急性腎損傷患者外周血親環(huán)素A、血管緊張素Ⅱ水平變化及血液透析對(duì)二者的影響

孟瑚，周曉萍，徐劍，羅惠民，袁紅伶，熊麗焱(云南省第一人民醫(yī)院，昆明650032)

急性腎損傷患者外周血親環(huán)素A、血管緊張素Ⅱ水平變化及血液透析對(duì)二者的影響

孟瑚，周曉萍，徐劍，羅惠民，袁紅伶，熊麗焱
(云南省第一人民醫(yī)院，昆明650032)

摘要:目的觀察急性腎損傷(AKI)患者外周血親環(huán)素A(CyPA)、血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)水平的變化，并探討血液透析對(duì)二者的影響。方法選擇AKI患者40例(觀察組)，隨機(jī)分為透析組23例和未透析組17例;患者均予厄貝沙坦150 mg/d治療4周，治療前及治療4周后分別抽取外周血測(cè)定CyPA、AngⅡ水平。另選取本院性別、年齡與觀察組相匹配的體檢正常者40例為對(duì)照組，比較觀察組與對(duì)照組以及透析組與未透析組外周血CyPA、AngⅡ水平，并分析CyPA與AngⅡ水平變化的關(guān)系。結(jié)果治療前觀察組外周血CyPA、AngⅡ水平高于對(duì)照組(P均＜0.01)，觀察組治療后與治療前比較CyPA、AngⅡ水平降低(P均＜0.01)。AKI患者外周血CyPA與AngⅡ水平變化呈正相關(guān)(r=0.600，P＜0.05)。透析組與未透析組比較，CyPA、AngⅡ水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＞0.05)。結(jié)論CyPA作為一種炎癥細(xì)胞介質(zhì)，可能協(xié)同AngⅡ加重AKI患者腎小管上皮細(xì)胞損傷及細(xì)胞凋亡。血液透析對(duì)AKI患者外周血CyPA與AngⅡ水平無(wú)影響。

關(guān)鍵詞:急性腎損傷;外周血親環(huán)素A;血管緊張素Ⅱ

急性腎損傷是臨床常見(jiàn)的危重急癥之一，患者腎內(nèi)血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)水平明顯升高，腎小球?yàn)V過(guò)率下降［1］。親環(huán)素A(CyPA)是一種具有多種生物學(xué)功能的蛋白，腎臟中特別是鄰近腎小管上皮細(xì)胞部位相對(duì)水平較高［2］。體外研究表明，AngⅡ可以促進(jìn)CyPA的分泌，CyPA可增加IL-6、IL-1、TNF-α等炎癥因子的分泌，這些因子可使內(nèi)皮受損，導(dǎo)致白細(xì)胞黏附炎癥反應(yīng)加重腎組織損傷［3］。但在急性腎損傷患者中CyPA與AngⅡ的關(guān)聯(lián)性尚無(wú)研究證實(shí)。本研究檢測(cè)正常人、急性腎損傷患者外周血中CyPA及AngⅡ水平，并探討血液透析對(duì)二者的影響。

1　資料與方法

1.1臨床資料選擇2011年10月～2014年4月本院收治急性腎損傷患者40例(觀察組)，男29例、女11例，年齡(48.15±17.58)歲，靜脈血BUN (26.38±9.80) mmol/L、Cr(671.55±86.52)μmol/L; 40例患者中，行透析治療23例和未行透析治療17例。排除標(biāo)準(zhǔn):存在呼吸道、消化道、泌尿生殖系感染者，有活動(dòng)性免疫系統(tǒng)疾病、惡性腫瘤、心功能不全未控制者，3個(gè)月內(nèi)使用過(guò)免疫抑制劑者，高鉀血癥、雙側(cè)腎動(dòng)脈狹窄有厄貝沙坦使用禁忌者。另選取本院體檢中心查體正常者40例(對(duì)照組)，男23例、女17例，年齡(44.00±13.96)歲，靜脈血BUN(4.34±1.94) mmol/L、Cr(76.10±16.42) μmol/L。對(duì)照組與觀察組比較，性別、年齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2外周血CyPA、AngⅡ水平檢測(cè)觀察組入院后即抽取外周血測(cè)定CyPA、AngⅡ水平;住院期間均口服厄貝沙坦150 mg/d治療4周，然后再次抽取外周血測(cè)定CyPA、AngⅡ水平。對(duì)照組健康體檢時(shí)抽取外周血測(cè)定CyPA、AngⅡ水平。①CyPA水平檢測(cè):采用酶聯(lián)免疫吸附法將CyPA抗體包被于96孔微孔板中，制成固相載體，向微孔中分別加入標(biāo)準(zhǔn)品或標(biāo)本，其中CyPA與連接于固相載體上的抗體結(jié)合。然后加入生物素化的CyPA抗體，將未結(jié)合的生物素化抗體洗凈后，加入HRP標(biāo)記的親和素，再次徹底洗滌后加入顯色底物TMB。TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下最終轉(zhuǎn)化成黃色，顏色的深淺和樣品中的CyPA水平呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀于450 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度(OD值)，計(jì)算樣品濃度。以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為縱坐標(biāo)，OD值為橫坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度，乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。②AngⅡ水平檢測(cè):采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)技術(shù)。用抗人AngⅡ抗體包被于酶標(biāo)板上，實(shí)驗(yàn)時(shí)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的AngⅡ與包被抗體結(jié)合，游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人AngⅡR2-Ab抗體和辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的親和素?？谷薃ngⅡ抗體與結(jié)合在包被抗體上的人AngⅡ結(jié)合、生物素與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物，游離的成分被洗去。加入TMB，TMB在辣根過(guò)氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍(lán)色，加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀于450 nm波長(zhǎng)處測(cè)OD值，AngⅡ濃度與OD值呈正比，通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中AngⅡ的濃度。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料用珋x±s表示，組間比較及觀察組治療前后比較采用t檢驗(yàn); CyPA與AngⅡ水平變化的關(guān)系采用Pearson相關(guān)分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1兩組AngⅡ、CyPA水平比較觀察組治療前與對(duì)照組比較，CyPA、AngⅡ水平有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P均＜0.01) ;觀察組治療前后比較，CyPA、AngⅡ水平有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P均＜0.01)。見(jiàn)表1。

表1　兩組AngⅡ、CyPA水平比較(pg/mL，±s)

注:與對(duì)照組比較，*P＜0.01;與本組治療前比較，△P＜0.01。

組別　n　AngⅡCyPA觀察組40治療前　244.14±30.27*　292.64±36.37*治療后　126.78±26.83△　87.65±42.21△對(duì)照組40　60.56±20.47　104.57±21.89

2.2CyPA與AngⅡ水平相關(guān)分析Pearson相關(guān)分析顯示，AKI患者外周血CyPA與AngⅡ水平變化呈正相關(guān)(r=0.600，P＜0.05)。

2.3血液透析對(duì)急性腎損傷患者外周血CyPA、AngⅡ水平的影響急性腎損傷接受透析和未行透析患者治療前后CyPA、AngⅡ水平比較，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P均＞0.05)。見(jiàn)表2。

表2　透析與未透析患者外周血CyPA、AngⅡ水平比較(pg/mL，±s)

Ang ⅡCyPA組別　n治療前　治療后透析組　23　235.97±33.63 130.43±29.94 285.72±34.85 8治療前　治療后3.98±35.51未透析組　17　255.19±21.28 121.84±21.84 302.01±37.30 92.62±50.64

3　討論

近年來(lái)研究認(rèn)為，在急性腎損傷時(shí)腎臟內(nèi)皮細(xì)胞和近端腎小管上皮細(xì)胞都產(chǎn)生細(xì)胞因子和炎癥趨化因子，導(dǎo)致炎癥細(xì)胞(包括中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、NK細(xì)胞等)進(jìn)入腎間質(zhì)，并分泌前炎癥因子(如TNF-α、IL-2、IL-6、IL-8和MCP-1等化學(xué)趨化因子)參與炎癥的發(fā)生，這些前炎癥因子的產(chǎn)生啟動(dòng)了炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)，加重了腎損傷［3］。

本研究表明，急性腎損傷患者外周血AngⅡ水平較正常對(duì)照組明顯升高，這與以往的研究結(jié)果一致。本研究發(fā)現(xiàn)，急性腎損傷患者CyPA水平較正常人也有顯著升高，提示CyPA可能作為炎癥介質(zhì)，介導(dǎo)化學(xué)趨化因子分泌增加，促進(jìn)了炎性細(xì)胞進(jìn)入腎間質(zhì)，造成腎損傷。其可能的作用機(jī)制是: AngⅡ激活細(xì)胞煙酰胺腺嘌呤二核苷磷酸(NADPH)氧化酶，產(chǎn)生活性氧自由基(ROS) ; ROS激活Rho GTP酶，導(dǎo)致CyPA分泌增加［3］。CyPA刺激單核-巨噬細(xì)胞的化學(xué)因子表達(dá)，誘導(dǎo)炎癥細(xì)胞分泌IL-1、IL-6、IL-8、單核細(xì)胞趨化蛋白-1和TNF-α導(dǎo)致腎損傷。CyPA通過(guò)激活MMPs調(diào)節(jié)膠原蛋白水解活性，促進(jìn)炎癥細(xì)胞遷移［4，5］。此外，CyPA還可與AngⅡ協(xié)同作用促進(jìn)ROS的產(chǎn)生，促進(jìn)AngⅡ誘發(fā)血管平滑肌細(xì)胞增殖［6］。除炎癥外，腎小管上皮細(xì)胞凋亡也是急性腎損傷的重要病理生理機(jī)制之一。有研究報(bào)道，CyPA的釋放是細(xì)胞壞死的標(biāo)志，有可能參與細(xì)胞的凋亡［7］。

本研究中，使用厄貝沙坦治療后，AngⅡ及CyPA水平明顯下降。其可能的機(jī)制是:血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑具有抗氧化特性，可抑制NADPH氧化酶活性［8］，從而抑制CyPA分泌。此外通過(guò)阻斷AT1受體抑制腎小球系膜細(xì)胞收縮，減少ROS［9］，減少白細(xì)胞增殖，抑制黏附因子上調(diào)［10］，從而起到抗炎作用。

急性腎損傷血液透析和未行血液透析患者相比，不管是治療前和治療后CyPA與AngⅡ水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，提示CyPA和AngⅡ水平未受血液透析影響。文獻(xiàn)報(bào)道，連續(xù)性血液濾過(guò)治療能降低MODS患者的炎癥介質(zhì)水平;但也有研究證實(shí)吸附是連續(xù)性血液濾過(guò)清除炎癥介質(zhì)的主要方式［11］，常規(guī)的血液透析難以有效清除體內(nèi)的炎性因子。本研究中患者均采用普通血液透析，清除溶質(zhì)的方式為彌散和對(duì)流，故推測(cè)這是血液透析對(duì)CyPA、AngⅡ水平無(wú)影響的原因之一。

通過(guò)本研究我們得出以下結(jié)論:外周血CyPA水平與急性腎損傷顯著相關(guān)，CyPA可能是一種新的急性腎損傷的標(biāo)志物; CyPA與AngⅡ可能協(xié)同促進(jìn)了急發(fā)腎損傷患者的炎癥反應(yīng)，加重了腎小管及間質(zhì)損傷;選擇性地阻斷AngⅡ及CyPA受體可能是急性腎損傷新的治療途徑。但本研究例數(shù)較少，以上結(jié)論尚需大樣本長(zhǎng)期觀察研究加以證實(shí)。

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Changes in levels of CyPA and AngII in peripheral blood of patients with acute kidney injury and influence of hemodialysis on them

MENG Hu，ZHOU Xiao-pin，XU Jian，LUO Hui-ming，YUAN Hong-ling，XIONG Li-yan (The First People＇s Hospital of Yunnan Province，Kunming 650032，China)

Abstract:Objective To observe the changes in levels of cyclophilin A (CyPA) and AngiotensinⅡ(AngⅡ) in the peripheral blood of patients with acute kidney injury (AKI) and to investigate the influence of hemodialysis on them.Methods Forty patients with AKI (observation group) were randomly divided into the dialysis group (23 cases) and nondialysis group (17 cases).All patients received the treatment of irbesartan 150 mg/d for 4 weeks.The peripheral blood was obtained before and after treatment for 4 weeks to determine the levels of CyPA and AngⅡ.Another 40 gender-and age-matched healthy people were selected as the control group.We observed the levels of CyPA and AngⅡin the peripheral blood of the observation group and control group，dialysis group and non-dialysis group，and analyzed the relationships between changes in levels of CyPA and AngⅡ.Results Before treatment，the levels of CyPA and AngⅡin the peripheral blood of the observation group were higher than those of the control group (all P＜0.01).In the observation group，the levels of CyPA and AngⅡwere decreased after treatment as compared with those before treatment (all P＜0.01).In the peripheral blood of AKI patients，the levels of CyPA and AngⅡwere positively correlated (r=0.600，P＜0.05).No significant differences were found in the levels of CyPA and AngⅡbetween dialysis group and non-dialysis group.Conclusion

CyPA，as a kind of an inflammatory mediator，may，aggravate the renal tubular epithelial cell injury and apoptosis，and hemodialysis has no effect on CyPA and AngⅡin the peripheral blood of AKI-patients.

Key words:acute kidney injury; cyclophilin A; AngiotensinⅡ

(收稿日期:2015-01-01)

通信作者簡(jiǎn)介:周曉萍(1968-)，女，主任醫(yī)師，碩士，主要從事各種原發(fā)及繼發(fā)性腎臟疾病的臨床及病理研究。E-mail: amilyzhou@ hotmail.com

作者簡(jiǎn)介:第一孟瑚(1975-)，女，主治醫(yī)師，碩士，主要從事腎臟疾病的臨床研究。E-mail: menghu1975@126.com

基金項(xiàng)目:云南省科技廳應(yīng)用基礎(chǔ)研究基金資助項(xiàng)目(2011FZ275)。

文章編號(hào):1002-266X(2015)21-0010-03

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

中圖分類號(hào):R692

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.21.004