小檗堿抗結(jié)直腸癌機制研究

趙雨佳，龔 丹，程亞齡

小檗堿又稱黃連素，是從黃連屬植物根莖中提取的一種異喹啉類季銨生物堿，在我國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中有悠久的使用歷史，其主要藥理作用包括抗心律失常、降低膽固醇、改善胰島素抵抗、抑菌、抗炎和抗抑郁等［1，2］。近年來諸多研究均發(fā)現(xiàn)，小檗堿具有良好的抗腫瘤作用，能夠有效抑制各種不同組織來源的惡性腫瘤，其作用機制涉及腫瘤細(xì)胞增殖、凋亡、遷徙、轉(zhuǎn)移等各個環(huán)節(jié)，且針對不同類型的腫瘤，其作用機制也不盡相同［3，4］。結(jié)直腸癌是常見的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重威脅人類健康，目前其治療手段是手術(shù)、化療、放療相結(jié)合的綜合治療［5］，對其治療方法進(jìn)行研究，仍然是目前的研究熱點，開發(fā)效率高、作用明顯、不良反應(yīng)低的新藥已成為研究的新方向。

目前已有許多研究證實，在體內(nèi)、體外實驗中小檗堿均能有效抑制結(jié)直腸癌，且其對正常腸黏膜細(xì)胞的損傷作用較輕。針對小檗堿抗結(jié)腸癌機制的研究主要集中在抑制腫瘤細(xì)胞的形成、誘導(dǎo)凋亡、抑制增殖、影響擴散等方面［6］。

1 抑制腫瘤細(xì)胞的形成

氧化損傷能夠誘導(dǎo)正常細(xì)胞向腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)化，抗氧化作用是小檗堿抑制腫瘤形成的靶點之一。Thirupurasundari等［7］通過氧化偶氮甲烷（AOM）15 mg／kg皮下注射形成Wistar大鼠結(jié)腸癌模型，分別在造模過程中及造模后給予30 mg／kg小檗堿灌胃處理。結(jié)果發(fā)現(xiàn)AOM誘導(dǎo)組發(fā)生了脂質(zhì)過氧化損傷和抗氧化防御系統(tǒng)的改變，小檗堿與AOM共同和先后作用均能活化和增強細(xì)胞內(nèi)多種還原酶SOD、過氧化氫酶、GST、GSH及維生素C、E的活性，消除AOM誘導(dǎo)產(chǎn)生的氧化物L(fēng)PO、ROS，同時小檗堿干預(yù)后血清中糖蛋白的下降水平也具有統(tǒng)計學(xué)意義。此外，電鏡下細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)顯示小檗堿作用后，腸上皮細(xì)胞出現(xiàn)核固縮、核染色質(zhì)邊集、線粒體腫脹和內(nèi)膜嵴減少等凋亡特征性變化。證明小檗堿通過抗氧化作用抑制正常細(xì)胞向腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)化，從而發(fā)揮抑制腫瘤形成的作用。

吳 柯 等［8］以 二 甲 肼 （1，2－dimethylhydrazine，DMH）40 mg／kg皮下注射＋1%葡聚糖硫酸鈉（dextran sodium sulfate，DSS）水溶液飲用誘導(dǎo)形成大鼠結(jié)腸癌模型，觀察小檗堿和美洛昔康灌服后，連續(xù)16周后大鼠體重、異常隱窩灶（abrrant crypt foci，ACF）和結(jié)腸癌發(fā)生率的變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)與模型組相比，小檗堿明顯改善DMH＋DSS誘癌過程中大鼠惡病質(zhì)狀態(tài)并遏制體重減輕，顯著減少實驗第10周結(jié)腸ACF數(shù)、明顯降低結(jié)腸癌的發(fā)生率，其作用與美洛昔康組相似。

2 誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡

2．1 小檗堿通過線粒體途徑誘導(dǎo)凋亡 小檗堿主要通過影響ROS相關(guān)的信號通路JNK／p38 MAPK、PKC、ERK等來激活線粒體途徑，通過內(nèi)源性線粒體凋亡通路發(fā)揮誘導(dǎo)凋亡的作用［9，10］。Wang 等［11］將小檗堿50 μmol分別作用于結(jié)腸癌IMCE細(xì)胞1、3、6、18、24 h 和12．5、25、50、100 μmol小檗堿分別作用IMCE細(xì)胞18 h后，結(jié)果發(fā)現(xiàn)作用時間18、24 h、小檗堿濃度50、100 μmol能顯著誘導(dǎo)細(xì)胞死亡；同時測定凋亡標(biāo)志物L(fēng)DH的水平，其釋放量與小檗堿呈濃度和時間依賴性。他們測定了與外源性凋亡通路相關(guān)的 caspase－3、－6、－9、－12，發(fā)現(xiàn)均未被活化，同時caspase抑制劑zVAD－fmk無法緩解小檗堿的抑制作用；又通過Annexin X／PI染色法確定小檗堿作用后 Annexin X（＋）／PI（＋）細(xì)胞的數(shù)量明顯增加，因此他們認(rèn)為小檗堿通過線粒體途徑發(fā)揮作用。Wang等進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)小檗堿作用于IMCE細(xì)胞后濃度依賴性地增加了ROS的量，ROS誘導(dǎo)了溶酶體中組織蛋白酶B（cathepsin B）的釋放，引起了線粒體膜的去極化，存在于線粒體內(nèi)膜間隙的可溶性蛋白——凋亡誘導(dǎo)因子 （apoptosis inducing factor，AIF）通過外膜被釋放出來，最終引起細(xì)胞的程序性死亡。

Hsu 等［12］將小檗堿不同劑量組 5、10、25、50μmol，不同作用時間 3、6、12、24 h作用于 SW620細(xì)胞，MTT實驗測定細(xì)胞增殖活性結(jié)果發(fā)現(xiàn)小檗堿濃度越高、作用時間越長，抑制生長作用越明顯；超微形態(tài)學(xué)觀察、DAPI染色、Annexin－V染色等均證明小檗堿誘導(dǎo)了細(xì)胞凋亡。又通過對氧化物敏感的DHE染色法檢測ROS的水平、Western blotting法檢測細(xì)胞色素C、PARP裂解物的量及MAPK通路的p38／MAPK、JNK、ERK的磷酸化水平，發(fā)現(xiàn)明ROS和MAPK通路有關(guān)，ROS能夠時間依賴性地磷酸化JNK和p38，活化相應(yīng)的MAPK通路，從而磷酸化激活了轉(zhuǎn)錄因子C－Jun，最終導(dǎo)致細(xì)胞色素C的釋放。

Murthy等［13］發(fā)現(xiàn)小檗堿可直接引起線粒體膜的破壞從而導(dǎo)致凋亡。他們用rhodamine－123染色法測定線粒體膜電位，發(fā)現(xiàn)50 μmol小檗堿作用24、48、72 h 后線粒體膜電位分別下降 30%、27．5%、25%，膜通透性增加，細(xì)胞色素C從線粒體中釋放，形成了由細(xì)胞色素C、連接蛋白Apaf1和caspase－9酶原組成的凋亡復(fù)合體，啟動Caspase激活事件的級聯(lián)反應(yīng)，引起底物發(fā)生蛋白水解反應(yīng)，細(xì)胞最終死亡。Li等［14］和 Jantova 等［15］也都觀察到小檗堿誘導(dǎo)ROS的產(chǎn)生，引起細(xì)胞內(nèi)Ca2＋濃度的升高和線粒體膜電位的下降進(jìn)而去極化，細(xì)胞色素C釋放激活凋亡通路。

2．2 小檗堿影響凋亡相關(guān)分子的表達(dá) 在腫瘤細(xì)胞凋亡過程中，小檗堿能夠影響caspase、抗凋亡蛋白和促凋亡蛋白、Fas和FasL等的表達(dá)。Yan等［16］用流式細(xì)胞術(shù)檢測 10、25 μg／ml小檗堿作用于BIU－27和T24細(xì)胞48 h后的凋亡比例，BIU－27和T24 細(xì)胞在對照組、10 μg／ml作用組、25 μg／ml作用 組 分 別 為 0．04% 、7．7% 、19．61% 和 0．06% 、11．41%、54．40%，均具有統(tǒng)計學(xué)意義； 同時用Western blotting法測定 caspase－3、－9 及其裂解物的含量變化，caspase－3、－9 的量沒有明顯變化，但它們的裂解物在小檗堿作用后呈濃度依賴性上升，他們認(rèn)為小檗堿誘導(dǎo)凋亡與caspase－3、－9活化有關(guān)。Ho等［17］的研究也得出相似的結(jié)論，小檗堿能夠明顯提高 caspase－3、－8、－9 的活性，提高凋亡水平。Patil等［18］測定小檗堿作用后腫瘤細(xì)胞中DNA的碎片量和凋亡標(biāo)志物PARP裂解物的變化，結(jié)果顯示25 μmol小檗堿作用72 h后DNA碎片和PARP裂解物的量明顯增加，證明細(xì)胞凋亡增加；作用48、72 h后，抗凋亡蛋白Bcl－2的水平與未干預(yù)組比明顯減少。Lu等［19］運用RT－PCR測定小檗堿作用組Fas、FasL mRNA的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)分別為對照組的4．69、1．31 倍 ，F(xiàn)as、FasL 分 別 為 對 照 組 的 214．02、28．84 倍，同時 TNF－α mRNA、TNF－α、TRAF－1 較小檗堿干預(yù)前均有明顯增高。

2．3 小檗堿調(diào)控凋亡相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá) NAG－1和ATF3是與細(xì)胞凋亡相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子，他們編碼的蛋白質(zhì)參與細(xì)胞凋亡、并且能夠抑制腫瘤細(xì)胞的形成，研究表明其在正常細(xì)胞中的表達(dá)水平明顯高于腫瘤細(xì)胞［20］，且能夠被多種抗炎、抗癌藥物激活［21］。Piyanuch 等［22］測定了 50μmol小檗堿作用 24 h后不同結(jié)腸癌細(xì)胞中NAG－1和ATF3的表達(dá)水平，其中CaCo－2中 NAG－1表達(dá)增加，SW480中 ATF3表達(dá)增加，HCT－116中 NAG－1和 ATF3表達(dá)均增加，證明小檗堿的誘導(dǎo)效應(yīng)具有細(xì)胞特異性；進(jìn)一步研究證明小檗堿通過對p53的活化誘導(dǎo)ATF3的表達(dá)，通過對 ERK1／2、PKC、GSK－3β 蛋白激酶通路的作用誘導(dǎo)NAG－1的表達(dá)。

2．4 小檗堿具有遺傳毒性 Liu等［23］發(fā)現(xiàn)小檗堿通過p53活化途徑發(fā)揮DNA的損傷作用，通過免疫熒光染色和免疫印跡法測定γ－H2AX的含量以及微核試驗，發(fā)現(xiàn)γ－H2AX和微核的量隨小檗堿量的升高而升高。此外還有研究表明小檗堿在一定的pH條件下，能夠直接與腫瘤細(xì)胞DNA結(jié)合形成DNA－小檗堿復(fù)合物［24］，且與 polyA的結(jié)合能力強于polyU、polyC；導(dǎo)致DNA雙螺旋解聚，活化p53和 ATM（ataxia telangiectasia mutated），最終誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡［25］。還能與mRNA結(jié)合，抑制移位和轉(zhuǎn)錄，同時可以部分嵌入tRNA，干擾氨基酸的轉(zhuǎn)運［26］。

2．5 小檗堿影響細(xì)胞膜離子通道的開放 陳明鍇等［27］將 0．1、0．3、3．0、30．0 μmol／L 小檗堿作用于HT－29 細(xì)胞 24、48、72、96 h 后，MTT 檢測細(xì)胞增殖、流失細(xì)胞術(shù)檢測凋亡率發(fā)現(xiàn)抑癌率和凋亡率較對照組明顯增高；膜片鉗檢測延遲整流鉀通道IK（V）發(fā)現(xiàn) 0．1、0．3、3．0、30．0 μmol／L 小檗堿能濃度依賴性抑制 HT－29細(xì)胞 IK（V），階躍刺激為＋80 mV 時，對照組、0．3、3．0、30．0 μmol／L 小檗堿組 IK（V）分別為（488±42）、（372±22）、（296±25）、（225±34） pA，0．3、3．0、30．0 μmol／L 小檗堿組 IK（V）分別為對照組的（77．16±5．41）%、（61．35±6．09）%、（45．87±7．62）%，他們認(rèn)為小檗堿通過抑制結(jié)腸癌細(xì)胞IK（V）的開放抑制增殖并誘導(dǎo)凋亡。劉善文等［28］使用高滲和低滲灌流液以及氯通道阻斷劑研究小檗堿激活的SW480全細(xì)胞氯電流的生理學(xué)和藥理學(xué)特性，小檗堿（10 nmol／L）可誘發(fā) SW480細(xì)胞迅速產(chǎn)生氯電流，該電流沒有明顯的時間依賴性失活和電壓依賴性失活，細(xì)胞外灌流高滲液可幾乎完全抑制小檗堿激活的氯電流，而低滲液外灌流可激活一個氯電流，其特性與小檗堿激活的氯電流相似，氯通道阻斷劑NPPB、tamoxifen能顯著抑制小檗堿激活的氯電流。以上實驗結(jié)果提示，小檗堿可以激活細(xì)胞膜上的氯通道，且氯通道對氯通道阻斷劑和細(xì)胞容積變化敏感，進(jìn)而通過改變離子通道的活動來影響細(xì)胞周期、增殖以及細(xì)胞凋亡。

3 抑制腫瘤細(xì)胞增殖

目前研究已發(fā)現(xiàn)小檗堿主要通過對周期蛋白（cyclin）、周期蛋白依賴性蛋白激酶（CDK）、周期蛋白依賴性蛋白激酶抑制因子（CKI）的調(diào)控阻斷細(xì)胞周期，抑制腫瘤細(xì)胞增殖。He 等［29］觀察到 10、40、80 μmol小檗堿作用于QBC939細(xì)胞后，MTT法測定在24、48 h兩個時間點的吸光度值均顯著小于對照組，同時80 μmol小檗堿作用于正常腸上皮細(xì)胞HIBEC 48 h后未觀察到明顯的細(xì)胞毒作用，證明小檗堿在抑制腫瘤細(xì)胞增殖的同時對正常細(xì)胞的毒作用較小。流式細(xì)胞術(shù)測定結(jié)果發(fā)現(xiàn)G1期細(xì)胞明顯增加、S期細(xì)胞明顯下降，細(xì)胞周期被阻斷在G1－S階段；進(jìn)一步western blotting法測定G1期到S期的周期相關(guān)蛋白發(fā)現(xiàn)，小檗堿發(fā)揮上調(diào)作用是通過上調(diào)CKI p21、p15，同時減少Cdk2和Cdk4的活化。Liu等［30］也觀察到小檗堿抑制腫瘤細(xì)胞的生長，且呈濃度和時間依賴性；流式細(xì)胞術(shù)測定G1期細(xì)胞比例上升的同時S期細(xì)胞下降，又將BrdU作為標(biāo)記物證實進(jìn)入S期的細(xì)胞減少，從而認(rèn)為細(xì)胞周期停滯在G1－S階段。同時發(fā)現(xiàn)G1－S期停滯與p53基因的作用有關(guān)，小檗堿能夠濃度依賴性地引起p53蛋白水平的上升；p53突變細(xì)胞株中，G1、S期細(xì)胞數(shù)量及比例較對照組沒有明顯變化，阻滯細(xì)胞周期的作用減弱，他們得出結(jié)論小檗堿通過p53依賴的途徑調(diào)節(jié)cyclin E、cyclin D1，阻滯細(xì)胞增殖的正常進(jìn)行。

Cai等［31］通過 WST－1 實驗和克隆形成實驗觀察到小檗堿能夠抑制四株結(jié)直腸癌細(xì)胞的生長，將40 μmol小檗堿作用于LoVo細(xì)胞24 h后，進(jìn)行細(xì)胞周期分析發(fā)現(xiàn)G2－M期的比例由10．5%上升到32．5%，細(xì)胞增殖停滯在 G2－M 階段，同時 cyclinB1、cdc2、cdc25c的量較對照組明顯升高，證明小檗堿通過調(diào)控細(xì)胞周期相關(guān)蛋白抑制增殖，但其具體機制仍不清楚。

小檗堿還通過抑制COX－2的轉(zhuǎn)錄抑制細(xì)胞增殖。吳柯等［32］通過MTT實驗觀察loVo細(xì)胞的增殖情況、RT－PCR法檢測COX－2的表達(dá)水平、Western blotting法檢測COX－2蛋白的表達(dá)水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)小檗堿在濃度＞10－5mol／L時可以顯著抑制 lovo細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)凋亡，且呈濃度和時間依賴性，并能濃度依賴性地降低COX－2 mRNA和COX－2蛋白的表達(dá)，證明小檗堿通過抑制COX－2表達(dá)發(fā)揮抑制細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)凋亡的作用。王邦茂等［33］也發(fā)現(xiàn)小檗堿可抑制DCA誘導(dǎo)的HT－29人結(jié)腸癌細(xì)胞增殖，抑制COX－2 mRNA和蛋白表達(dá)及PGE2合成，認(rèn)為這一作用可能是小檗堿抑制HT－29細(xì)胞增殖的機制之一。Fukuda等［34］認(rèn)為小檗堿作用于COX－2基因的啟動子，抑制COX－2基因的轉(zhuǎn)錄，從而降低PGE2的水平，濃度依賴性的抑制結(jié)腸癌DLD－1細(xì)胞的生長。

外源性促生長因子能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖過程，小檗堿通過干擾外源性促生長途徑抑制細(xì)胞增殖。Wang 等［35］觀察到未進(jìn)行干預(yù)時 IMCE 和 HT－29 細(xì)胞中上皮生長因子受體 （epidemal growth factor receptor，EGFR）和其磷酸化水平明顯升高，腫瘤細(xì)胞中存在EGFR的過度表達(dá)和活化。小檗堿作用后不僅能顯著下調(diào)基礎(chǔ)表達(dá)的EGFR及其磷酸化物的量，還有效抑制了上皮生長因子（epidemal growth factor，EGF）誘導(dǎo)的EGFR的活化，同時實時定量PCR測定EGFR mRNA水平?jīng)]有明顯變化，證明小檗堿不是從基因表達(dá)水平調(diào)控EGFR含量的；又檢測到泛素連接酶Cb1磷酸化水平升高，免疫沉淀法測定磷酸化Cb1和EGFR的交聯(lián)物及EGFR的泛素化物含量升高。根據(jù)實驗結(jié)果，他們認(rèn)為小檗堿能夠提高Cb1的磷酸化水平，從而增強其對EGFR的泛素化水平，最終導(dǎo)致EGFR的在細(xì)胞膜上的重組或降解破壞，外源促生長因子無法作用于結(jié)腸癌細(xì)胞，抑制細(xì)胞增殖。

4 抑制腫瘤細(xì)胞的擴散

研究已證實小檗堿通過作用于細(xì)胞內(nèi)重要的信號通路從而抑制多種腫瘤細(xì)胞的侵襲，包括IKK、NF－κВ、ERK、AMP 等介導(dǎo)的信號通路。Ho等［36］通 過 劃 痕 實 驗 、Transwell 實 驗 觀 察 到 62．5 μmol、125 μmol小檗堿作用24、48 h后遷移、侵襲能力明顯 被 抑 制 ，MMP－2、MMP－9、u－PA、FAK、p－JNK、NF－κB的水平與對照組相比明顯下降，結(jié)合其他同類實驗結(jié)果，他們認(rèn)為小檗堿通過FAK、p－JNK、NF－κB信號通路抑制在腫瘤轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用的 MMP－2、MMP－9、u－PA 的表達(dá)。Park 等［37］發(fā)現(xiàn)小檗堿作用于多株結(jié)腸癌細(xì)胞后誘導(dǎo)產(chǎn)生ROS，激活腺 苷 酸 活 化 蛋 白 激 酶 （AMP－activated protein kinase，AMPK）通路，通過AMPK依賴性途徑抑制整合素β1的翻譯，整合素β1蛋白水平下降，其下游分子Src、FAK、p130Cas磷酸化下降；小檗堿也能夠直接影響整合素β1的穩(wěn)定性，導(dǎo)致蛋白降解，從而抑制其介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞黏附、遷徙、侵犯能力的下降。Kim等［38］通過黏附實驗、劃痕實驗、Transwell實驗觀察到小檗堿有效抑制腫瘤細(xì)胞的黏附、遷徙，也證實了ROS的產(chǎn)生激活了AMPK通路，并同時發(fā)現(xiàn)ERK活化水平和COX－2表達(dá)的下降，得出結(jié)論小檗堿通過活化AMPK通路抑制ERK信號通路和COX－2的表達(dá)，起到抑制腫瘤細(xì)胞黏附、遷徙和侵犯周圍組織的作用。小檗堿在體外實驗中也顯示了較好的抑制腫瘤擴散的作用。Mitani等［39］用小檗堿40 mg／kg灌胃腫瘤模型小鼠14 d后，發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移明顯減少，小檗堿與抗癌藥物伊立替康共同作用后產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng)，較單獨作用組更顯著地抑制了腫瘤在原發(fā)部位的生長以及淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移。

Murthy等［40］研究還發(fā)現(xiàn)小檗堿能夠抑制腫瘤轉(zhuǎn)移過程中血管的形成，作用72 h后能夠顯著下調(diào)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）且這一作用與 caspase－8的活化相關(guān)，又進(jìn)一步測定與血管形成、caspase－8相關(guān)的TNF相關(guān)凋亡誘導(dǎo)受體（TNF－related apoptosis－inducing ligand，TRAIL）、 凋亡誘導(dǎo)因子 （apoptosis inducing factor，AIF）、存活素（survivin），結(jié)果發(fā)現(xiàn) TRAIL 沒有明顯變化，作用12 h后AIF、suivivin的水平上升，48 h后兩者含量均下降。

5 抑制結(jié)腸癌細(xì)胞的其他機制

5．1 小檗堿影響鳥氨酸脫羧酶（ornithine decarboxylase，ODC）的表達(dá) ODC是腫瘤標(biāo)志物多胺合成代謝途徑中的第一個限速酶，ODC活性的異常會引起包括腫瘤在內(nèi)的一系列疾病的發(fā)生，研究發(fā)現(xiàn)腸黏膜細(xì)胞內(nèi)高ODC活性和多胺含量是腸癌發(fā)生的主要因素［41］。王桂香等［42］的研究中熒光定量PCR 結(jié)果 顯 示 25、50、100 μmol／L 鹽 酸 小 檗 堿 對 ODC mRNA表達(dá)雖有下調(diào)趨勢，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義，Western blotting結(jié)果表明鹽酸小檗堿可顯著下調(diào)ODC蛋白表達(dá)，且隨著藥物濃度的增加，表達(dá)逐漸降低，具有劑量依賴效應(yīng)，表明小檗堿對ODC的影響可能是在翻譯水平上的調(diào)控。

5．2 小檗堿和化療藥物及放療的協(xié)同作用 小檗堿與化療藥物或放療共同作用于腫瘤細(xì)胞時，能夠產(chǎn)生協(xié)同作用，作用效果顯著強于單獨作用。研究發(fā)現(xiàn)AS2O3與鉑類藥物的化療方案中，加用小檗堿后能夠明顯提高對HeLa、SNU－5、膠質(zhì)瘤細(xì)胞等多種腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒作用［43］；Liu 等［44］將 ER 受體拮抗劑和小檗堿聯(lián)合用于ER受體陽性的乳腺癌細(xì)胞MCF－7的治療，發(fā)現(xiàn)能夠有效抑制細(xì)胞生長。此外放射線與小檗堿對 A549［45］、HepG2［46］等腫瘤細(xì)胞在細(xì)胞凋亡上也表現(xiàn)出抑制的協(xié)同作用。但目前協(xié)同作用的具體機制仍不清楚。

5．3 小檗堿參與細(xì)胞自噬 研究發(fā)現(xiàn)小檗堿在發(fā)揮細(xì)胞毒作用誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞死亡的過程中，不僅參與細(xì)胞凋亡還加速了細(xì)胞自噬。Peng等［45］通過小檗堿作用于肺癌細(xì)胞的研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞出現(xiàn)了一系列自噬的特征性形態(tài)學(xué)改變，同時參與自噬過程的Beclin－1和Bcl－2分子的調(diào)控，從而證實小檗堿參與了細(xì)胞自噬過程。Wang等［47］的研究也發(fā)現(xiàn)小檗堿能夠提高腫瘤細(xì)胞中Beclin－1的表達(dá)，并且抑制mTOR對自噬過程的調(diào)控。由于細(xì)胞凋亡和自噬調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)的復(fù)雜性和交叉性，小檗堿對自噬過程的具體作用機制還有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，可知植物有效成分已成為抗癌新藥開發(fā)的重要來源，小檗堿因其廣泛藥理活性有效抑制腫瘤細(xì)胞而成為研究熱點。未來其抗癌機制的研究將集中在基因水平，通過進(jìn)一步探討小檗堿在細(xì)胞信號通路、細(xì)胞周期調(diào)控、凋亡誘導(dǎo)及抑制、腫瘤抑制物、mRNA等中的作用機制，確定抑癌精確靶點，并且確定針對不同惡性腫瘤的作用劑量，設(shè)計短期化療方案。目前對于小檗堿抑制惡性腫瘤的研究還主要集中在實驗室階段，缺乏臨床實驗證據(jù)和支持，將通過作用機制的進(jìn)一步闡明，并結(jié)合臨床效果和反應(yīng)，開發(fā)出高效低毒的新型化療藥物。

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