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    腦出血后缺氧誘導因子-1α及熱休克蛋白70作用機制的研究

    2015-04-02 21:23:06范賢敏羅永杰
    實用醫(yī)院臨床雜志 2015年3期
    關鍵詞:腦損傷腦組織血腫

    范賢敏,羅永杰

    (1.瀘州醫(yī)學院,四川 瀘州 646000;2.四川省醫(yī)學科學院·四川省人民醫(yī)院,四川 成都 610072)

    腦出血后缺氧誘導因子-1α及熱休克蛋白70作用機制的研究

    范賢敏1,羅永杰2△

    (1.瀘州醫(yī)學院,四川 瀘州 646000;2.四川省醫(yī)學科學院·四川省人民醫(yī)院,四川 成都 610072)

    缺氧誘導因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)是缺氧誘導基因轉錄的關鍵環(huán)節(jié),并且是缺氧誘導基因轉錄過程中缺氧信息傳遞的共同通路;而熱休克蛋白70(Hsp70)具有調控細胞凋亡和參與應激等多種生物學功能,在缺氧性腦血管病的病理生理過程中起著重要的作用。目前國內外研究發(fā)現(xiàn)HIF-1α、Hsp70與腦出血后腦組織的保護及損傷有密切聯(lián)系。本文就HIF-1α、Hsp70的生物學特點,在腦出血后腦組織中的表達及作用機制等方面作一綜述。

    缺氧誘導因子-1α;熱休克蛋白70;腦出血

    最近發(fā)布的全球疾病負擔研究(GBD2010)顯示腦卒中是全球第二大死因,是造成過早死亡和殘疾的第三大主要原因,在神經(jīng)系統(tǒng)疾病和腦血管疾病總的疾病負擔分類中出血性卒中比例高達35.7%[1,2]。腦出血(intracerebral hemorrhage,ICH)發(fā)病后的作用機制及治療一直都是醫(yī)學界研究的熱點,本文就缺氧誘導因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)、熱休克蛋白70(Hsp70)在ICH后的作用機制研究做一綜述。

    1 HIF-1α及Hsp70的分子結構及功能

    1.1 HIF-1α的分子結構及功能 HIF-1屬于DNA結合蛋白,是一種由細胞內低氧環(huán)境所誘導表達的轉錄激活因子,主要由HIF-1α和HIF-1β兩個亞基以異二聚體復合物的形式存在。α亞基位于胞漿中,其分子大小為120 kD,受細胞內氧濃度調節(jié),其濃度水平隨著低氧水平的增加而呈指數(shù)上升。位于細胞核中的β亞基的分子大小為91~94 kD,不受氧濃度的調節(jié),因此其表達相對穩(wěn)定。其中α亞基包含有兩個重要的結構域:①氧依賴降解結構域,主要調節(jié) HIF-1 的穩(wěn)定性;②C 末端轉錄激活結構域和內在激活結構域,則主要調節(jié) HIF-1的轉錄活性。然而β亞基的作用尚不清楚,目前多數(shù)認為可能與促進 HIF-1α的磷酸化,維持其穩(wěn)定性以及二聚體化后引起的活性構象改變有關[3]。故HIF-1α是HIF-1 的調節(jié)亞基和活性亞基,在缺氧誘導下HIF-1 的作用主要體現(xiàn)在 HIF-1α亞基的調節(jié)上,并可根據(jù)氧濃度水平而動態(tài)表達,可與許多靶基因的缺氧反應元件結合,在缺氧誘導的基因表達中起關鍵作用。

    1.2 Hsp70的分子結構及功能 Hsp是一個龐大的糖蛋白超基因家族,具有分子伴侶、調控細胞凋亡周期和參與應激等廣泛的生物學功能,對缺血性損傷有保護作用[4]。根據(jù)相對分子質量大小、抗原性的差異和產(chǎn)物的同源性,通常將哺乳動物HsPs家族分為6類:Hsp100、Hsp90、Hsp70、Hsp60、Hsp40以及相對小分子質量 HsPs(15~30 kU)[5]。其中Hsp70是一種在缺氧缺血等腦損傷后產(chǎn)生的應激蛋白,在應激條件下合成最為迅速,具有高度保守性,是各種腦損傷的敏感標志物[6]。Hsp70作為應激保護蛋白,除了發(fā)揮其分子伴侶作用抑制蛋白激酶的激活,還可抑制神經(jīng)細胞的凋亡,從而起到腦保護作用。Hsp70可能通過多種方式對節(jié)細胞凋亡:一是Hsp70能干擾應激所啟動的凋亡程序;另外升高的Hsp70水平可能通過對變性細胞的凋亡抑制蛋白Bcl-2加以修復或防止其被降解,下調有關細胞凋亡的基因、蛋白和蛋白酶活性,抑制細胞凋亡,從而增強受損細胞抗凋亡能力[7],也可通過抑制JNK /BIM 途徑來抑制 Bax 的激活,從而發(fā)揮抗凋亡作用[8]。

    2 HIF-1α、Hsp70的動態(tài)表達及機制

    2.1 HIF-1α表達的動態(tài)變化及機制 有動物實驗研究表明,HIF-1α在正常腦組織中基本不表達,小鼠腦出血成功造模4 h后,出血灶周圍腦組織HIF-1α蛋白表達就開始出現(xiàn),并逐漸增多,1~2 d 達到高峰,7 d后又下降至第1天水平以下[9]。國內臨床研究結果證實此觀點,患者在腦出血后 4 h 血腫周圍腦組織可見散在 HIF-1α表達,1~2 d 達到高峰,2~3 d仍繼續(xù)保持高表達狀態(tài)并維持到第7 d,從第7 d開始逐漸衰減,但在21 d時血腫周邊腦組織中尚可見到HIF-1α蛋白的表達[10]。由于HIF-1α是一種參與調節(jié)氧穩(wěn)態(tài)的對低氧敏感的核轉錄因子,并且在腦出血后不同時期呈動態(tài)表達,其表達機制目前認為主要有以下幾種:①細胞內缺氧是 HIF-1 α 表達最主要的誘導調節(jié)因子,其表達增強的機制可能與細胞線粒體在低氧狀態(tài)下產(chǎn)生大量的活性氧基以及與腦組織缺血/再灌注后產(chǎn)生的羥基有關[11],它們能 HIF-1α免于被迅速降解。②國內研究卻發(fā)現(xiàn)缺氧并不是誘導HIF-1α表達增加的唯一機制,有研究發(fā)現(xiàn)腦出血早期在血腫周邊腦組織中HIF-1α蛋白表達的陽性率較低,隨著病程的延長HIF-1α表達逐漸增加,分別將凝血酶及紅細胞注入腦組織后,HIF-1α表達均能升高,說明血腫內的凝血酶、血紅蛋白等血液成分也可促進 HIF-1α的表達上調[12]。③隨著出血時間的延長,血腫周圍腦組織水腫及血腫中破碎的紅細胞以及逐漸釋放出來的IL-1β、TNF-α等炎性介質亦可通過其他信號途徑上調HIF-1α的表達[13]。

    2.2 Hsp70表達的動態(tài)變化及機制 正常情況下Hsp70在細胞內有穩(wěn)定的表達,但降解迅速,所以正常腦組織 Hsp70 蛋白質的含量極少[14]。但在腦出血等急性應激狀態(tài)下,當其他蛋白質合成受到抑制時,Hsp70 的表達反而增加,它能夠保護大腦防止各種應激刺激,使細胞對損害的耐受能力增強[15]。在我們前期的實驗中觀察到在腦出血后6 h時Hsp70開始在血腫周圍組織中表達,隨著出血時間的延長,其表達逐漸增加,在3 d時達高峰并在7 d時表達明顯減少。在缺氧可顯著上調HIF-1α表達的理論基礎上,有學者通過使用HepG2細胞進行研究探討,實驗采用HIF-1α抑制劑YC-1抑制HIF-1α的表達,結果顯示隨著YC-1濃度的增加,HIF-1α表達明顯受到抑制,Hsp70-2表達隨之減弱。實驗還從另一角度設計合成針對HIF-1α表達的特異小干擾RNA(siRNA),用以轉染HepG2細胞,結果同樣顯示在HIF-1α siRNA顯著降低HIF-1α表達的同時Hsp70-2表達減少[16]。根據(jù)實驗結果,我們可以得出在HepG2細胞HIF-1α是促進Hsp70表達的誘導劑,但是在缺血缺氧性腦病中這種誘導關系仍待驗證。

    3 HIF-1α、Hsp70在腦出血后的作用機制

    腦出血后腦組織損傷包括原發(fā)性和繼發(fā)性兩個方面,原發(fā)性腦損傷主要是指血腫直接對腦組織造成機械性的壓迫損傷。由于顱內血腫引起局部循環(huán)障礙,造成的血腫周邊腦組織缺血缺氧、炎性反應及補體介導的免疫損傷、血紅蛋白及其降解產(chǎn)物的毒性反應及機體的應激反應,上述損傷因素之間相互作用,共同參與導致繼發(fā)腦損傷[17,18]。

    3.1 HIF-1α的作用機制 腦出血后血腫周圍組織由于缺血缺氧、腦水腫的形成和血液成分及炎性物質的釋放等因素誘導腦細胞HIF-1α的表達。HIF-1α能介導相關靶基因的表達調控,從而在出血性腦損傷中發(fā)揮重要作用。HIF-1α及相關靶基因可能通過多種機制對腦組織發(fā)揮保護作用:①促進血管生成和神經(jīng)再生:血腫周圍腦組織在低氧條件下HIF-1α表達的增多,進而誘導血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及其受體表達增加,當血管內皮細胞和神經(jīng)干細胞中的VEGF被激活后,可促進血管內皮細胞增殖以及神經(jīng)干細胞分化、移行,從而促進血管生成和神經(jīng)細胞再生,恢復出血灶周邊缺血缺氧組織的血供和氧供[19]。②提高攜氧能力:缺氧時HIF-1α表達可誘導促紅細胞生成素(Erythropoietin,EPO)以及促紅細胞生成素受體(Erythropoietin receptor,EPOR)等調節(jié)氧運輸基因的表達增加,從而促進紅細胞生成,提高其攜氧能力,增加缺血區(qū)域的氧運輸,降低神經(jīng)細胞的缺氧敏感性,增強神經(jīng)細胞的存活能力,發(fā)揮神經(jīng)保護作用[20]。③抑制細胞凋亡:在HIF-1α的調節(jié)下VEGF轉錄表達并與受體結合,進而激活 PI-3K/AKT信號途徑,降低半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)活性,并活化 NF-κB,同時抑制 p53 的活化,促進多種生長因子的表達[21]。由此可見,HIF-1α主要是通過誘導靶基因的表達以及調控細胞凋亡途徑來實現(xiàn)腦的保護作用。

    3.2 Hsp70的作用機制 Hsp70作為一種內源性保護因子,在腦卒中進程中發(fā)揮保護作用,關于Hsp70保護作用機制目前已有較多的研究,總結起來主要有以下4種:①抗氧化應激作用:Hsp70可提高超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)等抗氧化酶的活性,可能在轉錄水平或通過轉錄后的修飾調節(jié)SOD的表達,加快氧自由基的清除,增強細胞的抗氧化應激能力;②抗炎及免疫增強作用:近來許多研究表明,炎癥在缺血性腦損傷的發(fā)生和發(fā)展中起了重要作用;③分子伴侶作用:當細胞在應激源刺激下產(chǎn)生大量未折疊、錯折疊的蛋白質時,Hsp70的分子伴侶作用可幫助需要折疊的蛋白質正確折疊,維持細胞的正常生理功能,實現(xiàn)對腦細胞的保護;④抑制細胞凋亡作用:Hsp70 能干擾應激所啟動的凋亡程序;另外升高的Hsp70水平可能通過下調有關細胞凋亡的基因、蛋白和蛋白酶活性,抑制細胞凋亡,從而增強受損細胞抗凋亡能力,故Hsp70也被視為一種抗凋亡蛋白。上述Hsp70在腦出血后缺血缺氧的應激狀態(tài)下可發(fā)揮神經(jīng)保護作用。因此給予適當預刺激從而誘導Hsp70的表達,增強腦細胞對缺血缺氧等損害的耐受力,這可能成為減輕腦血管疾病后繼發(fā)性腦損傷的新方法。

    4 展望

    由于腦組織對缺血缺氧十分敏感,而機體的缺氧應答反應涉及缺氧反應基因表達、調控、轉錄因子激活、細胞因子及眾多信號通路的參與,其中HIF-1α在缺氧應答中處于關鍵核心位置。HIF-1α對于缺血缺氧性腦損傷的治療研究還僅限于動物實驗。目前關于HIF-1α在腦出血中表達上調的機制尚不十分明確,并且HIF-1α下游基因的轉錄及其參與的低氧信號轉錄在發(fā)揮保護作用的同時,其所具有的損傷作用及相關風險尚未完全明確,仍需我們做更進一步的探索研究。

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    The research progress on the mechanism of HIF-1α and Hsp70 after intracerebral hemorrhage

    FAN Xian-min,LUO Yong-jie

    R743.34

    B

    1672-6170(2015)03-0187-03

    2015-01-07;

    2015-03-05)

    △通訊作者,碩士生導師

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