日立7600生化檢測系統(tǒng)檢測天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶臨床可報(bào)告范圍的研究

胡軍紅，謝建紅，陸玲，謝素玉

(清遠(yuǎn)市省佛岡縣人民醫(yī)院，廣東 清遠(yuǎn)511600)

天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)是一種臨床常見的酶類測定項(xiàng)目，在臨床生化檢驗(yàn)工作中我們經(jīng)常會(huì)遇到超出可測量范圍的酶類項(xiàng)目需要稀釋后才能測定出來。如何才能保證稀釋后測定的結(jié)果準(zhǔn)確可靠就需要我們對每個(gè)酶類檢測項(xiàng)目的臨床可報(bào)告范圍進(jìn)行驗(yàn)證。本文就日立7600生化分析儀檢測AST的臨床可報(bào)告范圍進(jìn)行了一系列研究，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1 .1 儀器與試劑 (1)儀器：日立7600全自動(dòng)生化分析儀。(2)試劑：寧波美康A(chǔ)ST檢測試劑,校準(zhǔn)品為羅氏CFAS,質(zhì)控品為伯樂公司提供。試劑批號：20130821；校準(zhǔn)品批號：20130206；質(zhì)控品批號：27601,27602。

1.1 .2樣本的制備 收集本院患者AST低濃度和高濃度的新鮮血清標(biāo)本若干份,要求血清清亮，無溶血、無黃疸、無脂血。

1.2 方法

1.2 .1儀器維護(hù)及校準(zhǔn) 按照說明書進(jìn)行對儀器進(jìn)行維護(hù)保養(yǎng)，設(shè)置好試劑參數(shù)，用羅氏公司CFAS多項(xiàng)校準(zhǔn)品進(jìn)行校準(zhǔn)，室內(nèi)質(zhì)控在控后再檢測樣品。

1.2 .2樣品檢測 (1)最大稀釋度實(shí)驗(yàn)樣品檢測：選取2個(gè)濃度稍微高于AST檢測范圍高限1000U/L的標(biāo)本，用0.9g/dl生理鹽水對這2個(gè)樣本分別進(jìn)行 2、4、8、32、64、128 倍稀釋。兩樣本分別測定 3次，取均值，計(jì)算稀釋回收率，稀釋回收率=(實(shí)測值均值／理論濃度值)×100%，以重復(fù)性CV值小于5%、回收率在90%～110%以內(nèi)為可接受，確定最大稀釋倍數(shù)。(2)功能靈敏度實(shí)驗(yàn)樣品檢測 ：選取低濃度AST的樣本，用0.9g/dl生理鹽水對該樣本進(jìn)行不同倍數(shù)稀釋，使最大稀釋倍數(shù)濃度接近于0。在7600儀器上對不同倍數(shù)稀釋樣本連續(xù)測定20次，計(jì)算平均數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)差及變異系數(shù)。查看各樣本的變異系數(shù)(CV%)，樣本的變異系數(shù)最接近20%所對應(yīng)的濃度即為功能靈敏度。(3)分析測量范圍樣品檢測：參考EP6-A文件，設(shè)定實(shí)驗(yàn)重復(fù)性和線性允許誤差分別為5%和10%。收集低AST濃度和高AST濃度的新鮮患者血清標(biāo)本若干份，將濃度稍微超出廠家聲明的分析測量范圍上線1000U/L的高AST濃度樣本作為分析測量范圍試驗(yàn)中的高值樣本(H),將低AST濃度標(biāo)本稀釋為濃度接近功能靈敏度后作為分析測量范圍試驗(yàn)中的低值樣本(L)。將樣本H與樣本L按照 L，0.8L+0.2H，0.6L+0.4H，0.4L+0.6H，0.2L+0.8H，H的比例配制成6個(gè)系列活性濃度樣品，充分混勻，各樣品重復(fù)檢測2次。記錄檢測結(jié)果。應(yīng)用SPSSl9.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行重復(fù)性誤差和多項(xiàng)式回歸分析。將所得數(shù)據(jù)擬合為一次多項(xiàng)式模型Y=b0+b1X、二次多項(xiàng)式模型Y=b0+b1X+b2X2和三次多項(xiàng)式模型Y=b0+blX+b2X2+b3X3多項(xiàng)式。用t檢驗(yàn)判斷擬合二次回歸多項(xiàng)式模型的非線性系數(shù)b2及三次回歸多項(xiàng)式模型的非線性系數(shù)b2和b3與0的差異是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。如有則判斷為非線性，否則為線性。

1.2 .3臨床可報(bào)告范圍的建立 將功能靈敏度作為臨床可報(bào)告范圍的下限，將分析測量范圍的上限乘最大稀釋倍數(shù)作為臨床可報(bào)告范圍的上限。

2 結(jié)果

2.1 AST稀釋回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果 濃度值為1 165U／L(標(biāo)本 1)，l 607 U ／L(標(biāo)本 2)的兩標(biāo)本稀釋后測定結(jié)果重復(fù)性CV%，稀釋倍數(shù)在1:128內(nèi)時(shí)，均在5%以內(nèi)，當(dāng)稀釋倍數(shù)延伸至1:128時(shí)，濃度值為1009U/L的標(biāo)本回收率超出90%～110%的實(shí)驗(yàn)設(shè)定范圍，所以其最大稀釋倍數(shù)為64倍。檢測數(shù)據(jù)見表1。

表1 AST稀釋回收率結(jié)果(%)

2.2 功能靈敏度實(shí)驗(yàn)結(jié)果 從表中數(shù)據(jù)可以看出樣本號3的CV值最接近20%，故本實(shí)驗(yàn)室7600生化檢測系統(tǒng)檢測AST的功能靈敏度可確認(rèn)為2.9U／L。 見表 2。

表2 AST功能靈敏度試驗(yàn)結(jié)果

2.3 分析測量范圍實(shí)驗(yàn)結(jié)果 應(yīng)用CLSI的EP6-A文件對AST的分析測量范圍進(jìn)行驗(yàn)證，6個(gè)系列濃度樣本AST的重復(fù)測定，每個(gè)濃度2次測量結(jié)果的重復(fù)測量誤差遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于設(shè)定的允許不精密度5%，重復(fù)測定誤差符合實(shí)驗(yàn)要求。測定數(shù)據(jù)進(jìn)行多項(xiàng)式回歸分析，結(jié)果見表3。從表3可知二次多項(xiàng)式與三次多項(xiàng)式雖有較小的回歸標(biāo)準(zhǔn)誤，但在α=0.05水平時(shí)無有統(tǒng)計(jì)意義的顯著性系數(shù)(P>0.05,表次t=1.91,小于查表的2.262，三次t=1.64及t=-1.33小于查表的2.306)，所以AST為一次線性，線性方程為Y=209.21X-209.67。本次實(shí)驗(yàn)證實(shí)AST檢測方法在3~1057.5U/L范圍成直線線性，由于低濃度AST不具有重要的臨床意義，本范圍涵蓋了廠家提供的0~1000U/L的線性范圍。

2.4 臨床可報(bào)告范圍實(shí)驗(yàn)結(jié)果 根據(jù)稀釋回收率結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定AST的最大稀釋度為1：64，功能靈敏度為2.9U/L，分析測量范圍為3~1057.5U/L，所以本實(shí)驗(yàn)室日立7600測定AST的臨床可報(bào)告范圍為2.9~67680U/L。

表3 AST多項(xiàng)式回歸分析結(jié)果

3 討論

ISO 15189醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則、CAP認(rèn)證標(biāo)準(zhǔn)以及CLIA’88都對醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室在引進(jìn)或改變檢測系統(tǒng)時(shí)需要進(jìn)行性能評價(jià)作出了規(guī)定[1],要求各實(shí)驗(yàn)室定期對包括精密度、準(zhǔn)確度、分析測量范圍、臨床可報(bào)告范圍及參考區(qū)間在內(nèi)的檢測系統(tǒng)性能進(jìn)行評價(jià)[2]。

臨床可報(bào)告范圍 (clinical reportable range,CRR)是指對臨床、診斷有意義的待測物濃度范圍。此范圍如果超出了AMR(分析測量范圍)，可將樣本通過稀釋、濃縮等預(yù)處理使待測物濃度處于分析測量范圍內(nèi)，最后乘以稀釋或濃縮的倍數(shù)。AMR是指患者標(biāo)本不經(jīng)稀釋或濃縮等任何處理由檢驗(yàn)方法或檢測系統(tǒng)得到可靠測量結(jié)果的范圍[3],AMR評價(jià)的方法主要有目測法,平均斜率法和CLSI評價(jià)方案[4],在本次AST的AMR驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)中我們采用了CLSI的EP6-A[5]多項(xiàng)式回歸分析方法,從統(tǒng)計(jì)學(xué)理論得出各濃度點(diǎn)的最適多項(xiàng)式為一次多項(xiàng)式，AST在3~1057.5U/L范圍內(nèi)成一次線性，由于低濃度AST沒有重要的臨床意義，我們可以認(rèn)為AST濃度在0~1057.5U/L范圍內(nèi)成一次線性，這就涵蓋了廠家提供的0~1000的線性范圍。

在本次驗(yàn)證AST的臨床可報(bào)告范圍實(shí)驗(yàn)中由于在功能靈敏度實(shí)驗(yàn)和分析測量范圍實(shí)驗(yàn)都需對標(biāo)本進(jìn)行稀釋處理，所以在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí)，我們先做了稀釋回收率實(shí)驗(yàn)然后再做其他實(shí)驗(yàn)，保證標(biāo)本的稀釋倍數(shù)在最大稀釋度范圍內(nèi)，以確保標(biāo)本稀釋后測定結(jié)果的準(zhǔn)確性[6，7]。通過最大稀釋度實(shí)驗(yàn)，功能靈敏度實(shí)驗(yàn)及分析測量范圍實(shí)驗(yàn)結(jié)果我們確定了日立7600生化分析儀測定AST的最大稀釋度為1：64，臨床可報(bào)告范圍為2.9~67680U/L。

在我們的日常臨床檢驗(yàn)工作中我們經(jīng)常會(huì)碰到高濃度的標(biāo)本需要我們稀釋后才能準(zhǔn)確測定，但高濃度標(biāo)本經(jīng)稀釋后由于基質(zhì)效應(yīng)或其他原因可能會(huì)對測定結(jié)果的準(zhǔn)確性造成影響，如何處理高濃度的標(biāo)本才能得到準(zhǔn)確的結(jié)果，如何保證稀釋程序的規(guī)范，這就要求我們對每個(gè)檢驗(yàn)項(xiàng)目的臨床可報(bào)告范圍進(jìn)行驗(yàn)證。

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