白藜蘆醇對(duì)大鼠腎缺血再灌注損傷的保護(hù)作用

李國偉

(太康縣人民醫(yī)院，河南 太康 475400)

白藜蘆醇對(duì)大鼠腎缺血再灌注損傷的保護(hù)作用

李國偉

(太康縣人民醫(yī)院，河南 太康 475400)

目的：探討白藜蘆醇對(duì)大鼠腎缺血再灌注損傷的保護(hù)作用和機(jī)制。方法：將64只健康雄性Wistar大鼠隨機(jī)均分為假手術(shù)組、模型對(duì)照組、白藜蘆醇40 μg/g組和白藜蘆醇20 μg/g組4組，每組16只。白藜蘆醇40，20 μg/g組大鼠于造模前30 min腹腔注射相應(yīng)質(zhì)量分?jǐn)?shù)的白藜蘆醇溶液，假手術(shù)組和模型對(duì)照組大鼠僅予以同體積的8.5 g/L NaCl溶液，連用7 d。造模結(jié)束后，采用生物化學(xué)法測(cè)定各組大鼠血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)及腎組織超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)，采用TUNEL法測(cè)定腎組織的細(xì)胞凋亡狀況。結(jié)果：白藜蘆醇40，20 μg/g組血清Cr、BUN水平低于模型對(duì)照組(P<0.05)；其腎組織SOD、GSH-Px水平高于模型對(duì)照組，而MDA水平低于模型對(duì)照組(P<0.05)；其腎組織凋亡指數(shù)低于模型對(duì)照組(P<0.05)。白藜蘆醇兩劑量組間的血清Cr、BUN水平，腎組織SOD、GSH-Px、MDA水平及凋亡指數(shù)對(duì)比，差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論：白藜蘆醇能夠通過抗氧化和抗凋亡作用保護(hù)大鼠腎缺血再灌注損傷。

腎缺血再灌注損傷/藥物作用；白藜蘆醇/藥效學(xué)；肌酐；尿素氮；超氧化物歧化酶；谷胱甘肽過氧化物酶；丙二醛；凋亡指數(shù)

腎缺血再灌注損傷多見于腎移植、腎臟供血?jiǎng)用}損傷、腎臟挫傷等病理生理過程中，自由基過剩、鈣超載、細(xì)胞凋亡、炎癥反應(yīng)等均參與了其發(fā)生、發(fā)展過程[1-2]。白藜蘆醇是一種多酚類化合物，提取自桑椹、虎杖、葡萄等，具有抗炎、抗氧化和抗腫瘤等作用，已被證實(shí)能夠保護(hù)大腦、心臟、肝臟、腎臟等器官或組織的缺血再灌注損傷[3-4]。本研究觀察了白藜蘆醇對(duì)大鼠腎缺血再灌注模型血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)，腎組織超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)，以及腎臟細(xì)胞凋亡指數(shù)的影響，探討其對(duì)大鼠腎缺血再灌注損傷的保護(hù)作用和機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動(dòng) 物

健康雄性Wistar大鼠64只，6月齡，體質(zhì)量(350±37)g，由河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，質(zhì)量合格證號(hào)：SCXK(豫)2013-0001。

1.2 藥品、試劑與儀器

白藜蘆醇，純度≥98%，西安天一生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品，批號(hào)130712；臨用前以8.5 g/L NaCl溶液配制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4，2 g/L的白藜蘆醇溶液，然后根據(jù)大鼠體質(zhì)量按10 μL/g給藥。血清Cr、BUN試劑盒，購自上海申索佑福醫(yī)學(xué)診斷用品有限公司，批號(hào)依次是130824、130812；SOD、GSH-Px、MDA、考馬斯亮蘭蛋白試劑盒，購自南京建成生物工程研究所，批號(hào)依次是20130817，20130815，20130807，20130820；TUNEL試劑盒，美國Roche公司產(chǎn)品，批號(hào)13211142483。C8000全自動(dòng)生化分析儀，美國Abbott Laboratories公司產(chǎn)品；721型分光光度計(jì)，上海第三分析儀器廠產(chǎn)品。

1.3 動(dòng)物分組、用藥與模型的建立

將64只大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型對(duì)照組、白藜蘆醇40 μg/g組和白藜蘆醇20 μg/g組4組，每組16只。白藜蘆醇40 μg/g組、白藜蘆醇20 μg/g組大鼠于造模前30 min腹腔注射相應(yīng)質(zhì)量分?jǐn)?shù)的白藜蘆醇溶液，假手術(shù)組和模型對(duì)照組大鼠予以等體積質(zhì)量分?jǐn)?shù)為8.5 g/L NaCl溶液，連用7 d。大鼠腎缺血再灌注模型的建立：造模前禁食、禁水12 h，腹腔注射10 g/L 戊巴比妥鈉(0.4 μL/g)麻醉，常規(guī)術(shù)前準(zhǔn)備，腹腔正中切口，切除左腎以避免健側(cè)代償?shù)陌l(fā)生，游離右腎動(dòng)、靜脈并夾閉，缺血1 h并再灌注4 h。假手術(shù)組僅切除左腎和游離右腎動(dòng)、靜脈，而不夾閉。

1.4 檢測(cè)指標(biāo)

1.4.1 血清Cr、BUN

造模結(jié)束時(shí)，采集每組中8只大鼠的靜脈血5 mL，4 ℃ 3 500 r/min離心10 min，測(cè)定血清Cr、BUN。

1.4.2 腎組織SOD、GSH-Px和MDA

將采集完靜脈血的大鼠處死，取右側(cè)腎臟，稱取100 mg腎皮質(zhì)，添加8.5 g/L NaCl溶液，制成勻漿，4 ℃ 3 500 r/min離心10 min，取上清液，測(cè)定SOD、GSH-Px和MDA，并用考馬斯亮蘭法測(cè)定總蛋白檢測(cè)。

1.4.3 腎臟細(xì)胞凋亡指數(shù)

將各組剩余的8只大鼠處死，取右側(cè)腎臟，切取合適大小的組織塊，經(jīng)40 g/L多聚甲醛固定，制成蠟塊，4 μm厚度切片，進(jìn)行TUNEL染色，計(jì)算凋亡指數(shù)。陽性結(jié)果判斷：TUNEL染色后，正常腎細(xì)胞的細(xì)胞核呈藍(lán)色；細(xì)胞膜明顯皺縮，細(xì)胞核呈棕黃色，且未見炎癥反應(yīng)，判定為陽性。高倍鏡(400倍)下計(jì)數(shù)凋亡細(xì)胞及總細(xì)胞數(shù)，并選擇5個(gè)視野取其平均值，其中凋亡指數(shù)=(總凋亡細(xì)胞數(shù)/總觀察細(xì)胞數(shù))×100%。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1 各組血清Cr、BUN水平對(duì)比

見表1。

組 別Cr/(μmol·L-1)BUN/(μmol·L-1)假手術(shù)組37.24±5.84*9.96±1.38*模型對(duì)照組180.43±28.5985.23±10.80白藜蘆醇40μg/g組89.22±17.61*32.08±5.76*白藜蘆醇20μg/g組110.27±20.39*#40.18±8.33*#F值257.42589.241P值<0.001<0.001

注：與模型對(duì)照組對(duì)比，*P<0.05；與白藜蘆醇40 μg/g組對(duì)比，#P<0.05。

2.2 各組腎組織SOD、GSH-Px和MDA水平對(duì)比

見表2。

組 別SOD/(U·mgport-1)GSH-Px/(U·mgport-1)MDA/(nmol·mgport-1)假手術(shù)組215.69±33.21*189.45±19.67*2.16±0.33*模型對(duì)照組80.07±15.6170.20±11.329.62±1.54白藜蘆醇40μg/g組142.66±20.54*121.78±17.60*4.29±1.18*白藜蘆醇20μg/g組117.35±17.03*#100.29±15.25*#6.89±1.42*#F值279.447450.61333.743P值<0.001<0.001<0.001

注：與模型對(duì)照組對(duì)比，*P<0.05；與白藜蘆醇40 μg/g組對(duì)比，#P<0.05。

2.3 各組腎臟細(xì)胞凋亡指數(shù)對(duì)比

見表3。

組 別凋亡指數(shù)/%假手術(shù)組6.22±1.58*模型對(duì)照組41.64±7.22白藜蘆醇40μg/g組19.79±5.37*白藜蘆醇20μg/g組26.90±6.73*#F值75.005P值<0.001

注：與模型對(duì)照組對(duì)比，*P<0.05；與白藜蘆醇40 mg/kg組對(duì)比，#P<0.05。

3 討 論

本研究從自由基及細(xì)胞凋亡兩個(gè)方面觀察白藜蘆醇對(duì)腎缺血再灌注損傷的影響，在所選指標(biāo)中，Cr、BUN用于腎臟損傷的嚴(yán)重程度評(píng)估，SOD、GSH-Px和MDA用于判斷機(jī)體清除自由基能力及過氧化程度，凋亡指數(shù)用于評(píng)估腎臟組織細(xì)胞凋亡的發(fā)生情況。有研究[3,5]顯示：白藜蘆醇對(duì)缺血再灌注損傷的主要保護(hù)機(jī)制是提高機(jī)體自由基清除酶的活性、減輕機(jī)體的炎癥反應(yīng)、阻止細(xì)胞凋亡的發(fā)生發(fā)展、改善缺血再灌注部位的微循環(huán)狀態(tài)、抗凝作用，減輕鈣超載現(xiàn)象，以及減輕線粒體的破壞程度。本文結(jié)果顯示：模型對(duì)照組血清Cr、BUN水平低于假手術(shù)組(P<0.05)，提示造模成功；白藜蘆醇40，20 μg/g組血清Cr、BUN水平低于模型對(duì)照組(P<0.05)，提示白藜蘆醇能夠減輕腎缺血再灌注損傷損傷；其腎組織SOD、GSH-Px水平高于模型對(duì)照組，而MDA水平低于模型對(duì)照組(P<0.05)，提示白藜蘆醇對(duì)腎缺血再灌注損傷組織具有抗氧化作用；其腎組織凋亡指數(shù)低于模型對(duì)照組(P<0.05)，提示白藜蘆醇具有抗凋亡作用。白藜蘆醇兩劑量組血清Cr、BUN水平，腎組織SOD、GSH-Px、MDA水平及凋亡指數(shù)對(duì)比，差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示白藜蘆醇的這些作用可能具有劑量依賴性，在一定范圍內(nèi)劑量越高，效果越明顯。本研究表明：白藜蘆醇能夠通過抗氧化和抗凋亡作用來保護(hù)大鼠腎缺血再灌注損傷。

[1]傅耀文，張文嵐，薛立娟.缺血再灌注對(duì)腎細(xì)胞內(nèi)鈣水平和細(xì)胞凋亡的影響[J].中華泌尿外科雜志,2004,25(12):834-837.

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(編輯 陶 珠)

1001-6910(2015)07-0053-03 ·實(shí)驗(yàn)研究·

R22

B

10.3969/j.issn.1001-6910.2015.07.27

2015-04-22；

2015-05-06