HPLC分析煙草化學(xué)成分及香精指紋譜圖基礎(chǔ)研究

白凱

摘 要：對(duì)復(fù)雜體系組分分離以及分析的過程中現(xiàn)代色譜分析具有十分重要的作用，在色譜分析技術(shù)水平不斷提升的過程中使其得到了廣泛的使用。目前色譜分析技術(shù)在生命科學(xué)、食品科學(xué)、煙草化學(xué)中均具有重要的地位，特別是對(duì)于煙草等成分及其復(fù)雜的樣品具有良好的分離效果。

關(guān)鍵詞：HPLC 煙草化學(xué) 香精指紋譜圖

中圖分類號(hào)：R284 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1672-3791（2014）11（b）-0067-01

高效液相色譜（High Performance Liquid Chromatography）是當(dāng)前最為常見的分離檢測(cè)技術(shù)之一，常見的高效液相色譜又包括了吸附色譜、分配色譜離子、交換色譜以及凝膠色譜[1]。高效液相色譜在使用過程中需要高壓支持，這主要是由于流動(dòng)相在經(jīng)過色譜柱時(shí)受到的阻力較大。在高效液相色譜技術(shù)不斷發(fā)展的情況下其應(yīng)用范圍也得到了擴(kuò)展。

咖啡酸廣泛純?cè)谟诟鞣N天然產(chǎn)物當(dāng)中，在煙草當(dāng)中含量較高。以下為咖啡酸測(cè)定具體實(shí)驗(yàn)。

1 實(shí)驗(yàn)儀器及器材

高效液相色譜儀、超聲儀、電子天平、煙草樣品咖啡酸標(biāo)準(zhǔn)樣品（98.0%）、甲醇（色譜純）、甲酸（色譜純）、香豆素（分析純）、硝基苯（分析純）等。

2 溶液配制

萃取液為甲醇：水=4：1溶液；將內(nèi)標(biāo)物香豆素0.3000 g至于100 mL容量瓶中，用已經(jīng)配制的萃取液進(jìn)行稀釋、搖勻作為儲(chǔ)備液，準(zhǔn)確移取4.00 mL內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液置于100 mL容量瓶當(dāng)中，用萃取液稀釋、搖勻作為香豆素內(nèi)標(biāo)溶液；將0.2406 g硝基苯置入100 mL容量瓶當(dāng)中，萃取液稀釋、作為儲(chǔ)備液，準(zhǔn)確移取4.00 mL內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液置于100 mL容量瓶當(dāng)中，用萃取液稀釋、搖勻作為硝基苯內(nèi)標(biāo)溶液。

取0.20 g樣品充分研磨置于10 mL容量瓶中，置入5.00 mL內(nèi)標(biāo)液搖勻、稀釋。設(shè)定溫度為60℃進(jìn)行超聲萃取，完成后靜置并取上清液用有機(jī)膜過濾（孔徑為0.45 μm），采用高效液相色譜對(duì)其樣品溶液進(jìn)行分析。

3 色譜條件

色譜柱規(guī)格為4.6 mm*250 mm，5 μm，檢測(cè)采取UV330 nm進(jìn)行，流速為0.9 mL/min，柱溫為40℃。流動(dòng)相梯度具體如表1所示。

4 結(jié)果分析

分別繪制香豆素以及硝基苯的內(nèi)標(biāo)工作曲線得到曲線圖見圖1、表2。

以往咖啡酸主要是通過索氏提取法進(jìn)行萃取，但是該方法效率并不理想并且需要耗費(fèi)大量溶劑，時(shí)間較長(zhǎng)，即便是萃取完成后采取色譜分離時(shí)依舊需要較為復(fù)雜的預(yù)處理。采用超聲輔助萃取可克服上述方法的不足。經(jīng)過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)采取超聲輔助萃取時(shí)咖啡酸萃取量與溫度呈正相關(guān)關(guān)系，當(dāng)溫度達(dá)到60℃時(shí)萃取量最高。而當(dāng)溫度超過60℃時(shí)萃取量逐漸下降，由此可知該實(shí)驗(yàn)匯總咖啡酸的最佳萃取溫度為60℃。在色譜相的篩選過程中考慮到咖啡酸作為酚酸類物質(zhì)，因此可通過調(diào)節(jié)pH來控制其在色譜中的時(shí)間，以此獲取更優(yōu)的分離效果。上述研究中水相為0.1%甲酸，有機(jī)相將甲醇以及香豆素為內(nèi)標(biāo)可獲取較好的分離效果。在經(jīng)過測(cè)定、回收計(jì)算后得到樣品回收率如表3所示。

根據(jù)表3可得上述方法的平均回收率為97.26%。經(jīng)過總結(jié)可以看出該研究通過高效液相色譜與超聲波輔助萃取配合對(duì)咖啡酸進(jìn)行測(cè)定取得了較好的效果。與以往的溶劑萃取相比該方法效率更高且溶劑量使用也得到了控制，將其擴(kuò)展到其他植物咖啡酸含量測(cè)定均取得了較好的效果，由此可見上述分離方法具有良好的適用性。

5 結(jié)語

該研究通過煙草咖啡酸的測(cè)定對(duì)HPLC分析煙草化學(xué)成分測(cè)定進(jìn)行分析，取得了一定的成果，在此基礎(chǔ)上配合香精指紋譜圖可讓檢測(cè)分離效果得到提升，將該方法進(jìn)行推廣對(duì)其他復(fù)雜物質(zhì)的化學(xué)組分測(cè)定具有一定的意義。

參考文獻(xiàn)

[1] 田晨煦，徐小平，廖麗云.高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法分離鑒定綠原酸及其相關(guān)雜質(zhì)[J].色譜，2007（4）：496-501.

[2] 李福娟，蔡文生，邵學(xué)廣.反相高效液相色譜法分離測(cè)定煙草中的多酚類化合物[J].色譜，2007（4）：565-569.

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