樣法測羥脯氨酸含量。

    2.2.2 雌二醇測定 采用放射免疫法測定大鼠血清E2的水平。

    2.2.3 子宮、卵巢指數(shù)測定 用電子天平精密稱取各大鼠剔除脂肪后的兩側(cè)子宮和卵巢的濕重,并記錄,按以下公式計算子宮指數(shù)和卵巢指數(shù)。

    子宮指數(shù)=子宮濕重/體重×100%

    卵巢指數(shù)=卵巢濕重/體重×100%

    2.2.4 對皮膚組織含水量的影響 用電子天平精密稱取每只大鼠背部全層皮膚的濕重,記錄并標號,隨即將其放入烘箱中,于80℃烘干24 h,再稱取其干重。計算皮膚含水百分率。

    含水百分率=(濕重-干重)/濕重×100%

    3 結 果

    實驗結果 見表1、表2。

    表1 葆青口服液對大鼠血清E2、子宮指數(shù)、卵巢指數(shù)的影響

    注:與模型組比較,1)P<0.01;與當歸芍藥散組比較,2)P<0.01,3)P<0.05。

    表2 葆青口服液對大鼠皮膚組織含水量及羥脯氨酸的影響

    注:與模型組比較,1)P<0.01;與當歸芍藥散組比較,2)P<0.01,3)P<0.05;與雌二醇組比較,4)P<0.05。

    4 討 論

    4.1 雌激素能促進表皮增殖,抑制角質(zhì)細胞凋亡;增加膠原蛋白含量,抑制基質(zhì)金屬蛋白酶的表達,減少膠原的降解,增加透明質(zhì)酸和酸性黏多糖含量,保持皮膚厚度、彈性、水分及屏障功能[1];并參與機體抗氧化反應,通過多種途徑達到抗皮膚衰老的作用。然而,雌激素替代療法能增加宮內(nèi)膜癌、乳腺癌等的發(fā)病率,有較大的副作用[2-5],不作為延緩皮膚衰老的首選。研究發(fā)現(xiàn),當歸芍藥散除了具有清除自由基、抗氧化、調(diào)節(jié)血液及免疫系統(tǒng)等功能外,還具備良好的雌激素作用,能調(diào)控下丘腦-垂體-卵巢軸,抗皮膚衰老。

    4.2 葆青口服液組與當歸芍藥散組比較,對于大鼠血清E2、卵巢指數(shù)、子宮指數(shù)、皮膚組織含水量、羥脯氨酸含量的改善更明顯。說明葆青口服液能調(diào)節(jié)卵巢衰老大鼠模型的性激素水平,明顯升高血清E2水平,提高卵巢及子宮指數(shù),延緩卵巢衰老,從而達到抗皮膚衰老的作用。

    4.3 葆青口服液以當歸芍藥散為基礎,添加功能性輔料,采取現(xiàn)代工藝提取中藥的活性成分,濃縮藥物,過濾雜質(zhì),矯正苦澀味,是口感良好、攜帶方便的中藥復方制劑。當歸芍藥散組方嚴謹,重用芍藥,養(yǎng)血柔肝,緩急止痛,配當歸、川芎助其養(yǎng)血活血以調(diào)肝,三藥配合達到養(yǎng)肝、柔肝、疏肝之目的,防止皮膚衰老。另一方面白術健脾益氣,配茯苓、澤瀉滲濕力強,助其健脾祛濕,達到脾胃健運而充養(yǎng)肌膚。本方養(yǎng)血疏肝與健脾滲濕同行,肝脾共調(diào),使氣血運行流暢,則可延年悅面,益顏展皺,乃駐顏美容、延緩皮膚衰老之要方。另外,葆青口服液中增加的膠原蛋白多肽,可以有效地提高角質(zhì)層含水量、透明質(zhì)酸的合成、防止皮膚干燥、改善面部膚質(zhì)等。

    [1]SON E D,LEE J Y,LEE S,et al. Topical application of 17beta-estradiol increases extracellular matrix protein synthesis by stimulating tgf-Beta signaling in aged human skin in vivo[J]. J Invest Dermatol,2005,124(6):1149-1161.

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    2015-05-10

    R285.5

    A

    1000-338X(2015)03-0052-02

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