不同蛋白、能量水平對伊犁馬泌乳后期生化指標(biāo)及生殖激素的影響

漆雯雯，張 浩，楊 魁，鄧海峰，陳 勇＊

（1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，新疆烏魯木齊830052；2.伊犁職業(yè)技術(shù)學(xué)院動物科學(xué)系，新疆伊寧835000；3.伊犁州疾病控制與診斷中心，新疆伊寧835000；4.伊犁哈薩克自治州昭蘇馬場，新疆昭蘇835500）

伊犁馬產(chǎn)于新疆維吾爾自治區(qū)伊犁哈薩克自治州，是以哈薩克馬為基礎(chǔ)，與引入的輕型外種馬雜交、橫交固定，在長期放牧管理條件下育成的一個乘挽兼用型新品種，保持了哈薩克馬的耐寒、耐粗飼、抗病力強(qiáng)、適應(yīng)群牧條件的優(yōu)點［1］。長期以來，伊犁馬以放牧為主，飼養(yǎng)粗放。近年來，現(xiàn)代馬產(chǎn)業(yè)在我國逐步發(fā)展，對伊犁馬的飼養(yǎng)和管理也提出了新的要求。然而，與馬產(chǎn)業(yè)發(fā)展極不相適應(yīng)的是，有關(guān)伊犁馬的營養(yǎng)需要研究仍處于空白。靳偉星［2］研究表明，當(dāng)給泌乳期的伊犁馬飼喂不同粗蛋白／消化能的日糧后，對其產(chǎn)奶量和乳成分有顯著影響。在泌乳后期，母馬既擔(dān)負(fù)泌乳，同時又處于妊娠期，對營養(yǎng)的需要較其它時期有很大不同。本試驗以泌乳后期的伊犁馬為研究對象，旨在研究不同粗蛋白、消化能水平的日糧對伊犁馬泌乳后期血液生化指標(biāo)及生殖激素的影響，探討伊犁馬泌乳后期對粗蛋白和消化能的營養(yǎng)需要，為確定伊犁馬泌乳后期適宜日糧蛋白能量水平提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗設(shè)計與動物

選取年齡11～12周歲、體重410±30kg、胎次為4～5胎，處于第3泌乳月且已定胎的伊犁馬（乳用型）30匹，隨機(jī)分為6個試驗組，每個試驗組5匹馬。采用兩因子二次回歸正交旋轉(zhuǎn)組合設(shè)計［3］，以日糧粗蛋白和消化能為變量，研究不同日糧蛋白能量水平對伊犁馬泌乳后期血液生化指標(biāo)及生殖激素的影響。

1.2 飼糧配方與營養(yǎng)水平

根據(jù)NRC（2007）提供的成年體重為400kg泌乳馬的粗蛋白和消化能需要［4］，共設(shè)計6種日糧類型。日糧配方組成和營養(yǎng)水平見表1，精料補(bǔ)充料配方見表2。

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗馬采取分欄單獨飼養(yǎng)，并根據(jù)馬的采食、消化吸收特點，按照定時定量，少喂勤添，先粗后精的原則飼喂馬匹。每天飼精料補(bǔ)充料飼喂2次，分別在11∶30和20∶00各飼喂精料的二分之一；粗飼料飼喂4次，其中9∶30、13∶30和18∶00每次飼喂2kg，剩余粗料在凌晨02∶00飼喂，自由飲水。

表1 飼糧組成與營養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets（air－dry basis）

表2 精料補(bǔ)充料配方（風(fēng)干基礎(chǔ)）Table 2 Concentrate supplement formula（air－dried basis）

1.4 樣品采集

本試驗每期預(yù)試期為12d，正試期18d。共進(jìn)行兩期試驗，并在每期正試期結(jié)束后的第二天早上08∶00～09∶00時將馬匹固定，空腹，頸靜脈采血10mL。采血后迅速經(jīng)離心機(jī)3 500r／min離心10 min分離血漿并－20℃冷凍保存待測。

1.5 測定指標(biāo)

總蛋白（TP）采用雙縮脲法測定；白蛋白（ALB）采用溴甲酚綠法測定；尿酸（UA）采用尿酸酶－過氧化物酶比色法測定；甘油三脂（TG）采用GPO－PAP法測定；高密度脂蛋白膽固醇（HDL）和低密度脂蛋白膽固醇（LDL）采用清除法測定；尿素氮（BUN）采用兩點動力法測定；肌酐（CRE）采用苦味酸法測定；谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）和谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）采用連續(xù)監(jiān)測法測定；血糖（GLU）采用葡萄糖氧化酶法測定，上述指標(biāo)均利用日本日立7160全自動生化儀測定。試劑盒由中生北控生物科技股份有限公司提供。雌二醇－17β（E2）、胎盤催乳素（PL）、孕酮（P）、垂體催乳素（PRL）、促卵泡素（FSH）采用r－911全自動放免計數(shù)儀測定。試劑盒由北京華英生物技術(shù)研究所提供。

1.6 數(shù)據(jù)分析

利用SPSS13.0統(tǒng)計軟件中的“One－Way ANOVA”進(jìn)行方差分析，多重比較采用Duncan＇s法進(jìn)行。試驗數(shù)據(jù)均以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ˉx±SD）表示。顯著性水平為P＜0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同日糧蛋白、能量水平對血液生化指標(biāo)的影響

從表3可知，在第4泌乳月時，各組間TP、ALB、CRE、AST、ALT差異不顯著（P＞0.05）；第Ⅲ組中的GLU分別高于日糧Ⅱ、Ⅳ和Ⅴ組34.8%、38.4%和37.8%（P＜0.05）。第Ⅵ組血液中UA的含量比第Ⅰ、Ⅱ和Ⅳ組分別提高了6.4%、8.2%和10%（P＜0.05）；第Ⅰ組中的TG較第Ⅳ組提高34.0%（P＜0.05），其它各組間無顯著差異（P＞0.05）；HDL第Ⅱ組較第Ⅰ組提高14.16%（P＜0.05），其它各組間無顯著差異（P＞0.05）；LDL第Ⅱ組的較第Ⅲ組增加16.7%（P＜0.05），其它各組間無顯著差異（P＞0.05）；BUN第Ⅵ組較第Ⅱ組增加22.9%（P＜0.05）。在第5泌乳月，各組間UA和ALT差異不顯著（P＞0.05）；第Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ組有較高的TP水平，并顯著高于第Ⅱ、Ⅲ組（P＞0.05）。第Ⅴ和Ⅵ組的ALB水平顯著高于其它各組（P＜0.05）；第Ⅰ組有較高的GLU水平，并顯著高于第Ⅲ、Ⅳ和Ⅵ組（P＜0.05）；在各組間，第Ⅴ組的TG較第Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ組提高50.8%、37.5%和32.2%（P＜0.05）；第Ⅱ組的HDL顯著高于第Ⅳ和第Ⅴ組，而其它各組間無顯著差異；第Ⅱ組的LDL顯著高于第Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ組；隨著泌乳期的延長，血液中的TG濃度明顯下降，而膽固醇無明顯變化。第Ⅲ組和第Ⅳ組間的BUN差異顯著（P＜0.05），其它各組間無顯著差異（P＞0.05）。第Ⅵ組的CRE水平在各組中最高，并顯著高于第Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ組（P＜0.05）；AST在第Ⅴ組中的水平最高，較第Ⅰ、Ⅱ和Ⅳ組分別提高19.0%、23.2%和14.9%（P＜0.05）。

表3 不同日糧能量、蛋白水平對伊犁馬泌乳后期血液生化指標(biāo)的影響Table 3 Effect of different dietary energy，protein levels on blood biochemical indexes of Yili

2.2 不同日糧蛋白、能量水平對血液生殖激素的影響

從表4可以看出，在第4泌乳月時，各組間E2、PL、P、PRL差異不顯著（P＞0.05）；第Ⅲ組母馬血液中FSH的含量分別比第Ⅰ、Ⅳ和Ⅵ組提高了8.7%、6.7%和7.1%（P＜0.05），日糧Ⅱ組和日糧Ⅴ組分別比Ⅰ組提高了6.6%和5.5%（P＜0.05）。在第5泌乳月時，各組間E2、PL、P、PRL、FSH差異不顯著（P＞0.05）。

表4 不同日糧蛋白、能量水平對伊犁馬泌乳后期血液生殖激素的影響Table 4 Effect of different dietary protein，energy level on reproductive hormones of Yili mares in late lactation stage

3 討 論

3.1 不同日糧蛋白、能量水平對血液生化指標(biāo)的影響

馬的血液生理生化指標(biāo)通常受到年齡、性別、品種和訓(xùn)練強(qiáng)度的影響，通過這些指標(biāo)的變化可以用于判斷馬匹的健康狀況［5］。血清TP含量反映了機(jī)體蛋白質(zhì)合成代謝的強(qiáng)弱，血清TP含量的升高可促使其機(jī)體向組織蛋白沉積正方向進(jìn)行，從而促進(jìn)組織器官的生長和發(fā)育［6］。ALB的含量則是動物營養(yǎng)狀況的一種體現(xiàn)［7］。馬的TP和ALB水平一般為6.2g／100mL和3.6g／100mL；日本的Kiso馬則分別為6.9g／100mL和3.1g／100mL［8］。本試驗結(jié)果顯示，伊犁馬血清TP與Takasu等［8］報道相似，但ALB水平明顯較低，這種差異可能主要與品種有關(guān)。在本研究中，當(dāng)母馬消化能攝入量處于91.96～125.40MJ／d、粗蛋白攝入處于1.20～1.55 kg／d時，血液中TP和ALB均處于其正常的參考值范圍（52～79g／L和26～37g／L）［9］。攝入高日糧蛋白時，其血液中TP的含量最高，說明此時有助于維持母馬較好的營養(yǎng)狀況。

GLU含量是動物機(jī)體內(nèi)能量平衡的重要指標(biāo)。GLU含量在肝臟的調(diào)節(jié)下基本恒定，過高過低均不利［10］。有研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)馬飼喂不同精粗比日糧時，其產(chǎn)前GLU和產(chǎn)后GLU均較穩(wěn)定［11］。然而，本試驗研究發(fā)現(xiàn)，處于泌乳期的伊犁馬在飼喂不同消化能和粗蛋白日糧時，GLU有明顯不同。Stull等［11］認(rèn)為，日糧形式、纖維含量、抗?fàn)I養(yǎng)因子和淀粉－蛋白質(zhì)互作均可改變馬匹GLU水平。

AST和ALT是動物體內(nèi)重要的轉(zhuǎn)氨酶，在非必需氨基酸的合成和蛋白質(zhì)分解代謝中起著重要的中介作用，血清AST和ALT活性的高低反映了蛋白質(zhì)合成和分解代謝的狀況，并影響血液中BUN水平的變化［12］。與其它動物相比，馬血液中的AST較高，介于146.8～296U／L之間。除了品種、年齡外，肌肉活動也是影響其活性的重要因素。如處于工作狀態(tài)的馬，其AST活性較靜息狀態(tài)下高60%［13］。在本研究中，飼喂高蛋白日糧組的AST活性明顯高于低蛋白日糧組，并且相應(yīng)試驗組中的BUN水平也較高，表明日糧粗蛋白水平也是影響血液AST活性的重要因素之一。

在靈長類動物、狗、貓、兔和大鼠，ALT是肝臟細(xì)胞質(zhì)中的特異酶類，在血液中其活性升高通常預(yù)示著肝臟的某些變化。但豬、馬、山羊、綿羊和牛，血液中ALT的活性并不是肝臟變化的特意指標(biāo)［13］。馬ALT受年齡和肌肉活動水平的影響［13］。在本研究中，飼喂不同粗蛋白和消化能日糧的馬匹，其血液中ALT活性并無顯著變化，說明日糧蛋白質(zhì)和能量水平不是影響馬匹ALP活性的重要因子。

CRE是肌肉在動物體內(nèi)代謝的產(chǎn)物。CRE主要由腎小球濾過排出體外，因此血液中CRE水平常被用于指針腎臟功能的重要指標(biāo)。在正常情況下，當(dāng)機(jī)體攝入較高水平動物性蛋白質(zhì)時，血液CRE水平升高。當(dāng)馬匹在短期或長期運(yùn)動后，血液中的CRE水平均有所升高。kiso馬血液中CRE水平為1.4mg／dL（約123.9μmol／L）［8］。在本研究中，泌乳期伊犁馬的CRE水平為74.68～88.93μmol／L，并且飼喂較高日糧蛋白組的CRE水平明顯較高。日糧粗蛋白和消化能對泌乳期馬血液中CRE的影響還未見報道。

血液中TG和膽固醇濃度是監(jiān)測馬高血脂癥的重要指標(biāo)，根據(jù)血脂和脂蛋白的水平可用于檢測和判斷馬脂代謝疾病［14］。不同品種的馬，其血液脂類和脂蛋白含量有明顯差別。溫順品種的馬（如輕型馬）和難以馴服的馬（如英純血馬）血脂和脂蛋白含量不同。在本研究中，泌乳后期伊犁馬的TG與日本Kiso馬相似（約185μmol／L），而膽固醇均高于上述品種［8］。品種、生理狀況、采樣時間和海拔高度等是血液中TG和膽固醇水平生物因素［14］。飼喂不同粗蛋白／消化能日糧對血液中脂類和脂蛋白均有顯著影響，表明日糧蛋白質(zhì)和能量水平也是影響其含量的重要指標(biāo)。在消化能較高的試驗組中，其膽固醇水平較高，而TG水平較低，這與Schmidt等報道的結(jié)果一致［15］。隨著泌乳期延長，血液中TG明顯下降，這可能與馬的泌乳特征有關(guān)。在泌乳后期，泌乳量呈明顯的下降趨勢，此時對脂肪的需要量減少，因此馬對體脂的動員下降，這一現(xiàn)象在奶牛上也有相似的發(fā)現(xiàn)［16］。

3.2 不同日糧蛋白、能量水平對血液生殖激素的影響

有關(guān)日糧營養(yǎng)對泌乳馬生殖激素影響的研究報道較少。研究發(fā)現(xiàn)，日糧蛋白質(zhì)和能量限制對馬PRL無顯著影響，但采食后濃度有所升高［17］，但也有研究報道禁食或營養(yǎng)物質(zhì)攝入減少會導(dǎo)致PRL分泌減少［18］。本研究中，雖然日糧蛋白和能量水平對泌乳期伊犁馬PRL無顯著影響，但當(dāng)能量或蛋白水平增加后，血液PL和PRL均有不同程度提高。有關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，提高日糧粗蛋白質(zhì)和能量水平可以提高母羊的FSH濃度［19－20］。鄭家三等［21］研究表明，血漿促黃體素、FSH、P的水平隨能量攝入量的增加而升高，據(jù)推測可能是由于高能量攝入能緩解奶牛能量負(fù)平衡，從而促進(jìn)卵泡正常性周期活動，提高奶牛繁殖性能。本試驗研究發(fā)現(xiàn)，能量最高的日糧組P水平最高，但其他組并非隨能量的增加而提高，有待研究。而FSH的含量也不是隨能量的增加而提高。造成這些的原因可能與日糧蛋白能量的組成以及種屬和品種有關(guān)。

4 結(jié) 論

飼喂高能量日糧可提高伊犁馬泌乳后期血液中HDL和LDL水平，高蛋白質(zhì)日糧可提高血液中TP、ALB、UA、BUN和AST活性。飼喂不同蛋白、能量水平的日糧不影響伊犁馬泌乳后期血液中P、PRL、E2和PL水平，高能量日糧顯著提高FSH水平。

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