加減二藤湯對(duì)慢性盆腔炎大鼠模型的影響

華潔 吳燕平 徐欣 李媛媛

（浙江中醫(yī)藥大學(xué)·杭州 310000）

慢性盆腔炎（ChronicPelvicInflammatory，CPID）是女性內(nèi)生殖器、周圍結(jié)蹄組織及盆腔腹膜所發(fā)生的慢性炎癥，是婦科常見病，常反復(fù)發(fā)作，遷延難愈，是異位妊娠和不孕癥的常見病因。近年來，隨人工流產(chǎn)、宮腔內(nèi)操作次數(shù)增多及性傳播疾病的泛濫，CPID呈上升趨勢(shì)，約占婦科疾病的14.7%[1]西醫(yī)非手術(shù)治療多使用抗生素，但臨床效果不甚理想，更因致病菌耐藥性的產(chǎn)生愈發(fā)容易反復(fù)感染。二藤湯為全國(guó)名老中醫(yī)裘笑梅醫(yī)師所創(chuàng)，以清熱解毒、祛瘀化濕為主效，經(jīng)后代醫(yī)師長(zhǎng)期實(shí)踐逐步化裁形成本實(shí)驗(yàn)用方加減二藤湯，在臨床觀察中效果顯著[2]。本研究從組織形態(tài)學(xué)及血液流變學(xué)的角度分析探討加減二藤湯治療慢性盆腔炎的治療作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)雌性SD大鼠60只，鼠齡8～10周，重量180～220g，由浙江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物研究實(shí)驗(yàn)中心提供，購(gòu)自上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，許可證號(hào):SCXK(滬)2013-0016。在符合清潔標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)室（T18-24℃，濕度50%-70%）分籠飼養(yǎng)，自由飲水進(jìn)食。飼料均來源于浙江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物研究實(shí)驗(yàn)中心。

1.2 試劑與藥品

苯酚膠漿溶液，由液化苯酚5ml，西黃茂膠1g，甘油4ml[3]（由浙江中醫(yī)藥大學(xué)藥理學(xué)教研室提供）比例組成，濃度根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)定為25%。加減二藤湯，由忍冬藤、紅藤、敗醬草、蛇舌草、制元胡、川楝子、紫丹參、大青葉、威靈仙、土茯苓、制大黃等11味中藥組成，由浙江省中醫(yī)院提供飲片，濃煎為100ml/劑后4℃保存待用。婦炎消膠囊溶液，由婦炎消膠囊（貴州百祥制藥有限責(zé)任公司產(chǎn)品，規(guī)格:0.45g/粒），每10粒加入100ml0.9%NaCl中形成45g/L溶液。10%水合氯醛，由浙江中醫(yī)藥大學(xué)藥理學(xué)教研室提供。

1.3 主要儀器

全自動(dòng)血流變測(cè)試儀型號(hào)：FASCO13020B。

1.4 模型制備

隨機(jī)抽取10只大鼠為假手術(shù)對(duì)照組（簡(jiǎn)稱假手術(shù)組）。將大鼠用10%水合氯醛麻醉后，仰臥固定，于下腹部手術(shù)部位去毛，常規(guī)消毒，沿腹中線于尿道口上方1cm處向上切口約0.8～1.0cm，暴露左側(cè)子宮。于距離卵巢2cm處用5號(hào)針頭小心進(jìn)針，相同力量機(jī)械劃傷同側(cè)子宮5次后，向卵巢方向緩慢注人苯酚膠漿溶液0.05ml，手術(shù)完畢，分層關(guān)腹，消毒術(shù)區(qū)[4]。假手術(shù)組切開暴露后直接進(jìn)行關(guān)腹消毒處理。術(shù)后常規(guī)飼養(yǎng)14d。

1.5 分組給藥

造模第15d將除假手術(shù)組外50只大鼠隨機(jī)分為5組，分別為模型對(duì)照組（簡(jiǎn)稱模型組）、陽(yáng)性藥物對(duì)照組（婦炎消膠囊溶液4ml/d，簡(jiǎn)稱為陽(yáng)性組）、加減二藤湯高、中、低劑量組（分別為2ml/100g、1ml/100g、0.5ml/100g，簡(jiǎn)稱高、中、低劑量組），劑量全部根據(jù)根據(jù)“體表面積與劑量換算”[5]理論計(jì)算，灌胃時(shí)中、低劑量組予適量0.9%NaCl至4ml/只進(jìn)行。假手術(shù)組及模型組予0.9%NaCl4ml/d，連續(xù)灌胃21d。各組均正常飼養(yǎng)。

1.6 標(biāo)本采集及觀察測(cè)定

每周稱體質(zhì)量1次，末次給藥24h后，將大鼠以10%水合氯醛麻醉處理。

1.6.1 肉眼觀察 肉眼觀察盆腔內(nèi)生殖器變化。盆腔積液或充血，炎性腫脹，分輕、中、重度，計(jì)1,2,3分；盆腔內(nèi)有纖維組織粘連，分輕、中、重度，計(jì)1.2,3分；輸卵管狹窄、變硬、扭曲，分輕、中、重度，計(jì)1.2.3分，未見以上內(nèi)容記0分。[5]

1.6.2 子宮腫脹程度和輸卵管通暢情況檢測(cè) 分離大鼠雙側(cè)子宮，除去脂肪組織后用電子天平稱重，計(jì)算子宮腫脹程度。

腫脹抑制率（%）=（模型組平均腫脹度—給藥組腫脹度）/模型組平均腫脹度x100%

1.6.3 病理學(xué)觀察 將摘取的雙側(cè)子宮及卵巢置于福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋，HE染色，制作子宮及卵巢病理切片：按照表1進(jìn)行評(píng)分。[6]

表1 病理積分標(biāo)準(zhǔn)

1.6.4 血液流變學(xué)測(cè)定 每只大鼠心臟采血3～4ml，送至浙江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物研究實(shí)驗(yàn)中心生化實(shí)驗(yàn)室測(cè)定。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 大體觀察

2.1.1 子宮情況 結(jié)果表明（表2），模型組與假手術(shù)組比較，子宮重量明顯增加；陽(yáng)性組與各藥物組子宮重量均小于模型組，且有抑制子宮腫脹的趨勢(shì)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。同時(shí)，腫脹程度隨藥物劑量升高而降低，且高劑量組在抑制子宮腫脹方面略優(yōu)于陽(yáng)性組。

表2 子宮情況

2.1.2 盆腔情況 結(jié)果表明（表3），與假手術(shù)組相比，其余各組的盆腔均受到不同程度的影響，模型組尤甚，肉眼可觀察到腹腔內(nèi)有一定量渾濁液體，子宮表面充血膨大，“Y”型兩支明顯增粗，內(nèi)似有透明液體，部分分支與盆腔壁、腸管粘連，輸卵管處有腫大包塊；陽(yáng)性組與各藥物組間無明顯差異，輸卵管及子宮表現(xiàn)隨藥物濃度增加而減輕。

表3 肉眼觀察加減二藤湯對(duì)盆腔的影響

2.2 病理組織觀察

結(jié)果表明（表4），假手術(shù)組與陽(yáng)性組、模型組有顯著差異，陽(yáng)性組與各藥物組無明顯差異。模型組在光鏡下顯示上皮細(xì)胞部分脫落壞死，內(nèi)膜充血水腫明顯，慢性炎細(xì)胞數(shù)量多甚充斥全層。假手術(shù)組只有少量炎細(xì)胞散在存在。

表4 加減二藤湯對(duì)病理組織的影響

2.3 血液流變學(xué)影響

結(jié)果顯示（表5），模型組較假手術(shù)組各項(xiàng)指標(biāo)均有顯著升高，說明模型大鼠呈現(xiàn)出“粘、聚”的狀態(tài)，而陽(yáng)性組與各藥物組和模型組相比有不同程度的減輕凝血狀態(tài)；在改善全血黏度、血漿黏度方面，陽(yáng)性組略優(yōu)于藥物組。

表5 血液流變學(xué)

3 討論

慢性盆腔炎包括慢性子宮內(nèi)膜炎、慢性輸卵管炎、慢性盆腔結(jié)締組織炎等，其中子宮內(nèi)膜炎可以上行感染，引起盆腔其他臟器的炎癥。大鼠子宮在盆腔生殖器官中占有較大比例，所以一般認(rèn)為大鼠子宮內(nèi)膜炎基本可以反映盆腔的炎性癥狀。[7]

在西醫(yī)理論中，慢性盆腔炎因急性盆腔炎治療不及時(shí)、不徹底、患者體質(zhì)虛弱，病情遷延而成，有時(shí)也并無急性盆腔炎史。裘老認(rèn)為西醫(yī)的“盆腔炎”、“附件炎”、“子宮內(nèi)膜炎”等疾病，中醫(yī)辨證大多屬濕熱下注、氣血郁結(jié)，其病因病機(jī)為濕邪侵襲，郁而化熱，聚于子宮胞絡(luò)，瘀血內(nèi)生，或因濕熱余邪未盡，正氣未復(fù)，氣血阻滯，濕熱瘀內(nèi)結(jié)，二者皆可致沖任帶脈功能失調(diào)。治療上因以清熱利濕、活血化瘀為主。方中忍冬藤、紅藤為君藥，取其清熱化濕通絡(luò)之功；蛇舌草利濕、敗醬草活血、大青葉涼血，三者皆有清熱解毒之能，為臣藥；威靈仙、土茯苓除濕通絡(luò)止痛，大黃泄血中之熱而導(dǎo)穢濁出，紫丹參佐敗醬草、大青葉活血涼血以控制熱毒蔓延擴(kuò)散[8]，制元胡、川楝子行氣活血止痛，為佐藥；甘草為使，清熱解毒，調(diào)和諸藥。合之而成清熱祛濕，涼血化瘀止痛之劑。

結(jié)合裘老的理論和本實(shí)驗(yàn)結(jié)果，分析如下：一方面，濕熱是本病的主要病因，在臨床研究中多與慢性炎癥相關(guān)聯(lián)[9]，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)各藥物組較模型組子宮形態(tài)學(xué)改變少，更接近于假手術(shù)組，故加減二藤湯具有減輕炎癥反應(yīng)的作用。另一方面，血瘀為本病的主要病機(jī)，而血瘀證與西醫(yī)的血液流變學(xué)存在一定關(guān)系[10]，大量臨床試驗(yàn)研究也證實(shí)CPID患者大都存在著不同程度的血液流變學(xué)的異常，即血液都處于濃、豁、凝、聚狀態(tài)[11]。本實(shí)驗(yàn)中各藥物組的血液流變學(xué)指標(biāo)明顯較模型組低，表明加減二藤湯可以改善慢性盆腔炎大鼠的高凝狀態(tài)。綜上所述，加減二藤湯對(duì)慢性盆腔炎大鼠有較好治療作用。

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