綠汁發(fā)酵液和纖維素酶對(duì)靈芝菌糟發(fā)酵飼料品質(zhì)和發(fā)酵過(guò)程的影響

陳國(guó)富，張文昌，朱小清，張 詩(shī)，林 芝，莊益芬，2＊

（1.福建農(nóng)林大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，福建福州350002；2.國(guó)家菌草工程技術(shù)研究中心，福建福州350002）

我國(guó)是菌業(yè)超級(jí)大國(guó)，目前全世界的食用菌的種類共有2 000多種，我國(guó)就有720種。據(jù)有關(guān)文獻(xiàn)資料顯示，2009年，我國(guó)食用菌實(shí)現(xiàn)產(chǎn)值820億元，產(chǎn)量及出口量均居世界第一，已成為農(nóng)產(chǎn)品的支柱產(chǎn)業(yè)之一［1］。隨著食用菌菌業(yè)的發(fā)展，食用菌的菌糟即栽培食用后的廢料也越來(lái)越多。若隨意丟棄不但是對(duì)資源的浪費(fèi)，而且還會(huì)導(dǎo)致有害微生物的滋生，易造成環(huán)境污染［2］。靈芝菌糟是菌糟中的一種，指以棉籽殼、鋸木屑、稻草、玉米芯、甘蔗渣及多種農(nóng)作物秸稈、工業(yè)廢物，如酒糟、醋糟、造紙廠廢液及制藥廠黃漿液等為主要原料栽培食用菌后的廢棄培養(yǎng)基［3］。靈芝采摘之后的栽培基被粉碎后就成為靈芝菌糟，其中仍含有大量的活性微生物和食用菌絲以及多種糖類、有機(jī)酸類、多種活性物質(zhì)等。一般飼料缺乏的必需氨基酸、維生素在廢菌糠中含量較高，鐵、鈣、鋅、鎂等微量元素含量也很豐富，而且纖維素、半纖維素和木質(zhì)素得到降低，粗蛋白也有了較大的提高，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值得到改善［4］。由此可見靈芝菌糟具有較高的飼用價(jià)值，目前已有許多研究證實(shí)了菌糟的飼用價(jià)值。衛(wèi)智濤等研究表明［5］，以食藥用菌菌糟作為飼料飼喂豬、反芻動(dòng)物、家禽等動(dòng)物，可提高日增重，降低疾病率和飼料成本，提高經(jīng)濟(jì)效益。呂亞軍等初步證實(shí)用菌糠部分替代生長(zhǎng)育肥豬全價(jià)料，可達(dá)到省料增效的目的［6］。石明生等［7］試驗(yàn)證明，利用平菇菌糠飼喂羊30d，試驗(yàn)組比對(duì)照組日增重提高34.6%，效益增加34.5%；董志國(guó)等［8］報(bào)道，將平菇菌糠按5%～10%添加入雞飼料中，肉雞生長(zhǎng)快速，可提早上市時(shí)間?？梢娋窢I(yíng)養(yǎng)價(jià)值足以代替部分飼料應(yīng)用于家畜生產(chǎn)，并取得良好的飼用效果和經(jīng)濟(jì)效益。李志香等［9］將醋糟菌糠進(jìn)行厭氧發(fā)酵，經(jīng)檢測(cè)粗蛋白質(zhì)含量提高到24.94%，粗纖維下降至5.07%。靈芝菌糟中的多糖作為魚類飼料添加劑添加到魚類飼料中做飼養(yǎng)試驗(yàn)，研究發(fā)現(xiàn)它不但可以提高羅非魚的凈增重、相對(duì)增重率、特定生長(zhǎng)率，還可降低飼料消耗，各項(xiàng)生長(zhǎng)指標(biāo)達(dá)最佳的添加量為0.25%［10］。本試驗(yàn)選用綠汁發(fā)酵液、纖維素酶作為生物性添加劑，本試驗(yàn)旨在探明綠汁發(fā)酵液和纖維素酶對(duì)靈芝菌糟發(fā)酵飼料品質(zhì)和發(fā)酵過(guò)程的影響，為充分利用靈芝菌糟進(jìn)行大規(guī)模發(fā)酵飼料生產(chǎn)提供參考。

1 材料與方法

1.1 發(fā)酵原料

原料為靈芝菌糟，由福建農(nóng)林大學(xué)國(guó)家菌草工程技術(shù)研究中心提供，2013年7月20日人工采摘靈芝。

1.2 添加劑

綠汁發(fā)酵液（Fermented Green Juice，F(xiàn)GJ）參照大島光昭等［11］的方法用新鮮象草制備；纖維素酶（cellulase，CEL）由廣東溢多利公司提供，純度98%、酶活20 000U／g。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

設(shè)對(duì)照（CON）組，添加綠汁發(fā)酵液2ml／kg（FGJ）組，添加纖維素酶2000U／kg（CEL）組、復(fù)合添加綠汁發(fā)酵液2ml／kg與纖維素酶2 000U／kg（MIX）組，共計(jì)4個(gè)處理組，每個(gè)處理組12個(gè)重復(fù)，進(jìn)行厭氧發(fā)酵，在貯存7d、14d、30d和60d各分別開封3個(gè)重復(fù)。

1.4 菌糟發(fā)酵飼料制備

青貯調(diào)制時(shí)間于2013年8月5日進(jìn)行。將所有靈芝菌糟的包裝開封、放到一起搗碎并混合均勻，相同處理的3個(gè)重復(fù)稱取400g菌糟，分別噴灑已設(shè)計(jì)好的添加劑和蒸餾水共計(jì)5mL（對(duì)照組噴灑蒸餾水），混拌均勻后大致分為3等份，分別裝入貼有標(biāo)簽的真空袋內(nèi)，填裝壓實(shí)并用真空泵抽氣、用塑料封口機(jī)封口。常溫條件下貯存，分別在貯存7d、14 d、30d、60d開封，供分析測(cè)定。

1.5 風(fēng)干樣品采集和浸提夜制備

菌糟與菌糟發(fā)酵飼料的分析樣本均在65℃下干燥48h、回潮、粉碎，待測(cè)。取代表性菌糟或菌糟發(fā)酵飼料樣品20g裝入有刻度的100mL的廣口錐形瓶中，加入蒸餾水定容至100mL，放置4℃冰箱中，18h～24h后用濾紙過(guò)濾，制備青貯浸提液，待測(cè)。

1.6 測(cè)定項(xiàng)目和方法

1.6.1 微生物含量測(cè)定 菌糟原料中的乳酸菌、好氣性細(xì)菌、酵母菌和霉菌數(shù)量分別采用MRS瓊脂培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基計(jì)數(shù)［12］。乳酸菌用厭氧箱（YQX－Ⅱ型），37℃培養(yǎng)2d；好氣性細(xì)菌、酵母菌、霉菌在有氧條件下30℃培養(yǎng)2d～4d。

1.6.2 菌糟原料和菌糟發(fā)酵飼料品質(zhì)測(cè)定 使用菌糟和菌糟發(fā)酵飼料新鮮物的純水浸提液，pH用pH計(jì)測(cè)定，乳酸（LA）、乙酸（AA）、丙酸（PA）、丁酸（BA）含量采用島津LC－20AT型高效液相色譜（色譜柱：Shodex Rspak KC－811S－DVB gel Column 300×8mm，檢測(cè)器：SPD－M10AVp，流動(dòng)相：3 mmol／L高氯酸）分析［13］，氨態(tài)氮（AN）采用苯酚－次氯酸鈉比色法測(cè)定［14］。乳酸、乙酸、丙酸和丁酸用新鮮（FM）基礎(chǔ)的百分比表示，水分用百分比表示，氨態(tài)氮換算為100g新鮮發(fā)酵飼料中的mg數(shù)（mg／100g發(fā)酵飼料）。

1.6.3 菌糟和菌糟發(fā)酵飼料中化學(xué)成分測(cè)定 菌糟和菌糟發(fā)酵飼料風(fēng)干樣的水分和粗蛋白質(zhì)（CP）含量采用常規(guī)法［15］測(cè)定?？扇苄蕴妓衔铮╓SC）含量參照Anthrone比色法進(jìn)行測(cè)定。中性洗滌纖維（NDF）和酸性洗滌纖維（ADF）含量參照Van Soest等［16］的方法測(cè)定，半纖維素（HC）＝NDF－ADF?？扇苄蕴妓衔?、中性洗滌纖維、酸性洗滌纖維、半纖維素和粗蛋白質(zhì)以干物質(zhì)（DM）基礎(chǔ)的百分比表示。

1.7 干物質(zhì)回收率（DMR）和氣體損失率（GLR）

準(zhǔn)確稱取每個(gè)處理裝填時(shí)裝入原料重和開封時(shí)回收青貯重，通過(guò)如下計(jì)算方法得出：

1.8 數(shù)據(jù)分析

原始數(shù)據(jù)經(jīng)Excel 2003處理后，采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差統(tǒng)計(jì)分析和多重比較，試驗(yàn)結(jié)果均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，以P＜0.05作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌糟的微生物數(shù)量

微生物含量分析測(cè)定結(jié)果表明，原料（鮮樣）中乳酸菌、細(xì)菌、酵母菌、霉菌數(shù)量分別為5.35、5.97、 4.72、5.01lg cfu·g－1。從測(cè)定結(jié)果看出，靈芝菌糟中微生物總體含量較低，且較為接近，說(shuō)明靈芝菌糟品質(zhì)良好，沒有受到腐敗菌的污染腐敗變質(zhì)。乳酸菌數(shù)較細(xì)菌數(shù)稍處于劣勢(shì)，相對(duì)酵母菌和霉菌也并未完全占優(yōu)。

2.2 菌糟的pH和有機(jī)酸

從測(cè)定結(jié)果可知，靈芝菌糟原料pH為5.22，呈弱酸性。相比乙酸最高（0.6%FM），丁酸最低（0.04%FM），乳酸（0.58%FM）、丙酸（0.45%FM）含量介于兩者之間，但乳酸、乙酸、丙酸含量較為接近，符合靈芝菌糟的pH和有機(jī)酸組成。

2.3 菌糟的化學(xué)成分

菌糟原料的化學(xué)成分分析結(jié)果表明，菌糟原料中干物質(zhì)為37.27%、可溶性碳水化合物3.26%、中性洗滌纖維53.2%、酸性洗滌纖維53.2%、半纖維素20.79%、粗蛋白11.97%、氨態(tài)氮11.23%。從分析結(jié)果可知，靈芝菌糟原料中干物質(zhì)含量在常規(guī)青貯原料范圍?？扇苄蕴妓衔锖枯^低，低于一般牧草。中性洗滌纖維、酸性洗滌纖維、半纖維素、粗蛋白和氨態(tài)氮含量較高，基本符合靈芝菌糟中的化學(xué)成分組成。

2.4 菌糟發(fā)酵飼料的品質(zhì)在貯存過(guò)程中的變化

2.4.1 對(duì)照組的品質(zhì)在貯存過(guò)程中的變化 菌糟發(fā)酵飼料的品質(zhì)在貯存過(guò)程中的變化見表2和表3。從表2、表3可知，菌糟發(fā)酵30d和60d的pH顯著低于發(fā)酵7d與14d（P＜0.05）；原料發(fā)酵60 d的丙酸含量顯著高于發(fā)酵7d和14d（P＜0.05）；原料發(fā)酵30d的丁酸含量顯著高于發(fā)酵14d（P＜0.05）；原料中水分在發(fā)酵60d時(shí)顯著低于發(fā)酵14 d（P＜0.05）；原料發(fā)酵60d后的可溶性碳水化合物顯著低于發(fā)酵7d和14d（P＜0.05），發(fā)酵30d顯著低于發(fā)酵7d（P＜0.05）；隨著發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng)，氣體損失率和氨態(tài)氮的含量逐級(jí)顯著上升（P＜0.05）；而原料中NDF含量隨著發(fā)酵時(shí)間的增加逐級(jí)顯著減少（P＜0.05），ADF在發(fā)酵60d時(shí)顯著低于前3個(gè)發(fā)酵時(shí)間點(diǎn)（P＜0.05）；原料發(fā)酵30d后，HC的含量顯著低于7d（P＜0.05）。

2.4.2 綠汁發(fā)酵液組的品質(zhì)在貯存過(guò)程中的變化在pH上，發(fā)酵7d時(shí)為3.97，已經(jīng)低于4.2，達(dá)到有效抑制有害菌繁殖酸度。發(fā)酵60d顯著低于發(fā)酵7d、14d、30d（P＜0.05）。在LA上，僅發(fā)酵14 d、30d之間差異顯著（P＜0.05），且發(fā)酵30d時(shí)絕對(duì)值最大。在BA上，發(fā)酵7d時(shí)數(shù)值最低，且顯著低于發(fā)酵30d和60d（P＜0.05）。在水分上，發(fā)酵30d和60d顯著低于發(fā)酵7d和14d（P＜0.05）。在GLR和AN上，變化情況同對(duì)照組一致。在WSC上，隨著發(fā)酵時(shí)間的增加呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，發(fā)酵14d顯著低于發(fā)酵7d（P＜0.05），發(fā)酵60d顯著低于發(fā)酵30d（P＜0.05）。在NDF和ADF上，隨著發(fā)酵時(shí)間的增加呈減少趨勢(shì)，發(fā)酵60d均顯著低于發(fā)酵7d（P＜0.05）。在HC上，發(fā)酵30d和60d顯著低于發(fā)酵7d（P＜0.05）。

2.4.3 纖維素酶組的品質(zhì)在貯存過(guò)程中的變化在pH上，隨著發(fā)酵天數(shù)的增加呈下降趨勢(shì)，發(fā)酵60d顯著低于發(fā)酵7d、24d、30d（P＜0.05）。而在LA上，隨著發(fā)酵過(guò)程的推進(jìn)呈上升趨勢(shì)，發(fā)酵60d顯著高于發(fā)酵7d、14d、30d（P＜0.05）。在BA上，發(fā)酵7d顯著低于發(fā)酵60d（P＜0.05）。在GLR和AN上，變化情況同對(duì)照組一致。在水分上，發(fā)酵60d顯著低于發(fā)酵7d、14d、30d（P＜0.05）。在WSC上，隨著發(fā)酵過(guò)程的進(jìn)行呈減少趨勢(shì)，且發(fā)酵60d顯著低于發(fā)酵7d、14d、30（P＜0.05）。在ADF上，發(fā)酵60d顯著高于發(fā)酵7d（P＜0.05）。在NDF和HC上，發(fā)酵60d顯著低于發(fā)酵7d、14d、30d（P＜0.05）。

2.4.4 復(fù)合組的品質(zhì)在貯存過(guò)程中的變化 在pH上，發(fā)酵60d顯著低于發(fā)酵7d（P＜0.05），且整個(gè)發(fā)酵過(guò)程中pH均低于4.2，有利于菌糟飼料發(fā)酵。在PA上，發(fā)酵60d顯著高于發(fā)酵14d（P＜0.05）。在DMR上，發(fā)酵14d、30d、60d顯著低于發(fā)酵7d（P＜0.05）。在GLR、AN上，變化情況同對(duì)照組一致。在水分上，發(fā)酵30d顯著低于發(fā)酵14 d（P＜0.05）。在WSC上，發(fā)酵30d和60d顯著低于發(fā)酵7d、14d（P＜0.05）。在NDF上，發(fā)酵60d顯著低于7d、14d、30d（P＜0.05）。在ADF上，發(fā)酵14d、30d、60d顯著高于發(fā)酵7d（P＜0.05）。在HC上，發(fā)酵60d顯著低于30d（P＜0.05）、發(fā)酵30d顯著低于7d和14d（P＜0.05）。

2.4.5 綠汁發(fā)酵液和纖維素酶對(duì)菌糟發(fā)酵飼料貯存過(guò)程中發(fā)酵品質(zhì)和化學(xué)成分的影響 綠汁發(fā)酵液和纖維素酶對(duì)菌糟發(fā)酵飼料貯存過(guò)程中發(fā)酵品質(zhì)和化學(xué)成分的影響如表4和表5。

在發(fā)酵7d時(shí)，與CON組相比，F(xiàn)GJ組的WSC含量顯著升高（P＜0.05），pH、BA、DMR、HC、AN含量顯著降低（P＜0.05）；CEL組的水分、WSC含量顯著升高（P＜0.05），AN含量顯著降低（P＜0.05）；MIX組的LA、WSC含量顯著升高（P＜0.05），pH、BA、GLR、AN含量顯著降低（P＜ 0.05）。與FGJ組相比，CEL組的pH、AA、WSC、HC含量顯著升高（P＜0.05），AN含量顯著降低（P＜0.05）；MIX組的pH、LA、WSC、HC含量顯著升高（P＜0.05），AN含量顯著降低（P＜0.05）。與CEL組相比，MIX組的LA含量顯著升高（P＜0.05），pH、AA、水分含量顯著降低（P＜0.05）。

表2 青貯發(fā)酵飼料的發(fā)酵品質(zhì)（鮮樣）Table 2 Fermentation quality of silages feed（FM）

在發(fā)酵14d時(shí)，與CON組相比，F(xiàn)GJ組的WSC含量顯著升高（P＜0.05），pH、NDF、ADF、 HC、AN含量顯著降低（P＜0.05）；CEL組的LA、AA、BA、DMR、水分、WSC含量顯著升高（P＜0.05），pH、GLR、NDF、ADF、AN含量顯著降低（P＜0.05）；MIX組的LA、AA、DMR、WSC含量顯著升高（P＜0.05），pH、PA、GLR、AN含量顯著降低（P＜0.05）。與FGJ組相比，CEL組的pH、LA、AA、DMR、水分、WSC、NDF、HC含量顯著升高（P＜0.05），GLR、AN含量顯著降低（P＜0.05）；MIX組的LA、AA、WSC、NDF、ADF、HC含量顯著升高（P＜0.05），AN含量顯著降低（P＜0.05）。與CEL組相比，MIX組的NDF、ADF含量顯著升高（P＜0.05），pH、AA、PA、BA、水分含量顯著降低（P＜0.05）。

表3 青貯發(fā)酵飼料的化學(xué)成分Table 3 Chemical composition of silages feed

在發(fā)酵30d時(shí)，與CON組相比，F(xiàn)GJ組的WSC含量顯著升高（P＜0.05），pH、PA、NDF、HC、AN含量顯著降低（P＜0.05）；CEL組的AA、水分、WSC含量顯著升高（P＜0.05），pH、PA、GLR、AN含量顯著降低（P＜0.05）；MIX組的LA、AA、WSC含量顯著升高（P＜0.05），pH、PA、BA、AN含量顯著降低（P＜0.05）。與FGJ組相比，CEL組的pH、水分、WSC、NDF、HC含量顯著升高（P＜0.05）；MIX組的WSC、NDF、HC含量顯著升高（P＜0.05），PA含量顯著降低（P＜0.05）。與CEL組相比，MIX組的pH、PA、BA、水分、WSC含量顯著降低（P＜0.05）。

在發(fā)酵60d時(shí)，與CON組相比，F(xiàn)GJ組的WSC含量顯著升高（P＜0.05），pH、PA、GLR、NDF、ADF、HC、AN含量顯著降低（P＜0.05）；CEL組和MIX組的LA、AA、WSC含量顯著升高（P＜0.05），pH、PA、GLR、NDF、HC、AN含量顯著降低（P＜0.05）。與FGJ組相比，CEL組的pH、LA、AA、NDF、ADF含量顯著升高（P＜0.05），AN含量顯著降低（P＜0.05）；MIX組的AA、水分、WSC、NDF、ADF含量顯著升高（P＜0.05），AN含量顯著降低（P＜0.05）。與CEL組相比，MIX組的水分、WSC含量顯著升高（P＜0.05），NDF含量顯著降低（P＜0.05）。

3 討 論

3.1 原料中的微生物數(shù)量、pH和有機(jī)酸含量

本試驗(yàn)所用菌糟原料的乳酸菌數(shù)量相對(duì)于細(xì)菌、酵母菌和霉菌未占優(yōu)勢(shì)，菌糟的微生物組成與之相符。一般青貯原料上附著的乳酸菌數(shù)都不足，不能滿足良好發(fā)酵的需要［17］。靈芝菌糟中乳酸菌數(shù)與細(xì)菌數(shù)接近，酵母菌和霉菌數(shù)也較多，乳酸菌并不占優(yōu)勢(shì)，所以本試驗(yàn)添加綠汁發(fā)酵液，以增加乳酸菌數(shù)目，從而促進(jìn)乳酸發(fā)酵。本試驗(yàn)所用菌糟的乳酸在有機(jī)酸比例中雖然優(yōu)勢(shì)不明顯，但pH呈弱酸性，這則是有利于乳酸發(fā)酵的較好基礎(chǔ)。

3.2 原料中的化學(xué)成分組成

一般牧草青貯時(shí)，可溶性碳水化合物的足夠數(shù)量應(yīng)占干物質(zhì)的10%以上［18］，可溶性碳水化合物是影響青貯發(fā)酵條件的主要因素之一，青貯成功與否決定于原料中可溶性碳水化合物的含量［19］。而本試驗(yàn)靈芝菌糟原料干物質(zhì)中可溶性碳水化合物的含量只有3.26%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足乳酸菌活動(dòng)的需要。在青貯飼料中添加纖維素酶可提高殘余水溶性碳水化合物含量［20－21］，本試驗(yàn)添加纖維素酶就是為了間接增加可溶性碳水化合物含量，從而促進(jìn)乳酸發(fā)酵。

3.3 菌糟發(fā)酵飼料的品質(zhì)在貯存過(guò)程中的變化

常規(guī)青貯法對(duì)原料含水率的要求為60%～75%。適宜的含水率有利于乳酸菌的生長(zhǎng)繁殖、抑制酪酸菌等不良微生物的活動(dòng)，從而促進(jìn)乳酸生成、加快pH的下降，提高青貯品質(zhì)。本試驗(yàn)所有處理組的水分都在常規(guī)范圍內(nèi)，均有利于發(fā)酵的進(jìn)行。適宜降低原料的含水率能使原料的可溶性碳水化合物等養(yǎng)分濃縮，促進(jìn)乳酸發(fā)酵，還能在一定程度上抑制不良發(fā)酵、酶的作用和植物細(xì)胞的呼吸活動(dòng)［22］，從而減少營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的損失，提高青貯品質(zhì)。pH和DMR都是評(píng)定青貯品質(zhì)的重要指標(biāo)。一般青貯的發(fā)酵過(guò)程分為3個(gè)階段，即好氧性菌活動(dòng)階段、乳酸發(fā)酵階段和青貯穩(wěn)定階段。在青貯過(guò)程中，從發(fā)酵0～7d、7d～14d為有氧發(fā)酵階段，此時(shí)AA、PA、BA數(shù)量占優(yōu)勢(shì)，LA較少，原料中干物質(zhì)的消耗較少，DMR含量高，從14d～30d時(shí)，LA逐漸占據(jù)優(yōu)勢(shì)，進(jìn)入乳酸發(fā)酵階段，此時(shí)AA、PA、BA數(shù)量較少，干物質(zhì)進(jìn)一步消耗，DMR減少，發(fā)酵到30d、60 d時(shí)的pH都降至4.2以下，此時(shí)DMR進(jìn)一步減少，逐漸趨于穩(wěn)定，pH抑制其他細(xì)菌，同時(shí)也抑制乳酸菌，青貯飼料達(dá)到穩(wěn)定階段。試驗(yàn)4個(gè)處理組發(fā)酵到30d、60d的pH都降至4.2以下、DMR都超過(guò)98.30%，達(dá)到優(yōu)質(zhì)發(fā)酵的標(biāo)準(zhǔn)。證明利用菌糟調(diào)制發(fā)酵飼料是可行的。所有處理組的DMR在發(fā)酵過(guò)程中呈現(xiàn)逐級(jí)下降的規(guī)律，這是因?yàn)榫阍诎l(fā)酵過(guò)程中乳酸不斷消耗原料中的干物質(zhì)等營(yíng)養(yǎng)，促進(jìn)發(fā)酵的進(jìn)行，導(dǎo)致DMR一定規(guī)律的下降，這符合常規(guī)菌糟的發(fā)酵調(diào)制。

3.4 綠汁發(fā)酵液和纖維素酶對(duì)菌糟發(fā)酵飼料貯存過(guò)程中發(fā)酵品質(zhì)和化學(xué)成分的影響

一般牧草及作物附著的乳酸菌數(shù)目不足，添加綠汁發(fā)酵液也能改善靈芝菌糟發(fā)酵飼料的發(fā)酵品質(zhì)，綠汁發(fā)酵液是一種新型青貯添加劑，發(fā)酵液中含天然的乳酸菌菌株，菌株的種類多于人類添加的微生物制劑，它具有制作簡(jiǎn)單、成本低廉、取材方便等特點(diǎn)。綠汁發(fā)酵液中的乳酸菌是發(fā)酵原料上附著的野生乳酸菌，菌種天然且豐富［23］。從而確保乳酸菌迅速生長(zhǎng)繁殖，使青貯中乳酸發(fā)酵占主導(dǎo)地位，并以絕對(duì)的強(qiáng)勢(shì)壓倒或抑制其它有害微生物的生長(zhǎng)繁殖。而在飼料的發(fā)酵過(guò)程中，乳酸菌所占的優(yōu)勢(shì)越大，乳酸的產(chǎn)量越高，pH下降到4.2以下所需的時(shí)間越短，不良發(fā)酵越少，蛋白質(zhì)被分解成AN的量也就越少。添加綠汁發(fā)酵液獲得了更高的LA含量和較高的WSC含量，大大提高了乳酸的發(fā)酵，同時(shí)也降低了AN含量，在很大程度上也抑制了BA和PA的含量。本試驗(yàn)中較CON組，F(xiàn)GJ組的LA、WSC增加，PA和BA含量較少，蛋白質(zhì)被分解成AN的含量也大大降低。在CEL組、MIX組中在14d～60 d時(shí)段才達(dá)到有效抑制微生物pH，在CON組中在30d～60d時(shí)段才達(dá)到有效抑制微生物pH，而在FGJ組中在0～7d時(shí)段即已達(dá)到有效抑菌酸度，原因在于添加綠汁發(fā)酵液可增加青貯發(fā)酵初期的乳酸菌數(shù)目及殘存的WSC，彌補(bǔ)了靈芝菌糟中乳酸菌含量低、WSC不足的缺點(diǎn)，使得乳酸菌可以再靈芝菌糟中快速繁殖產(chǎn)酸，使乳酸菌在群中位于絕對(duì)或較高地優(yōu)勢(shì)，從而抑制青貯過(guò)程中的不良發(fā)酵，提高青貯品質(zhì)。

纖維素酶因其可降解纖維素為可溶性糖，既能促進(jìn)青貯的乳酸發(fā)酵，提高青貯品質(zhì)，又有利于提高飼料消化率，所以被常用作青貯發(fā)酵促進(jìn)添加劑。在發(fā)酵飼料中添加纖維素酶能在一定程度上破壞青貯原料細(xì)胞壁使其內(nèi)容物流出，將纖維素、半纖維素降解為單糖，為乳酸發(fā)酵提供充足底物，降低pH，改善發(fā)酵品質(zhì)，同時(shí)提高有機(jī)酸含量。朱旺生等［24］在皇竹草青貯中添加纖維素酶有效降低了pH，增加了乳酸、干物質(zhì)和粗蛋白質(zhì)，本試驗(yàn)中較CON組，CEL組的乳酸數(shù)量增加，pH、NDF、ADF和AN有一定程度的下降，蛋白質(zhì)不良分解成AN得到了一定程度的抑制。說(shuō)明添加纖維素酶顯著改善了菌糟的發(fā)酵品質(zhì)和化學(xué)組成，這一結(jié)果與許多研究一致［25－26］。與FGJ組相比，CEL組的pH、LA、WSC含量提高，AN含量降低，說(shuō)明添加的纖維素酶分解植物細(xì)胞壁，釋放出可以被乳酸菌用以發(fā)酵的WSC，增加可發(fā)酵底物的量，提高乳酸及蛋白質(zhì)含量，從而緩解底物不足的問(wèn)題，抑制AN等不良物質(zhì)的生成。

復(fù)合酶組中的綠汁發(fā)酵液和纖維素酶能使植物纖維分解，中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維降解率的提高，可以有效改變秸稈纖維的結(jié)構(gòu)。相比CON組，MIX組的可溶性碳水化合物有升高的趨勢(shì)，而NDF、AN和HC有降低的趨勢(shì)。發(fā)酵60d時(shí)，與FGJ組相比，MIX組的水分、WSC含量提高，AN含量降低。與CEL組相比，MIX組的水分、WSC含量提高，NDF含量降低。從本試驗(yàn)結(jié)果看，發(fā)酵至60d較CON組、FGJ組和CEL組，復(fù)合組的NDF和HC有減少趨勢(shì)，WSC增加，因?yàn)槔w維素酶和綠汁發(fā)酵液的同時(shí)添加，綠汁發(fā)酵液在增加了乳酸菌數(shù)目的同時(shí)，纖維素酶通過(guò)對(duì)植物細(xì)胞壁的水解降低纖維含量，部分降解成WSC，為乳酸菌提供了充足的發(fā)酵底物。這與Sun等［27］的研究結(jié)果一致，其在玉米秸稈中添加纖維素酶，降低了青貯的pH、WSC含量增加，NDF減少。

4 結(jié) 論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，單獨(dú)添加2mL／kg綠汁發(fā)酵液、2 000U／kg纖維素酶和復(fù)合添加綠汁發(fā)酵液2 mL／kg與2 000U／kg纖維素酶組均能改善靈芝菌糟發(fā)酵飼料的發(fā)酵品質(zhì)和提高化學(xué)成分，但是復(fù)合添加組效果最佳。

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