子宮內(nèi)膜異位癥合并代謝綜合征患者血清和腹腔液中sflt-1、VEGF、MCP-1、RANTES及組織中 kiss-1 的表達(dá)

李萍 董軍杰 牛海玲 趙金榮 王海波 李秀娟

子宮內(nèi)膜異位癥多發(fā)于生育年齡女性，多表現(xiàn)為痛經(jīng)、持續(xù)性下腹痛、經(jīng)量增多、經(jīng)期延長及卵巢功能減退和喪失、性交痛和不孕。臨床研究表明，子宮內(nèi)膜異位癥生物標(biāo)志物對(duì)患者的早期診斷、病情預(yù)測、療效評(píng)估有重要作用［1］。代謝綜合征患者由于胰島素抵抗、糖調(diào)節(jié)受損，可導(dǎo)致患者卵巢顆粒細(xì)胞瘤中IRS-2、PPAR-γ mRNA功能障礙，從而發(fā)生子宮內(nèi)膜病變、生殖能力下降。Kiss-1表達(dá)減弱可能與子宮內(nèi)膜異位癥的侵襲過程有關(guān)［2］。研究表明，子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生可能與血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)-VEGFR-sVEGFR系統(tǒng)有關(guān)，而血管內(nèi)皮生長因子可溶性受體(sflt-1)與子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生呈負(fù)相關(guān)［3］。單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)能夠參與機(jī)體的免疫炎癥調(diào)節(jié)，而子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生與患者全身免疫功能異常有關(guān)，研究表明，患者內(nèi)膜MCP-1水平明顯高于正常患者，且MCP-1水平在分泌期和增生期水平也不同［4］。T細(xì)胞表達(dá)和分泌的調(diào)節(jié)性激活因子(RANTES)，能夠參與炎性反應(yīng)并調(diào)控細(xì)胞的生長分化。國內(nèi)對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥合并代謝綜合征研究較少。本研究對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥合并代謝綜合征患者測定其組織kiss-1及血清和腹腔液中 sflt-1、VEGF、MCP-1、RANTES表達(dá)的意義，以期為臨床提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取260醫(yī)院2009年11月至2014年10月收治的子宮內(nèi)膜異位癥行腹腔鏡手術(shù)患者256例，患者均符合“子宮內(nèi)膜異位癥的診斷與治療規(guī)范”［5］，且經(jīng)病理證實(shí)，年齡 15 ～46 歲，平均年齡(36±9)歲;月經(jīng)初潮年齡10～16歲，平均年齡(13±3)歲;月經(jīng)周期24～30 d，平均(27±4)d;月經(jīng)天數(shù)4～8 d，平均(7±3)d;孕次0～2次，平均(1.0±0.4)次;體重指數(shù)(BMI)(29±6)kg/m2;CA125陽性173例(67.6%);合并子宮肌瘤68例(26.6%);痛經(jīng)142例(55.5%)，非經(jīng)期下腹痛 46 例(18.0%)，性交痛8例(3.1%)。子宮內(nèi)膜異位癥患者根據(jù)病變部位、大小、粘連程度分為Ⅰ～Ⅳ期，其中Ⅰ～Ⅱ期76例(Ⅰ～Ⅱ期組)，Ⅲ～Ⅳ期180例(Ⅲ～Ⅳ期組)。Ⅰ～Ⅱ期組年齡16～45歲，平均年齡(35±10)歲;月經(jīng)初潮年齡10～15歲，平均(12±3)歲;月經(jīng)周期25～29 d，平均(26±5)d;月經(jīng)天數(shù)5～8 d，平均(7±3)d;孕次0～2次，平均(0.9±0.5)次;BMI(27±8)kg/m2;CA125陽性 40例(52.6%);合并子宮肌瘤 20例(26.3%);痛經(jīng) 39 例(51.3%)，非經(jīng)期下腹痛 14 例(18.4%)，性交痛 2 例(2.6%)。Ⅲ ～ Ⅳ期組年齡15～46歲，平均年齡(37±9)歲;月經(jīng)初潮年齡10～16歲，平均(13±4)歲;月經(jīng)周期26～30 d，平均(27±5)d;月經(jīng)天數(shù)4～8 d，平均(7±3)d;孕次0～2次，平均(1.1±0.4)次;BMI(28±4)kg/m2;CA125陽性133例(73.9%);合并子宮肌瘤48例(26.7%);痛經(jīng)103例(57.2%)，非經(jīng)期下腹痛 32 例(17.8%)，性交痛 8例(3.3%)。選取同期因卵巢良性腫瘤、輸卵巢系膜囊腫、宮頸病變等入院治療的患者114例為對(duì)照組，年齡14～50歲，平均年齡(37±10)歲;月經(jīng)初潮年齡9～16歲，平均(12±3)歲;月經(jīng)周期 23～31 d，平均(28±4)d;月經(jīng)天數(shù)4～7 d，平均(5±2)d;孕次0～2次，平均(2.5±1.0)次;BMI(22±3)kg/m2;CA125 陽性20例(17.5%)。2組年齡、月經(jīng)初潮年齡、月經(jīng)周期、月經(jīng)天數(shù)、孕次、體重指數(shù)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。本研究通過我院臨床試驗(yàn)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 入選與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 入選標(biāo)準(zhǔn):①符合相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn);②年齡≤50歲;③BMI＞25 kg/m2;④空腹血糖 ＞6.1 mmol/L;⑤三酰甘油 ＞1.7 mmol/L;⑥患者或家屬知情同意。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn):①惡性腫瘤;②服用性激素、免疫抑制劑或非甾體類抗炎藥;③半年內(nèi)無妊娠或哺乳史;④風(fēng)濕、類風(fēng)濕或其他免疫系統(tǒng)疾病。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 Kiss-1檢測:取子宮內(nèi)膜組織標(biāo)本，包埋、切片備用。采用羊抗人kiss-1 metastin多克隆抗體(英國ABCAM提供)，免疫組化試劑盒(北京瑞達(dá)醫(yī)藥科技有限公司)。嚴(yán)格按照說明進(jìn)行操作。Kiss染色呈棕黃或棕褐色顆粒，定位于細(xì)胞質(zhì)。根據(jù)染色強(qiáng)度分為4級(jí):0分:無染色;1分:淡黃色;2分:中度黃色;3分:棕褐色。根據(jù)陽性細(xì)胞所占比例分為3級(jí):1級(jí):≤10%，2級(jí):10% ～50%，3級(jí)＞50%。根據(jù)陽性細(xì)胞的百分比和染色強(qiáng)度分為4個(gè)等級(jí):(－):0～1分;(+):2～3分;(++):4～5分;(+++):＞5分。

1.3.2 血清及腹腔液指標(biāo)檢測:①血清:抽取患者空腹肘靜脈血5 ml，2 500 r/min離心15 min，取上清液置于－70℃冰箱保存待測。②腹腔液:術(shù)中采用負(fù)壓吸引，取無血液污染的患者腹腔液5 ml，置于無菌離心管中，2 500 r/min離心15 min，取上清置于 －70℃冰箱保存待測。③操作:sflt-1、VEGF、MCP-1、RANTES檢測均采用ELISA進(jìn)行測定(試劑盒均購自上海信然生物技術(shù)有限公司)，使用前將所有試劑充分混勻。加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品、加入待測樣品50 μl于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50 μl的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，振蕩混勻，37℃溫育1 h。洗板3次。加入親和鏈酶素-HRP 37℃溫育30 min。洗板3次。每孔加入底物 A、B 各50 μl，輕輕振蕩混勻，37℃溫育 10 min。加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。在450 nm波長處測定各孔的OD值，根據(jù)樣品的吸光值在坐標(biāo)上找出對(duì)應(yīng)的濃度。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料以表示，采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2組kiss-1在子宮內(nèi)膜組織中的陽性表達(dá) 子宮內(nèi)膜異位癥組、Ⅰ～Ⅱ期、Ⅲ～Ⅳ期kiss-1在子宮內(nèi)膜組織的陽性表達(dá)明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。Ⅰ～Ⅱ期kiss-1在子宮內(nèi)膜組織的陽性表達(dá)明顯高于子宮內(nèi)膜異位癥組和Ⅲ～Ⅳ期，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

表1 kiss-1在子宮內(nèi)膜組織中陽性表達(dá) 例

2.2 2 組血清和腹腔液中 sflt-1、VEGF、MCP-1、RANTES表達(dá)比較 子宮內(nèi)膜異位癥組、Ⅰ～Ⅱ期、Ⅲ～Ⅳ期血清和腹腔液中 sflt-1、VEGF、MCP-1、RANTES表達(dá)明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。Ⅰ～Ⅱ期、Ⅲ ～Ⅳ期血清和腹腔液中 sflt-1、VEGF、和RANTES表達(dá)與子宮內(nèi)膜異位癥組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。Ⅰ～Ⅱ期血清和腹腔液中sflt-1、VEGF、和RANTES表達(dá)與Ⅲ～Ⅳ期比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。宮內(nèi)膜異位癥組、Ⅰ～Ⅱ期、Ⅲ～Ⅳ期血清和腹腔液中MCP-1水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見表2。

3 討論

子宮內(nèi)膜異位癥多發(fā)于育齡期女性，雖然本病屬于良性疾患，但其具有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和種植的惡性特征，給患者造成不孕、慢性疼痛等癥狀，嚴(yán)重影響其正常生活工作狀態(tài)。目前其發(fā)病機(jī)制不明，有多種學(xué)說闡述其發(fā)病病因，病理改變?yōu)楫愇粌?nèi)膜組織隨激素變化發(fā)生周期性出血，同時(shí)伴有周圍組織增生和粘連，在病變區(qū)可見紫褐色斑點(diǎn)或小泡，最好可發(fā)展為紫藍(lán)色實(shí)質(zhì)性結(jié)節(jié)或包塊。子宮內(nèi)膜異位癥合并代謝綜合征患者，因?yàn)轶w內(nèi)血脂紊亂并合并胰島素抵抗，影響卵巢的分泌功能，造成體內(nèi)激素失調(diào)，患者的臨床癥狀更為明顯。研究表明，子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病與基因、炎性介質(zhì)、血供有關(guān)［6－8］。本研究對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥合并代謝綜合征患者測定其組織kiss-1及血清和腹腔液中sflt-1、VEGF、MCP-1、RANTES 表達(dá)的意義，探討相關(guān)因子在發(fā)病中的作用。

表2 2組血清和腹腔液中sflt-1、VEGF、MCP-1、RANTES表達(dá)比較 ±s

表2 2組血清和腹腔液中sflt-1、VEGF、MCP-1、RANTES表達(dá)比較 ±s

注:與子宮內(nèi)膜組比較，*P ＜0.05;與Ⅰ ～ Ⅱ期比較，#P ＜0.05;與Ⅲ ～Ⅳ期比較，△P ＜0.05

組別 sflt-1(pg/ml)血清 腹腔液VEGF(pg/ml)血清 腹腔液MCP-1(ng/ml)血清 腹腔液RANTES(ng/L)血清 腹腔液子宮內(nèi)膜異位癥組(n=256) 241±91 472±55 542±87 867±69 37±8 84±25 109±58732±244Ⅰ～Ⅱ期(n=76) 229±88* 443±36* 396±77* 727±58* 39±6 80±27 75±31* 482±183*Ⅲ～Ⅳ期(n=180) 266±92*# 492±64*# 611±101*# 998±120*# 36±4 89±26 151±100*# 912±253*#對(duì)照組(n=114) 97±21*#△ 280±59*#△ 119±44*#△ 405±62*#△ 20±4*#△ 65±30*#△ 32±18*#△ 115±79*#△

3.1 Kiss-1 王偉等［9，10］研究表明，kiss-1 及其表達(dá)產(chǎn)物可以影響機(jī)體的神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)，其可以促進(jìn)下丘腦下丘腦興縣激素釋放激素分泌，并可以抑制腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移，而子宮內(nèi)膜異位癥患者多有遠(yuǎn)處種植現(xiàn)象。kiss-1在子宮內(nèi)膜異位癥的表達(dá)降低，可能與內(nèi)異癥侵襲有關(guān)，同時(shí)發(fā)現(xiàn)不同臨床分期中kiss-1表達(dá)不同，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。但本研究發(fā)現(xiàn)子宮內(nèi)膜異位癥組、Ⅰ～Ⅱ期、Ⅲ～Ⅳ期kiss-1在子宮內(nèi)膜組織的陽性表達(dá)明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。Ⅰ～Ⅱ期kiss-1在子宮內(nèi)膜組織的陽性表達(dá)明顯高于子宮內(nèi)膜異位癥組和Ⅲ～Ⅳ期，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。而這一結(jié)論與金海鴻等［11］的研究結(jié)果一致，可能與患者入選的標(biāo)準(zhǔn)或調(diào)查樣本大小有關(guān)。

3.2 sflt-1和VEGF 目前，血管形成是子宮內(nèi)膜異位癥的研究熱點(diǎn)，而VEGF和sflt-1可以促進(jìn)子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的增殖。王春紅等［12］對(duì)34例子宮內(nèi)膜異位癥患者進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，VEGF表達(dá)在分泌期和增生期失去了正常的周期性變化，均呈現(xiàn)高水平表達(dá)。同時(shí)，子宮內(nèi)膜異位癥患異位組織中微血管密度明顯升高［13］。本研究證實(shí)，子宮內(nèi)膜異位癥組sflt-1和VEGF水平均較對(duì)照組高(P＜0.05)，且Ⅲ～Ⅳ期水平高于Ⅰ～Ⅱ期(P＜0.05)。說明sflt-1和VEGF可能參與了子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病過程。

3.3 MCP-1和RANTES MCP-1的研究較為廣泛，其參與機(jī)體多種生理或病理性活動(dòng)，主要參與機(jī)體免疫炎癥調(diào)控，同時(shí)可以上調(diào)VEGF的表達(dá)水平，通過誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞遷移，參與到血管生成中［14］。RANTES主要作用是激活T細(xì)胞，趨化、激活多種白細(xì)胞。研究表明，RANTES與子宮內(nèi)膜異位癥患者組織炎癥、痛經(jīng)評(píng)分呈正相關(guān)(P＜0.05)，說明RANTES可能與子宮內(nèi)膜碎片逆流進(jìn)入腹腔后導(dǎo)致的炎性反應(yīng)有關(guān)［14，15］。本研究表明，子宮內(nèi)膜異位癥組MCP-1和RANTES水平均較對(duì)照組高(P＜0.05)，Ⅲ～Ⅳ期RANTES水平高于Ⅰ～Ⅱ期(P＜0.05)，而MCP-1間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

綜上所述，kiss-1、sflt-1、VEGF、MCP-1、RANTES 水平與子宮內(nèi)膜異位癥合并代謝綜合征發(fā)展密切相關(guān)，可能參與了其發(fā)病過程，可以作為子宮內(nèi)膜異位癥合并代謝綜合征的輔助檢測指標(biāo)。

1 汪沙，段華.子宮內(nèi)膜異位癥生物標(biāo)志物的研究進(jìn)展.中華婦產(chǎn)科雜志，2014，49:392-394.

2 ?；蹚?，王丹波，張淑蘭，等.Kiss-1和MMP-9在裸鼠子宮內(nèi)膜異位癥模型中的表達(dá)及意義.中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2004，33:487-489.

3 史淑紅，高秀娟，李艷芳，等.sflt-1、VEGF在子宮內(nèi)膜異位組織中的表達(dá)及意義.山東醫(yī)藥，2014，54:30-32.

4 丁琳，周建梅，倪衡建.MCP-1在子宮內(nèi)膜異位癥在位內(nèi)膜的表達(dá).齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2012，33:563-565.

5 中華醫(yī)學(xué)會(huì)婦產(chǎn)科學(xué)分會(huì)子宮內(nèi)膜異位癥協(xié)作組.子宮內(nèi)膜異位癥的診斷與治療規(guī)范.中華婦產(chǎn)科雜志，2007，42:645-648.

6 林還珠，蘇小鋒，何美清，等.kiss-1 mRNA和GPR54 mRNA在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達(dá)及意義.臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2012，11:401-402.7 熊苗，屠菊紅，趙愛民.趨化因子及其受體與子宮內(nèi)膜異位癥的關(guān)系.中國婦幼健康研究，2006，17:516-518.

8 王彥，郭維嬋.血管生成在子宮內(nèi)膜異位癥形成中的研究進(jìn)展.醫(yī)學(xué)綜述，2014，20:4111-4114.

9 王偉，王世銀，甘尚權(quán)，等.Kisspetins/GPR54神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)對(duì)哺乳動(dòng)物生殖活動(dòng)的調(diào)控.中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào)，2014，36:1200-1206.

10 錢燕萍，毛熙光.kiss-1在婦科惡性腫瘤轉(zhuǎn)移抑制中的作用研究新進(jìn)展.西南軍醫(yī)，2014，16:228-232.

11 金海鴻，單梅，李秀榮，等.kiss-1在子宮內(nèi)膜異位癥及子宮腺肌癥異位組織中的表達(dá)及意義.中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2013，17:1837-1838.

12 王春紅，魏靜波，曲銀娥，等.血管內(nèi)皮生長因子及其受體在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達(dá)和意義.中國免疫學(xué)雜志，2013，39:605-609.

13 何勤徑.血管生成素-2、血管內(nèi)皮生長因子與微血管密度在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達(dá)及臨床意義.河北醫(yī)藥，2014，36:1025-1027.

14 林敏，王溢，董克，等.子宮內(nèi)膜異位癥患者腹腔液中NF-κB和趨化因子 MCP-1、RANTES 的表達(dá).實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2014，36:577-579.

15 陳小平，陳靚芬，黃麗萍.活血化瘀中藥聯(lián)合腹腔鏡對(duì)輕型子宮內(nèi)膜異位癥不孕患者血清MCP-1、RANTES的影響.中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013，19:319-322.