丁苯酞氯化鈉聯(lián)合依達拉奉治療急性腦梗死患者對血清MDA水平和SOD活力的影響

劉運平 曹妍 王慧娟 趙現(xiàn) 劉冰 闞敏辰 李軍濤

研究表明，急性期腦梗死患者產生腦細胞損傷甚至死亡，是由于能量代謝障礙刺激興奮性神經遞質釋放，產生自由基反應，導致鈣過量內流等一系列損傷級聯(lián)反應引起的［1］。丙二醛(MDA)是脂質氧化的最終產物，可以影響線粒體呼吸鏈復合物及線粒體內關鍵酶的活性［2］。超氧化物歧化酶(SOD)可以減少體內氧化自由基對細胞組織的損傷［3］。何建明等［4］研究發(fā)現(xiàn)，急性期腦梗死患者MDA水平逐漸升高，SOD水平明顯降低，說明二者參與了急性期腦梗死血管損傷過程。急性腦梗死患者缺血區(qū)域因ATP生成不足導致腦細胞功能障礙甚至死亡，同時線粒體具有調節(jié)鈣濃度和該信號、自由基產生和清除、細胞凋亡的作用，因此維持線粒體功能及能量代謝是減少神經功能損傷的重要治療途徑［5］。本研究對急性期腦梗死患者應用丁苯酞氯化鈉聯(lián)合依達拉奉進行治療，采用比色法觀察患者血清中MDA水平和SOD活力，探討上述藥物對急性期腦梗死患者的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年2月至2015年2月在我院住院治療的72 h內的急性期腦梗死患者160例，均符合“2010中國急性缺血性腦卒中診治指南”［6］相關標準，其中男104例，女56例;年齡45～76歲，平均年齡(62±13)歲;體重52～84 kg，平均體重(66±15)kg;病程1 ～74 h，平均病程(2.6 ±1.3)h;合并高血壓54例，2型糖尿病30例，高脂血癥28例;不良生活習慣:吸煙24例，飲酒16例;既往腦梗死病史22例;臨床表現(xiàn):肢體癱瘓46例，發(fā)作性頭暈32例，發(fā)作性肢體無力26例，肢體麻木24例，語言障礙20例，共濟失調12例;梗死部位:基底核40例、額葉35例、顳葉31例、枕葉28例、頂葉26例;梗死灶大小:中梗死57例，小梗死52例，腔隙性梗死51例。160例隨機分為對照組、丁苯酞組、依達拉奉組和聯(lián)合組，每組40例。本研究經過醫(yī)院醫(yī)學臨床研究倫理委員會審查批準。4組性別比、平均年齡、體重、病程、合并疾病、既往腦梗死病史、臨床表現(xiàn)、梗死部位和梗死灶大小比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。見表1。

表1 4組一般資料比較 n=40

1.2 納入與排除標準

1.2.1 納入標準:①經影像學檢查確診;②患者發(fā)病72 h以內;③患者意識清楚，能夠配合檢查和(或)治療;④患者年齡＜80歲;⑤符合“2010中國急性缺血性腦卒中診治指南”相關診斷標準;⑥患者和(或)家屬知情同意，簽署知情同意書。

1.2.2 排除標準:①嚴重肝腎功能不全者;②有出血傾向疾病患者;③顱內出血、感染、腫瘤患者;④昏迷患者;⑤精神疾患，如精神分裂癥、癡呆等認知功能障礙者;⑥病竇綜合征、冠脈綜合征、嚴重心律失?；颊?⑦對治療藥物過敏者;⑧存在溝通障礙的疾病，如先天性耳聾、失明等;⑨孕產婦。

1.3 方法 (1)對照組:應用阿司匹林100 mg/d，口服;胞二磷膽堿1.0 g和奧扎格雷鈉注射液80 mg，分別加入5%葡萄糖注射液或0.9%氯化鈉溶液250 ml中靜脈滴注，1次/d，連續(xù)治療14 d。(2)丁苯酞組:在對照組治療的基礎上加用丁苯酞氯化鈉100 ml靜脈滴注，2次/d，14 d為1個療程。(3)依達拉奉組:在對照組治療的基礎上加用依達拉奉(南京先聲東元制藥有限公司)30 mg加入0.9%氯化鈉溶液100 ml靜脈滴注，2次/d，連用14 d。(4)聯(lián)合組:在丁苯酞組治療的基礎上加用依達拉奉30 mg加入0.9%氯化鈉溶液100 ml靜脈滴注，2次/d，連用14 d。4組患者均常規(guī)應用調血脂藥及神經營養(yǎng)藥物，根據(jù)實際病情應用脫水劑、降壓藥。每天進行45 min的康復訓練，均14 d為1個療程。

1.4 觀察指標 觀察患者入院1、7、14 d時MDA水平和SOD活性。4組患者均抽取靜息狀態(tài)下，清晨空腹周靜脈血5 ml。儀器:15 ml錐形離心管，1.5 ml離心管，細胞刮脫棒，超聲儀，臺式離心機，恒溫水槽，酶標板，酶標儀。

1.4.1 MDA水平檢測:采用血清MDA濃度比色法定量檢測試劑盒(上海杰美基因醫(yī)藥科技有限公司)，血液室溫靜置30 min，至血液凝結，放入4℃微型臺式離心機離心5 000 r/min，15 min，取上層黃色液體至1.5 ml離心管，即刻置于冰槽備用或放于－70℃冰箱保存。取10 μl進行蛋白定量測定，10個15 ml離心管，做好標記，移取緩沖液，加入抗干擾液、補充液，用槍頭混勻，分別加入反應工作液，蓋上蓋子，上下傾倒數(shù)次混勻，放入60℃恒溫水槽，孵育60 min，放入冰槽冷卻 2 min，放入 4℃微型臺式離心機離心，13 000 r/min，離心5 min，分別取 250 μl上清液至 96孔酶標板，放入酶標儀檢測，根據(jù)說明書計算樣品濃度。

1.4.2 SDO活力檢測:采用GENMED SOD活性檢測試劑盒(上海杰美基因醫(yī)藥科技有限公司)，通過比色測定高度可溶性四唑鹽在超氧化物陰離子還原作用下產生的水溶性加臜染料，定量分析黃嘌呤氧化物酶的還原效率，從而檢測SOD水平。操作步驟嚴格按照說明書進行。

1.5 統(tǒng)計學分析 應用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件，計量資料以表示，組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用q檢驗，組內比較采用重復測量方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 4組血清MDA水平比較 4組患者入院1 d時MDA水平比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。入院7、14 d時丁苯酞組、依達拉奉組和聯(lián)合組MDA水平明顯低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。聯(lián)合組入院7、14 d MDA水平明顯低于丁苯酞組和依達拉奉組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。丁苯酞組入院7、14 d時MDA水平與依達拉奉組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。對照組入院14 d時MDA水平與入院1 d比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。丁苯酞組、依達拉奉組和聯(lián)合組治療7、14 d時MDA水平明顯低于入院1 d，入院14 d時明顯低于入院7 d，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。見表2。

表2 4組血清MDA水平比較n=40，nmol/ml，±s

表2 4組血清MDA水平比較n=40，nmol/ml，±s

注:與對照組比較，*P ＜0.05;與丁苯酞組比較，#P ＜0.05;與依達拉奉組比較，△P ＜0.05;與入院1 d比較，☆P ＜0.05;與入院7 d比較，▲P ＜0.05

時間 對照組 丁苯酞組 依達拉奉組 聯(lián)合組入院1 d 6.4 ±0.8 6.5 ±0.7 6.4 ±1.0 6.5 ±0.9入院7 d 6.0 ±0.5 5.3 ±0.4＊☆ 5.2 ±0.5＊☆ 4.5 ±0.4*#△☆入院 14 d 5.6 ±0.6☆ 4.6 ±0.5＊☆▲ 4.5 ±0.4＊☆▲ 3.8 ±0.7*#△☆▲

2.2 4組血清SOD活性比較 4組入院1 d時SOD活性比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，入院7、14 d時MOD活性丁苯酞組、依達拉奉組和聯(lián)合組明顯高于對照組(P＜0.05)，聯(lián)合組入院7、14 d時MOD活性顯著高于丁苯酞組和依達拉奉組(P＜0.05)，而丁苯酞組和依達拉奉組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。對照組入院7 d時MOD水平與入院1 d時比較顯著降低(P＜0.05)，而入院14 d時恢復到入院1 d時的水平。丁苯酞組、依達拉奉組入院7 d時SOD活性與入院1 d相當(P＞0.05)，而聯(lián)合組呈升高趨勢(P＜0.05)。入院14 d時丁苯酞組、依達拉奉組、聯(lián)合組SOD水平顯著高于入院1、7 d(P＜0.05)。見表3。

表3 4組血清MDA水平比較n=40，U/ml，±s

表3 4組血清MDA水平比較n=40，U/ml，±s

注:與對照組比較，*P ＜0.05;與丁苯酞組比較，#P ＜0.05;與依達拉奉組比較，△P ＜0.05;與入院1 d比較，☆P ＜0.05;與入院7 d比較，▲P ＜0.05

時間 對照組 丁苯酞組 依達拉奉組 聯(lián)合組入院1 d 85±1284±13 82±14 84±11入院7 d 76±10☆ 84±11* 83±12* 95±14*#△☆入院 14 d 83±11▲ 90±11＊☆▲ 91±13＊☆▲ 102±13*#△☆▲

3 討論

急性腦梗死病情與能量障礙、興奮性氨基酸毒性、梗死周圍去極化及炎癥和程序性細胞凋亡有關，上述病理機制，相互重疊，相互影響，形成惡性循環(huán)后導致病情進一步惡化。因此在急性期腦梗死患者，應盡早保護缺血區(qū)域微血管的完整性、減少缺血性再灌注損傷，促進側支循環(huán)的建立和微血管的新生，同時進行腦保護，應挽救缺血半暗帶，保護神經元，盡可能的減小梗死面積［6］。保護線粒體結構和功能的完整，維持能量供應，增強半暗帶區(qū)域細胞對缺氧條件的耐受力，可以保證腦細胞的存活。

研究表明，MDA和SOD參與了急性期腦梗死的發(fā)生發(fā)展，且二者呈負相關，同時發(fā)現(xiàn)MDA水平和SOD活性與梗死灶的面積有關［7］。急性期腦梗死患者由于缺血缺氧，導致線粒體損傷，ATP產生減少，造成細胞功能障礙(神經信號傳導障礙、營養(yǎng)神經功能障礙和修復、吞噬功能障礙)，自由基產生增多，細胞膜發(fā)生損傷，同時細胞色素C釋放導致Cospose激活，從而導致神經細胞凋亡。丁苯酞為消旋-3-正丁基苯酞，結構與天然的1-3-正丁基苯酞相同。研究表明:丁苯酞具有重構微循環(huán)和保護線粒體的雙重作用，可以保護血管結構完整，恢復血管管徑、增加缺血半暗帶區(qū)域血流量，促進側支循環(huán)開放，同時還能夠提高線粒體酶的活性，維持線粒體膜的穩(wěn)定性，保護線粒體的結構和功能從而增加缺血半暗帶和梗死區(qū)域血流灌注，維持能量代謝減少神經細胞凋亡［8，9］。Li等［10］研究發(fā)現(xiàn)，丁苯酞具有減少血管內皮細胞線粒體活性氧的生成、細胞損傷和減輕細胞形態(tài)改變的作用。依達拉奉在體內以依達拉奉陰離子(多帶有1個電子的負電荷)的形態(tài)存在，與腦缺血再灌注時缺血灶內產生的羥自由基等自由基發(fā)生反應。此間，依達拉奉將帶有的1個電子提供給自由基一側而達到清除自由基并使其無害的目的［11］。鄭慧芬等［12］通過對33例急性腦梗死患者應用依達拉奉進行治療發(fā)現(xiàn)，其可以降低急性腦梗死患者MDA水平，提高SOD活性，并能顯著改善患者神經缺損功能和日常生活能力。本研究發(fā)現(xiàn)急性期腦梗死患者應用丁苯酞氯化鈉聯(lián)合依達拉奉進行治療，可以顯著提高血清SOD活性，降低MDA水平。

綜上所述，丁苯酞氯化鈉聯(lián)合依達拉奉治療急性腦梗死，可以顯著降低血清MDA水平，提高SOD活性，對減少腦細胞損傷，維持腦細胞活性和正常功能，清除氧化自由基和有害物質有重要作用。

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11 曾建.依達拉奉/環(huán)湖精超分子體研究.南京師范大學，2011.

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