百合更年安顆粒長期毒性研究

北京中研同仁堂醫(yī)藥研發(fā)有限公司 中藥復(fù)方新藥開發(fā)國家工程研究中心（100079）翟建英 楊海潤 張思玉 朱曉光 陳會(huì)叢

北京同仁堂科技發(fā)展股份有限公司（100079）李晉生△

百合更年安顆粒是同仁堂的經(jīng)驗(yàn)方[1]，由百合、枸杞子、阿膠珠、南沙參、牡蠣、鉤藤、蓮子心、遠(yuǎn)志、浮小麥、陳皮組成，具有滋養(yǎng)肝腎、寧心安神的功效，臨床多用于更年期綜合癥，陰虛肝旺型，癥見烘熱汗出，頭暈耳鳴，失眠多夢(mèng)，五心煩熱，腰背酸痛，大便干燥，心煩易怒等癥，療效肯定。為給臨床用藥提供安全依據(jù)，本文從安全性角度對(duì)百合更年安顆粒進(jìn)行了大鼠180天給藥長期毒性研究，報(bào)告如下。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 受試物 百合更年安顆粒干膏粉，批號(hào)1111567，北京同仁堂科技發(fā)展股份有限公司提供。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物 SD大鼠，SPF級(jí)，雌雄各半，體重100～110g；動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK（京）2006—0008, 由北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)部提供。

1.3 儀器 CD3700全自動(dòng)血球計(jì)錄儀（美國）；XL-300全自動(dòng)生化分析儀（德國）；EasyLyte PLUS型 鈉/鉀/氯分析儀（美國）；德國科寶100型尿液檢測(cè)儀（德國）；LG-PABER-I型血小板聚集凝血因子分析儀（中國）；OLYMPUS BH-2型顯微鏡及圖像分析系統(tǒng)（日本）。

1.4 試劑 血液生化試劑盒：測(cè)定所用12項(xiàng)試劑盒（尿素氮（BUN）、葡萄糖（GLU）、總膽固醇（T-CHO）、總膽紅素（T-Bil）、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、堿性磷酸酶（ALP）、）天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶（AST）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶（ALT）、肌酐（Crea）、甘油三脂（TG））均購自中生北控生物科技股份有限公司生產(chǎn)。血球稀釋液、溶血?jiǎng)?、鞘液、血球清洗液、酶清洗液：雅培生產(chǎn)。尿十一項(xiàng)試紙條：德國科寶公司生產(chǎn)。凝血酶和凝血酶原試劑：購自北京中勤世帝科學(xué)儀器有限公司。

2 方法

2.1 大鼠長期毒性試驗(yàn)[3][4][5][6]100～110g SPF級(jí)SD大鼠160只，雌雄各半，適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后隨機(jī)分為4組，每組40只，雌雄各半，試驗(yàn)分為空白對(duì)照組和百合更年安顆粒高（35.784生藥/kg/日）、中（17.892 g生藥/kg/日）、低（8.946 g生藥/kg/日）劑量組，分別相當(dāng)于成人臨床日用量的57、28.5、14倍。高、中、低3個(gè)劑量組，大鼠按每100g體重1.5ml的體積灌胃給藥，對(duì)照組灌胃給予等體積蒸餾水。每日上午9∶00～11∶00灌胃一次，間隔4h后第二次給藥，每周給藥6天，周日停藥1天。連續(xù)灌胃給藥26周，停藥恢復(fù)4周。每日觀察動(dòng)物的外觀體征、精神狀態(tài)、行為活動(dòng)、腺體分泌、呼吸、飲水和二便、毛發(fā)等情況；每周稱體重1次，計(jì)算飼料消耗量、計(jì)算體重增長值及進(jìn)食量（進(jìn)食量100g/只/天），并根據(jù)體重調(diào)整給藥量。分別于給藥后13周、給藥后26周和停藥4周，各給藥組分別取動(dòng)物10只（13周）、20只（26周）和各組剩余動(dòng)物10只（停藥4周），對(duì)動(dòng)物一般行為、體重增長、食量消耗、血液學(xué)、血液生化檢查、尿常規(guī)檢查、系統(tǒng)解剖及組織病理學(xué)進(jìn)行檢測(cè)。

3 結(jié)果

3.1 對(duì)大鼠一般狀況、體重及攝食量的影響 百合更年安顆粒高、中、低劑量組連續(xù)灌胃給藥26周及恢復(fù)4周期間，各組動(dòng)物一般狀況良好，未見動(dòng)物死亡。皮毛光澤，一般活動(dòng)以及二便均未見異常，口、鼻、眼無異常分泌物，未見呼吸困難等異常改變，動(dòng)物未見惡心、嘔吐等胃腸道反應(yīng)。各給藥組體重變化與空白對(duì)照組比較偶有差異，但無量效和時(shí)效關(guān)系。

3.2 對(duì)大鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響 雌鼠給藥13周時(shí)，中劑量組HGB與空白對(duì)照組比較顯著降低（P<0.05），給藥26周及停藥4周后與空白對(duì)照組比較無顯著差異。余未見異常。

雄鼠給藥26周時(shí)，大劑量組MPV與空白對(duì)照組比較，顯著降低（P<0.01），給藥13周及停藥4周后與空白對(duì)照組比較無顯著差異。其余指標(biāo)與對(duì)照組比較無明顯差異。（實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)備查）

3.3 對(duì)大鼠凝血時(shí)間的影響 同空白對(duì)照組比較，給藥26周時(shí)，雌鼠中、低劑量組PT顯著降低（P<0.05），APTT顯著增高（P<0.01）。30周時(shí)各給藥組與空白對(duì)照組比較未見明顯差異。

同空白對(duì)照組比較，30周時(shí)，雄鼠高、中、低劑量組PT顯著降低（P<0.01），余未見異常。（試驗(yàn)數(shù)據(jù)備查）

3.4 對(duì)大鼠血液生化學(xué)指標(biāo)的影響 雌鼠：給藥13周時(shí)，同空白對(duì)照組比較，高、低劑量組GLU顯著升高（P<0.01）；給藥26 周時(shí)，中劑量與低劑量組G L U升高，與空白對(duì)照組比較有顯著差異（P<0.05），停藥4周后，各組GLU與空白對(duì)照組比較無明顯差異。其余指標(biāo)，與空白對(duì)照組比較未見異常。

雄鼠：給藥13周時(shí)，各給藥組AST同空白對(duì)照組比較均顯著降低（P<0.05），高劑量組CK顯著升高（P<0.05），其他各項(xiàng)指標(biāo)與對(duì)照組比較無顯著差異。給藥26周時(shí)，中劑量組CHO、低劑量組CK顯著降低，與空白對(duì)照組比較均有顯著差異（均P<0.01），高、中、低劑量組TP與空白對(duì)照組比較降低（P<0.05，P<0.01，P<0.01）。停藥4周后，高、低劑量組CRE與空白對(duì)照組比較有顯著降低（P<0.05，P<0.01），中低劑量組Cl-、Na+顯著升高，與空白對(duì)照組比較有顯著差異。其余各項(xiàng)指標(biāo)各給藥組與空白對(duì)照組比較未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。（實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)備查）

對(duì)高校教師來說，最重要的便是職稱的評(píng)定。但現(xiàn)階段民辦高校和公辦高校一樣，都是根據(jù)科研、課題、教材編寫和獲獎(jiǎng)情況來作為對(duì)教師評(píng)價(jià)的標(biāo)準(zhǔn)。但對(duì)教學(xué)質(zhì)量這一部分并沒有一個(gè)嚴(yán)格的評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)，僅是在課時(shí)量上有一點(diǎn)限制。這樣的現(xiàn)狀造成了高校教師在向“雙師型”教師轉(zhuǎn)型的過程中沒有積極性和動(dòng)力，認(rèn)為即使變成“雙師型”教師依然沒有任何優(yōu)勢(shì)。即使學(xué)校為其創(chuàng)造了去企業(yè)實(shí)習(xí)實(shí)訓(xùn)的機(jī)會(huì)和環(huán)境，部分教師依然表現(xiàn)出消極態(tài)度，認(rèn)為是浪費(fèi)時(shí)間。這樣的錯(cuò)誤觀念導(dǎo)致了現(xiàn)如今高校教師轉(zhuǎn)型困難，內(nèi)在動(dòng)力不足。

這些指標(biāo)數(shù)值的的變化未見到與藥物相關(guān)的規(guī)律性的變化，數(shù)值在正常范圍內(nèi)波動(dòng)，數(shù)值的升高或者降低僅僅有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，沒有生物學(xué)意義。結(jié)果提示，大鼠灌胃給予百合更年安顆粒丸連續(xù)26周和停藥4周對(duì)血液生化各項(xiàng)指標(biāo)沒有明顯的影響。

3.5 大鼠系統(tǒng)解剖檢查結(jié)果 百合更年安顆粒三個(gè)劑量組給藥13周、26周以及停藥4周，各組動(dòng)物的體表檢查未見明顯異常，各臟器外觀完整、色澤正常；臟器大小、形狀、外表切面、質(zhì)地均未見明顯異常，未見水腫、淤血和壞死等改變，腹腔、胸腔未見滲液和粘連，臟器組織未見明顯的肉眼可見的病理變化。

3.6 對(duì)大鼠臟器指數(shù)的影響 雌鼠，給藥13周時(shí)，中劑量組子宮顯著升高，與空白對(duì)照組比較有明顯差異（P<0.05）。給藥26周時(shí)，高、中、低劑量組肺臟與空白對(duì)照組比較顯著降低（P<0.05，P<0.01，P<0.01）。停藥4周時(shí)，高劑量組心臟顯著增大，與空白對(duì)照組比較有明顯差異（P<0.01）；高、中、低劑量組肺臟顯著降低，與空白對(duì)照組比較有明顯差異（P<0.01，P<0.01，P<0.05）。其余各組臟器系數(shù)與空白對(duì)照組比較未見明顯差異。

雄鼠，給藥13周時(shí)，同空白對(duì)照組比較，高劑量組腦顯著增大（P<0.01），高、低劑量組腎顯著增大（P<0.01，P<0.05），高劑量組腎上腺顯著增大（P<0.05）。給藥26周時(shí)，與空白對(duì)照組比較，各給藥組肺臟系數(shù)顯著降低（P<0.01，P<0.05，P<0.01），低劑量組腎上腺顯著降低（P<0.05）。停藥4周時(shí)，與空白對(duì)照組比較，中低劑量組肺臟系數(shù)顯著降低（P<0.05，P<0.01）；高劑量組腎上腺顯著增大（P<0.05）。（實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)備查）

結(jié)果表明，各臟器系數(shù)未發(fā)現(xiàn)規(guī)律性變化，大體解剖未見明顯異常，考慮這些變化可能與動(dòng)物體重差異有關(guān)，僅有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，無生物學(xué)意義。

3.8 病理學(xué)檢測(cè) 連續(xù)給藥13周、26周及停藥4周時(shí)，剖檢觀察及病理學(xué)鏡檢未見毒副作用引起的病理組織學(xué)改變。百合更年安顆粒對(duì)大鼠經(jīng)口給藥13周、26周及停藥4周后，高劑量組動(dòng)物的各臟器組織未見與受試藥毒性有關(guān)的病變。

4 討論及結(jié)論

百合更年安顆粒應(yīng)用于更年期綜合癥療效確切，基礎(chǔ)研究表明本藥對(duì)垂體-卵巢軸具有興奮作用，并有調(diào)節(jié)生殖內(nèi)分泌系統(tǒng)和改善人體性腺功能[7]，抗交感神經(jīng)興奮的作用[2]。其安全性研究報(bào)道較少。

本研究結(jié)果顯示，連續(xù)給予百合更年安顆粒丸26周后，實(shí)驗(yàn)期間各組動(dòng)物均未出現(xiàn)死亡，同空白對(duì)照組比較3個(gè)劑量組動(dòng)物的一般狀況、活動(dòng)、行為、飲食、二便等均無明顯異常。給藥26周時(shí)，大劑量MPV，與空白對(duì)照組比較顯著下降，但血小板未見異常，骨髓細(xì)胞檢查也未見明顯異常，其意義有待進(jìn)一步研究。給藥26周時(shí)，雌鼠中低劑量組PT下降與APTT升高，提示可能對(duì)內(nèi)外源性凝血有影響，改變?cè)诨謴?fù)期恢復(fù)。雄鼠恢復(fù)期PT下降，但量效關(guān)系不明顯，其意義有待進(jìn)一步研究。雌鼠高低劑量組GLU在給藥13周時(shí)升高，26周時(shí)中低劑量組GLU升高，高劑量組與空白對(duì)照組比較未見差異，量效時(shí)效關(guān)系不明顯，恢復(fù)期后各組GLU與空白對(duì)照組比較無明顯差異，提示藥物可能對(duì)血糖有一定影響，但病理檢查未見對(duì)胰臟有明顯影響，其意義有待進(jìn)一步研究。其余血清生化學(xué)指標(biāo)均在正常值范圍波動(dòng)，無量效和時(shí)效關(guān)系，未見與藥物相關(guān)的規(guī)律性變化。給藥13周時(shí)，中劑量組子宮指數(shù)增高，但高低劑量組，以及給藥26周及停藥后未見明顯異常。因此，認(rèn)為各時(shí)期各項(xiàng)指標(biāo)的變動(dòng)應(yīng)屬于動(dòng)物的個(gè)體改變，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義無生理學(xué)意義，故無明確毒理學(xué)意義。

綜上所述，百合更年安顆粒丸以35.784、17.892、8.946g生藥/kg/日的劑量（相當(dāng)于人日用劑量的57、28.5、14倍）給大鼠連續(xù)灌胃給藥26周，未見明顯的毒副作用。停藥觀察4周，未發(fā)現(xiàn)對(duì)大鼠產(chǎn)生明顯的遲發(fā)性毒性反應(yīng)，故認(rèn)為百合更年安顆粒在臨床劑量范圍內(nèi)服用安全性較高。