板玄口服液的提取工藝及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究*

劉安龍

(洛陽市第二中醫(yī)院，河南 洛陽 471003)

板玄口服液的提取工藝及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究*

劉安龍

(洛陽市第二中醫(yī)院，河南 洛陽 471003)

目的：優(yōu)選名老中醫(yī)經(jīng)驗(yàn)處方板玄口服液的最佳水提取工藝，并建立其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：以復(fù)方中表告依春的含量為指標(biāo)，采用HPLC法測(cè)定其含量，采用L9(34)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，考察加水量(A)，煎煮時(shí)間(B)，煎煮次數(shù)(C)3個(gè)因素對(duì)其水提取工藝的影響；采用高效液相色譜法測(cè)定板玄口服液中表告依春的含量，色譜柱為Agilent C18柱，流動(dòng)相為甲醇-0.01 mol/L磷酸二氫鈉緩沖液(氫氧化鈉試液調(diào)節(jié)pH值 7.4)(7∶93)，流速1.0 mL/min，檢測(cè)波長242 nm，柱溫30 °C。結(jié)果：水提取工藝影響因素大小依次是C>A >B；表告依春進(jìn)樣量在0.020～0.400 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r=0.999 8；平均回收率為98.36%，RSD為1.63%(n=6)。結(jié)論：提取工藝穩(wěn)定可行；板玄口服液中表告依春的測(cè)定方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，精度高，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

板玄口服液；提取工藝；正交試驗(yàn)；高效液相色譜法；表告依春；含量測(cè)定

板玄口服液為洛陽市第二中醫(yī)院醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑，由板藍(lán)根、玄參、荊芥、薄荷、僵蠶(麩炒)、山豆根、連翹、浙貝母、桔梗、苦杏仁(炒)等中藥煎制提取制成，具有辛涼解表、清熱解毒、利咽散結(jié)、消腫的作用，用于熱毒壅盛所致的咽喉發(fā)干、聲啞失音、煩躁口渴，以及上呼吸道感染、慢性扁桃體炎、喉炎、咽炎和咽喉潰瘍見上述證候者。方中板藍(lán)根為君藥之一，據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，表告依春為板藍(lán)根的主要抗病毒有效成分之一[1]，且表告依春的水溶性很好，因此在水提制劑中含量較高[2]。為了最大程度發(fā)揮該方劑的復(fù)方功效，選擇表告依春作為考察指標(biāo)[3]，用正交實(shí)驗(yàn)法對(duì)其水煎煮提取工藝進(jìn)行研究，優(yōu)選最佳提取工藝，對(duì)板玄口服液開展定量控制。

1 藥品、試劑與儀器

本研究使用的所有中藥材，均由安徽省亳州市藥材總公司提供，經(jīng)河南中醫(yī)學(xué)院陳隨清教授鑒定為正品；(R，S)-告依春對(duì)照品，含量測(cè)定用，購自中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)111685-200802；甲醇、乙腈為色譜純；其他試劑均為分析純；水為自制超純水；柱層層析硅膠，青島市基億達(dá)硅膠試劑廠產(chǎn)品, 批號(hào)0080881。島津LC-20A高效液相色譜儀(SPD-20A ΜV/VIS檢測(cè)器，自動(dòng)進(jìn)樣器)，日本島津公司產(chǎn)品；色譜柱為Phenomenex C18柱 (250 mm×4.6 mm, 5 μm)；BS2242S電子天平，北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司產(chǎn)品；8-1-B型電子調(diào)溫電熱套，天津市泰斯特儀器有限公司產(chǎn)品；酒精計(jì)，沈陽市金城玻璃計(jì)器廠產(chǎn)品；H.H.S電熱恒溫水浴鍋，上海醫(yī)療器械五廠產(chǎn)品。

2 方法與結(jié)果

2.1 口服液的制備

2.1.1 正交試驗(yàn)優(yōu)選工藝

選取料液比(A)、煎煮時(shí)間(B)、煎煮次數(shù)(C)為試驗(yàn)因素，每個(gè)因素設(shè)計(jì)3個(gè)水平，按L9(34)表進(jìn)行正交試驗(yàn)，以表告依春為測(cè)定指標(biāo)，優(yōu)選提取工藝。選定的因素水平見表1，正交試驗(yàn)結(jié)果見表2，方差分析結(jié)果見表3。

表1 因素與水平

表2 正交試驗(yàn)結(jié)果

表3 方差分析結(jié)果

注：F0.05(2,2)=19.0，F(xiàn)0.01(2,2)=99.0。

由表2和3可知：3種因素的影響程度順次為C>A>B。其中C因素(提取次數(shù))P<0.05，說明對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有顯著性影響。C因素的最佳水平為2水平，即藥材煎煮2次。A、B因素則影響較小，不呈顯著性。為縮短生產(chǎn)時(shí)間間隔和減少浪費(fèi)原材料，結(jié)合實(shí)驗(yàn)結(jié)果，對(duì)工藝條件A1B1C2與A2B2C2同時(shí)進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，結(jié)果差異不大，最優(yōu)工藝參數(shù)為A1B1C2，即料液比為1∶6(g/mL)、煎煮次數(shù)為2次，每次煎煮時(shí)間為1 h。

2.1.2 制備方法

將合格凈料飲片按處方60倍量置于提取罐中加5倍量水，浸泡1 h 后煎煮2次(第1次煎煮1 h，并收集芳香水；第2次煎1 h)；合并兩次藥液濾過，將濾液濃縮至相對(duì)密度約1.20(80 ℃)；靜置，冷藏24 h；過濾醇沉，回收乙醇并濃縮；加入芳香水，再加甜蜜素、苯甲酸鈉各180 g，攪拌;加純化水至60 000 mL，靜置，濾過。用灌封機(jī)灌裝于10 mL玻璃瓶中，滅菌、燈檢、包裝，每盒10支。

2.2 板玄口服液中表告依春的含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件

色譜柱為Agilent C18色譜柱 (4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動(dòng)相為甲醇-0.01mol/L 磷酸二氫鈉緩沖液(氫氧化鈉試液調(diào)節(jié)pH值7.4)(8∶92)，流速1.0 mL/min，檢測(cè)波長242 nm，柱溫30 ℃，進(jìn)樣量20 μL。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取表告依春對(duì)照品10.0 mg,置100 mL量瓶中，加100 mL/L甲醇溶解并定容，搖勻，制成表告依春10 mg/L的對(duì)照品溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備

精密量取板玄口服液2 mL，置10 mL容量瓶中，緩緩滴加甲醇至刻度，搖勻，0.45 μm微孔濾膜濾過，即得。

2.2.4 陰性對(duì)照試驗(yàn)

按處方比例并以相同工藝制備缺板藍(lán)根陰性制劑適量，按2.2.3項(xiàng)下方法制備缺板藍(lán)根陰性對(duì)照品溶液。分別吸取上述對(duì)照品溶液、供試品溶液和缺板藍(lán)根陰性對(duì)照品溶液，按2.2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖。見圖1。

2.2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密吸取2.2.2項(xiàng)下的對(duì)照品溶液各2,5,10,20,30,40 μL溶液，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖。以峰面積積分值(Y)為縱坐標(biāo)，對(duì)照品溶液的進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：Y=7 153.9X-22.69,r=0.999 8。結(jié)果表明：表告依春進(jìn)樣量在 0.020～0.400 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.6 精密度試驗(yàn)

吸取同一供試品溶液，按上述色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖。結(jié)果：表告依春的峰面積的RSD值為0.15%。表明：儀器精密度良好。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

吸取同一供試品溶液，分別在放置0，2，4，6，8及12 h后，測(cè)定表告依春的峰面積。結(jié)果：表告依春含量的RSD值為0.78%。表明：供試品在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批板玄口服液，按2.2.3項(xiàng)下方法制備6份供試品溶液，再按2.2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，計(jì)算表告依春的含量及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。結(jié)果：表告依春含量的RSD值為0.59%。表明：本方法重復(fù)性較好。

2.2.9 加樣回收率試驗(yàn)

精密吸取已知含量的同批次樣品(批號(hào)為140829)6份，每份1.0 mL，置10 mL容量瓶中，精密加入55.5 mg /L表告依春對(duì)照品溶液1.0 mL，按2.2.3項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備加樣回收供試品溶液，按2.2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣并記錄色譜圖，測(cè)定峰面積并計(jì)算回收率。結(jié)果：平均回收率為99.37%，RSD為0.62%(n=6)。表明：方法回收率較好。見表4。

2.2.10 樣品含量測(cè)定

取3個(gè)批次的板玄口服液，按2.2.3項(xiàng)下方法制備，分別精密吸取供試品溶液20 μL，按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。計(jì)算含量，結(jié)果見表5。

表5 板玄口服液中表告依春含量

3 討 論

本研究采用正交試驗(yàn)法，以表告依春含量為指標(biāo)，對(duì)板玄口服液的提取工藝進(jìn)行了優(yōu)選。實(shí)驗(yàn)中先采用正交試驗(yàn)法對(duì)煎煮加水量、煎煮時(shí)間和煎煮次數(shù)進(jìn)行考察，結(jié)果表明3個(gè)因素對(duì)提取結(jié)果有不同程度的影響。方差分析表明：煎煮次數(shù)對(duì)提取效果影響較大，為顯著性影響因素。結(jié)合醫(yī)院制劑生產(chǎn)的實(shí)際情況，確定最佳生產(chǎn)工藝為：藥材加6倍量水，提取次數(shù)2次，每次1 h。

板玄口服液有板藍(lán)根和其他藥材經(jīng)水提醇沉制成，所含成分較多[4]，考慮到表告依春的抗病毒作用較強(qiáng)，以其為質(zhì)控指標(biāo)，摸索質(zhì)控條件[5-7]，并建立了板玄口服液中表告依春的含量測(cè)定方法。在選擇流動(dòng)相時(shí)，對(duì)比考察了甲醇-50 mL/L磷酸溶液(8∶92)、甲醇-水、甲醇-50 mL/L磷酸溶液(7∶93)、乙腈-水等流動(dòng)相，結(jié)果以本文所選甲醇-0.01mol/L 磷酸二氫鈉緩沖液(氫氧化鈉試液調(diào)節(jié)pH值 7.3)(7∶93)為流動(dòng)相時(shí)峰形良好，基線平穩(wěn)、分離度較好，無拖尾現(xiàn)象。研究表明：采用HPLC測(cè)定板玄口服液中表告依春的含量的方法簡(jiǎn)便易操作，重復(fù)性和專屬性較好。表告依春的含量測(cè)定可為板玄口服液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供科學(xué)數(shù)據(jù)支持。

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(編輯 陶 珠)

1001-6910(2015)07-0061-03 ·藥學(xué)研究·

R22

B

10.3969/j.issn.1001-6910.2015.07.30

劉安龍(1963—)，男(漢族)，河南洛陽人，副主任中藥師，本科，研究方向：中藥學(xué)。

洛陽市科技局2013社會(huì)科技發(fā)展計(jì)劃(1301071A—6)

2015-02-12；

2015-05-18