比較兩種核酸檢測系統(tǒng)檢測能力的結(jié)果分析

莊養(yǎng)林，熊麗紅

(江西省血液中心檢驗(yàn)科，南昌330000)

由于窗口期感染、隱匿性感染等原因，ELISA法檢測獻(xiàn)血者血液中的抗體或抗原存在一定的局限性，輸血?dú)堄喔腥撅L(fēng)險(xiǎn)也時有發(fā)生[1-8]。因此從2010年開始，我國在15所采供血機(jī)構(gòu)開展核酸檢測(NAT)試點(diǎn)工作，我單位2010年成為首批試點(diǎn)單位后，并于當(dāng)年引進(jìn)羅氏Cobas s 201核酸檢測系統(tǒng)，目前已平穩(wěn)運(yùn)行4年有余，為更好地推動核酸檢測工作，我單位于2013年4月引進(jìn)諾華TIGRIS全自動核酸檢測分析系統(tǒng)，該系統(tǒng)也平穩(wěn)運(yùn)行1年。由于這兩個檢測系統(tǒng)的檢測模式不同，實(shí)際檢測效果也有所不同，在引進(jìn)諾華核酸檢測系統(tǒng)的初期，為全面評估兩種核酸檢測系統(tǒng)的檢測能力，對此我們也做了相關(guān)的比較工作。

1 對象與方法

1.1 標(biāo)本來源 選自2013年7月24日-2013年10月16日南昌市無償獻(xiàn)血者標(biāo)本262例，所有標(biāo)本均用帶分離膠的5ml進(jìn)口無菌乙二胺四乙酸抗凝管留取血樣 (美國BD公司)，4℃低溫離心機(jī)離心(3000r/min，15 min)使血漿分層，2~8℃保存，24h內(nèi)進(jìn)行核酸檢測；2014年衛(wèi)生部核酸室間質(zhì)評(NCCL)標(biāo)本10例。

1.2 儀器 羅氏公司Cobas s 201核酸檢測系統(tǒng)，諾華公司TIGRIS全自動核酸檢測分析系統(tǒng)，瑞士Hamlton全自動STAR加樣儀，瑞士Hamilton FAME全自動酶免分析儀，西門子DIMENSION XPAND全自動生化分析儀，XANTUS全自動加樣與血型分析儀及長沙湘麓DL-6M大容量低溫離心機(jī)。

1.3主要試劑 (1)常規(guī)血清學(xué)篩查酶免試劑盒：HBsAg酶免試劑 (廈門英科新創(chuàng)科技有限公司，批號：2012125133)，抗-HCV酶免試劑(北京萬泰生物藥 業(yè) 股 份 有 限 公 司 ， 批 號 ：C20130102、C20130406)，抗-HIV酶免試劑(廈門英科新創(chuàng)科技有限公司，批號：2013026605)，抗-TP酶免試劑(北京華大吉比愛生物技術(shù)有限公司，批號：20130206、20130516；北京金豪制藥股份有限公司，批號：2012111033、2013041008)；(2)核酸檢測試劑盒：COBASTaqScreen MPX test核酸檢測試劑盒(瑞士 Roche 公司，批號：R01528、R07643)，該試劑可同時定性檢測人類血漿中的HIV-1,2 RNA、HCV RNA 和 HBV DNA；Procleix ULTRIO Assay核酸檢測試劑盒 (Novartis公司，批號：36247751509149)該試劑可同時定性檢測人類血漿中的HIV-1 RNA、HCV RNA 和HBV DNA。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法 先進(jìn)行常規(guī)一遍HBsAg、抗-HCV、抗-HIV，兩遍抗-TP和ALT檢測，篩選出ELISA及ALT合格獻(xiàn)血者標(biāo)本及不合格標(biāo)本，然后將262例標(biāo)本進(jìn)行羅氏6人份混樣檢測及諾華單人份檢測，NCCL核酸室間質(zhì)評標(biāo)本與獻(xiàn)血者標(biāo)本同批進(jìn)行檢測。(1)進(jìn)行羅氏6人份混樣核酸檢測時，初混無反應(yīng)性標(biāo)本判為NAT檢測陰性，初混有反應(yīng)性時，進(jìn)行下一步拆分檢測工作：其一，拆分有反應(yīng)性標(biāo)本判為NAT陽性標(biāo)本；其二，拆分無反應(yīng)性標(biāo)本判為NAT檢測陰性。(2)運(yùn)用諾華單人份檢測時，無反應(yīng)性標(biāo)本判為NAT陰性，有反應(yīng)性標(biāo)本判為NAT陽性。(3)ELISA檢測陰性而羅氏拆分檢測NAT陽性標(biāo)本或諾華檢測NAT陽性的標(biāo)本進(jìn)行下一步HBV、HCV及HIV鑒別實(shí)驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 262例血液標(biāo)本ELISA檢測結(jié)果 262例無償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本中經(jīng)ELISA檢測陰性為245例，陽性為17例。

2.2 245例血液標(biāo)本兩種核酸檢測系統(tǒng)檢測結(jié)果245例ELISA陰性獻(xiàn)血者標(biāo)本兩種核酸檢測系統(tǒng)檢測結(jié)果情況，詳見下表1。

表1 245例ELISA合格獻(xiàn)血者標(biāo)本兩種檢測系統(tǒng)NAT檢測結(jié)果

2.3 17例ELISA不合格標(biāo)本及10例NCCL核酸室間質(zhì)評標(biāo)本兩種檢測系統(tǒng)NAT檢測情況，詳見表2。

表2 17例ELISA不合格標(biāo)本及10例NCCL核酸室間質(zhì)評標(biāo)本兩種檢測系統(tǒng)NAT檢測情況

2.4 ELISA陰性標(biāo)本而羅氏拆分檢測NAT陽性標(biāo)本或諾華檢測NAT陽性鑒別情況 245例ELISA檢測陰性的標(biāo)本中，羅氏和諾華各檢出1例和4例NAT陽性標(biāo)本。通過鑒別實(shí)驗(yàn)，羅氏的1例NAT陽性標(biāo)本未能鑒別，諾華的4例NAT陽性標(biāo)本中1例為HBV，其余3例則未能鑒別。

3 討論

在本文中，245例ELISA檢測陰性獻(xiàn)血者的標(biāo)本中，羅氏系統(tǒng)檢出1例NAT陽性標(biāo)本(此例標(biāo)本諾華NAT檢測也為陽性)，而諾華系統(tǒng)則檢出4例NAT陽性的標(biāo)本，后通過鑒別實(shí)驗(yàn)顯示，羅氏的1例NAT陽性標(biāo)本未能鑒別，諾華的4例NAT陽性標(biāo)本中1例為HBV，其余3例則未能鑒別。此項(xiàng)結(jié)果也從一方面體現(xiàn)了混樣檢測與單人份檢測的差別：混樣檢測由于吸取檢測的量較單人份檢測少，當(dāng)病毒載量比較低時，混樣檢測就有可能檢測不出，這與國內(nèi)外的研究[9-11]結(jié)果也比較一致，有單人份檢出率 (1:9862)及8人份混樣檢測率(1:5l011)；還有單人份檢測率 (26:7613)及16人份混樣檢測率(27:16064)。因此，諾華系統(tǒng)采用單人份檢測方式在病毒載量比較低時實(shí)施血液核酸篩查可能有一定的優(yōu)勢，諾華1人份標(biāo)本吸取的量為500μl，羅氏為167μl，相對而言諾華檢測到病毒的概率大一些。從另一方面講，由于沒能做追蹤實(shí)驗(yàn)，無法確證諾華其余3例NAT檢測陽性的這部分標(biāo)本中是否存在病毒。因此，諾華未能鑒別的3例NAT陽性的標(biāo)本也有可能是假陽性，從節(jié)約血液資源上講，這部分血液經(jīng)NAT檢測有可能因?qū)嶒?yàn)的假陽性而造成血液資源的浪費(fèi)，從而影響無償獻(xiàn)血者的獻(xiàn)血積極性。此外，在本實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)了羅氏與諾華NAT檢測同為陽性的1例標(biāo)本中，鑒別實(shí)驗(yàn)卻未能鑒別，因條件所限，我們沒能進(jìn)一步追蹤檢測，因此是實(shí)驗(yàn)假陽性還是病毒載量過低導(dǎo)致未能鑒別就不得而知。

在11例HBsAg陽性標(biāo)本的NAT檢測結(jié)果顯示，羅氏和諾華系統(tǒng)分別有5例和3例檢出NAT陽性，其中同為陽性的有3例，5份抗-HCV陽性的標(biāo)本中兩者都有3例NAT檢出。此項(xiàng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示在ELISA陽性的標(biāo)本運(yùn)用NAT檢測中，羅氏系統(tǒng)較諾華系統(tǒng)有較高的檢出率。因?yàn)?1例HBsAg陽性標(biāo)本我們未進(jìn)行確證及鑒別實(shí)驗(yàn)，因此不能排除有ELISA實(shí)驗(yàn)假陽性的部分，但是可能也與HBV在血液中的存在形式有關(guān)，有可能是以小球形顆?；蚬軤铑w粒的形式存在，致NAT檢測不出。因此此項(xiàng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明，在日常的血篩工作中，不能有依賴NAT檢測結(jié)果的思想，因?yàn)镹AT技術(shù)和血清學(xué)檢測的病毒標(biāo)志物不同，NAT可以作為血清學(xué)的補(bǔ)充，但不能完全替代。在10份NCCL核酸室間質(zhì)評標(biāo)本中，兩種核酸檢測系統(tǒng)也全部正確檢出，這表明這兩種核酸檢測系統(tǒng)均能較好地勝任日常核酸檢測工作。

從日常檢測工作流程上看，諾華的應(yīng)用不如羅氏簡便，具體體現(xiàn)在：對設(shè)備維護(hù)的要求較高、維護(hù)時間長、加載試劑及耗材費(fèi)時；實(shí)驗(yàn)運(yùn)行中工作人員即使發(fā)現(xiàn)可當(dāng)時解決的問題也無法人為糾正。但是從檢測及出具檢驗(yàn)報(bào)告時間上看，羅氏系統(tǒng)可能會長于諾華系統(tǒng)，因?yàn)榱_氏為6人份混樣檢測，檢測前需進(jìn)行標(biāo)本6人份混樣，而且為減少拆分檢測，羅氏系統(tǒng)檢測一般需要等ELISA檢測結(jié)束后挑取ELISA陰性的標(biāo)本才能進(jìn)行，而諾華系統(tǒng)則與ELISA檢測同步進(jìn)行，單人份直接加樣檢測，減少了出具報(bào)告時間。再者，ELISA陰性的標(biāo)本進(jìn)行羅氏系統(tǒng)檢測時如果初混有反應(yīng)性，則需要進(jìn)行拆分檢測，又增加了工作量，出具報(bào)告的時間則又會相應(yīng)延長，不利于應(yīng)急標(biāo)本的檢測，而諾華是單人份檢測則不存在這種情況?？傊?，兩種核酸檢測系統(tǒng)在日常血篩檢測工作中各有優(yōu)勢和劣勢，但均能較好地勝任日常的核酸檢測工作。

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