補腎調經中藥復方對排卵障礙模型大鼠NE、 FSH及E2的調節(jié)作用*

周繼春，魏偉峰，劉方洲

(1.河南省食品藥品檢驗所， 河南 鄭州 450003；2.河南省中醫(yī)藥研究院，河南 鄭州 450004)

補腎調經中藥復方對排卵障礙模型大鼠NE、 FSH及E2的調節(jié)作用*

周繼春1，魏偉峰2，劉方洲2

(1.河南省食品藥品檢驗所， 河南 鄭州 450003；2.河南省中醫(yī)藥研究院，河南 鄭州 450004)

目的：觀察補腎調經中藥復方對排卵障礙模型大鼠的治療作用，探索補腎法調節(jié)下丘腦-垂體促性腺功能、促生長的作用機制。方法：以排卵障礙模型大鼠為研究對象，將同一批次清潔級SD雌性成年大鼠80只隨機分為正常對照組、模型對照組、補腎調經高劑量組、補腎調經低劑量組4組。雄激素致排卵障礙大鼠模型參照俞瑾等方法[1]建立，灌胃給藥5周后，采用放免法檢測血中雌二醇(E2)、卵泡刺激素(FSH)水平，用熒光分析法測定下丘腦去甲腎上腺素(NE)含量。結果：補腎調經中藥復方能增加血清中的E2含量(P<0.05)、FSH含量(P<0.05)，提高排卵障礙大鼠動情前期下丘腦內NE水平(P<0.01)。結論：補腎調經中藥復方可能是通過NE調節(jié)GnRH的時相，使腦片GnRH釋放增加，從而使卵巢周期中排卵前LH分泌峰出現(xiàn)，促進排卵。

不孕癥；補腎調經中藥復方/藥效學；排卵障礙模型/藥物作用；大鼠；雌二醇；下丘腦

中醫(yī)認為不孕癥的發(fā)生與腎-天癸-沖任-胞宮生殖軸密切相關。腎主生殖藏精。腎氣旺盛，腎精充實，氣血調和，則任通沖盛，經調子嗣。腎在月經產生及調節(jié)女性生殖方面有重要作用，治療女性不孕癥的重點就在于補腎、調理氣血和月經，因此，補腎化瘀、養(yǎng)血調經是婦科治療無排卵性疾病的常用治法。下丘腦-垂體-卵巢軸互相調節(jié)促使婦女正常排卵[1]。去甲腎上腺素(NE)可能控制下丘腦基底部和視前區(qū)的GnRH神經元活動，調節(jié)GnRH的時相，使排卵前LH分泌高峰出現(xiàn)，最后導致排卵[2]。因此,本研究通過檢測血清中卵泡刺激素(FSH )、雌二醇(E2)含量及下丘腦部位去甲腎上腺素(NE)含量的變化探討補腎調經中藥復方的調節(jié)作用。

1 材料與方法

1.1 動 物

出生9日齡SD雌性大鼠80只，體質量15 g，由河南省動物實驗提供，合格證號為11400700042310。

1.2 藥品、試劑與儀器

補腎調經中藥由當歸、熟地黃各14 g，川芎10 g，香附 10 g， 淫羊藿、菟絲子、淫羊藿、枸杞子各30 g ，甘草 5 g組成。中藥材由河南中醫(yī)學院第三附屬醫(yī)院中藥房提供，由河南省中醫(yī)藥研究院藥理實驗室制備，批號20140316；再配制成5.5 g生藥/mL和2.8 g生藥/mL兩種質量分數的藥液， 4 ℃冰箱，密封保存。丙酸睪丸酮注射液，天津金耀氨基酸有限公司產品，批號0303232；E2放射免疫分析藥盒，由北京尚柏生物科技有限公司提供，批號20131020；促卵泡生成素放射免疫分析藥盒，由北京尚柏生物科技有限公司提供，批號20130224。20PR-52D型離心機， 日立公司產品；GC-1200V型放免分析儀，科大創(chuàng)新有限公司產品。

1.3 分組、模型的建立與給藥

將大鼠隨機分成正常對照組、模型對照組、補腎高劑量組、補腎低劑量組4組，每組20只。參照文獻方法[3]造模,從大鼠出生第9天開始，除正常對照組外，其他3組頸背部皮下注射丙酸睪丸酮注射液1.25 mg/只(0.05 mL/只)；正常對照組不做特殊處理。自第70天，連續(xù)陰道涂片兩個性周期(一個性周期是5 d)，觀察陰道上皮細胞變化。以陰道上皮無性周期變化為造模成功。第80天起，補腎高、低劑量組分別給予補腎調經中藥5.5，2.8g/mL，相當于臨床劑量的20，10倍；模型對照組和正常對照組灌服蒸餾水10 μL/g體質量，連續(xù)灌胃35 d。

1.4 檢測指標

灌胃結束前10天開始進行陰道脫落細胞涂片，在顯微鏡下判斷大鼠性周期，連續(xù)兩個性周期。選擇相同動情周期(動情后期)，最后一次給藥后禁食8 h，股動脈取血并斷頭處死。無菌操作下，在冰盤上迅速開顱，切取下丘腦，用熒光分析法測定NE水平。取出的血樣在室溫下靜置2 h，以3 000 r/min轉速離心10 min，取上清液，用放射免疫法測定血清中E2和FSH水平。

1.5 統(tǒng)計學方法

2 結 果

與模型對照組對比，補腎調經高、低劑量組下丘腦NE 水平均增高，差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。大鼠E2水平補腎調經高劑量組和補腎低劑量組比模型對照組有顯著提高P<0.05)。大鼠FSH水平補腎調經高劑量組和低劑量組比模型對照組有顯著提高(P<0.05)。見表1。

分 組nNE/(ng·g-1)E2/(ng·L-1)FSH/(μg·L-1)正常對照組202.26±0.39**49.43±6.42**2.08±0.22**模型對照組201.20±0.3932.20±5.201.18±0.28補腎調經低劑量組201.48±0.34*36.12±5.71*1.39±0.25*補腎調經高劑量組201.51±0.36*37.17±7.02*1.43±0.29*

注：與模型對照組對比，*P<0.05， **P<0.01。

3 討 論

腎藏精，主生殖，為先天之本，元氣之根，在機體的整個生命活動中起到主導作用。腎精又被稱為元精、元陰，為胚胎發(fā)育的原始物質，并能促進生殖功能的成熟。腎中精氣充盈到一定程度時可產生具有促進人體生殖器官成熟并維持生殖功能的物質。天癸是人體腎中精氣充盈到一定年齡階段時產生的一種精微物質，古人謂之“無形之水”，能促使女子任脈通，太沖脈盛，月經按時來潮，可以懷孕；能促使男子精氣溢瀉，有正常的生殖功能。由此可見,天癸與現(xiàn)代醫(yī)學所指的調節(jié)生殖功能的神經內分泌激素相類似[4]。腎-天癸-沖任-胞宮與下丘腦-垂體-卵巢-子宮軸的功能類似。腎精的先天不足或者后天虧損，沖任空虛，胞失濡養(yǎng)，可導致月經后期、閉經、不孕等[5]。

去甲腎上腺素能系統(tǒng)是下丘腦GnRH釋放和垂體LH分泌的重要激活因素，NE可調節(jié)下丘腦基底部和視前區(qū)的GnRH神經元活動，調節(jié)GnRH的時相，使腦片GnRH釋放增加，從而使卵巢周期中排卵前LH分泌峰出現(xiàn)，最后導致排卵[6]。E2參與卵泡發(fā)育的各個環(huán)節(jié)的調節(jié)，能刺激顆粒細胞的有絲分裂，促進顆粒細胞的增殖。近年來研究發(fā)現(xiàn)：E2可以明顯抑制卵巢顆粒細胞的凋亡，減緩卵泡的閉鎖，促進卵泡的生長、發(fā)育及排出[7]?，F(xiàn)代藥理研究認為：補腎藥能提高垂體對下丘腦的反應，促進卵泡發(fā)育成熟。FSH是由垂體細胞合成和分泌的促性腺激素，能直接和卵巢上的受體結合，促進卵泡的發(fā)育和排卵。無FSH則卵泡發(fā)育不能超過竇生長階段，卵泡不發(fā)育，E2水平低，生殖器官的生長和促性腺激素受負反饋影響[8]。在接近排卵時，F(xiàn)SH刺激顆粒細胞蛋白溶解酶原活化因子，在其作用下卵泡排出。研究表明：導致FSH水平下降的原因是E2，隨著卵泡發(fā)育顆粒細胞產生大量的E2，通過負反饋抑制垂體的FSH分泌[9]。在本研究中，補腎調經中藥復方對排卵障礙模型大鼠的NE 、FSH及E2水平有明顯升高作用，從而調節(jié)GnRH的時相，使腦片GnRH釋放增加，從而使卵巢周期中排卵前LH分泌峰出現(xiàn)，并能直接作用于垂體，提高大鼠生殖內分泌功能，促進卵泡發(fā)育和排卵。

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(編輯 陶 珠)

1001-6910(2015)07-0051-03 ·實驗研究·

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B

10.3969/j.issn.1001-6910.2015.07.26

河南省基礎與前沿(132300310281)

2014-12-01；

2015-05-14