基于21種醫(yī)院外用制劑微生物限度檢查方法學驗證的研究修改

何佩貞

（廣西醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院藥學部 廣西 南寧 530021）

基于21種醫(yī)院外用制劑微生物限度檢查方法學驗證的研究修改

何佩貞

（廣西醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院藥學部 廣西 南寧 530021）

目的：分析基于21種醫(yī)院外用制劑微生物限度檢查方法學驗證。方法：按照2010年版本的《中國藥典》規(guī)定，選取本市21種醫(yī)院外用制劑完成細菌、霉菌及酵母菌計數(shù)方法以及控制菌檢查法完成相應的檢驗工作。結果：在21種醫(yī)院外用制劑中，有14種外用制劑回收率≤70.00%，控制菌檢查結果得到，其中有8種制劑品種試驗菌無法檢出，需要進行深入的培養(yǎng)基稀釋法、薄膜過濾法、離心法以及中和法等方法來完成試驗。結論：被檢樣品一定要完成微生物限度檢查方法學驗證，這樣才可以促使檢驗結果具有高度的有效性以及準確性。

醫(yī)院外用制劑；微生物限度；檢查方法；驗證

試驗條件的好壞會直接影響到微生物試驗結果的影響性，尤其在制劑中混有大部分較強的抑菌成分的時候，如果只是使用常規(guī)性質的微生物限度檢查方法，得到的結果就很難順利的將 污染的微生物情況有效的反映出來。根據(jù)2010年版本的《中國藥典》中藥品的微生物限度檢查法的相關規(guī)定得到，需要使用相應的檢驗方法完成驗證。所以，本次研究選取本市21種醫(yī)院外用制劑完成細菌、霉菌及酵母菌計數(shù)方法以及控制菌檢查法完成相應的檢驗工作。以下為詳細的報道內容：

1.基本資料以及檢驗方法

1.1 基本資料

1.1.1 樣品采集

選取本市21種醫(yī)院外用制劑，詳細為：止汗擦劑、爐甘石洗劑、酒渣鼻洗劑、補骨脂酊、含酚爐甘石洗劑、雷佛奴爾溶液、硫磺白色洗劑、苯酚滴耳液、氫化可的松軟膏、醋酸洗必泰溶液、新氫松乳膏、尿素霜、氧化鋅軟膏、酮康唑霜、復方苯甲酸軟膏、水楊酸軟膏、硫磺霜、復方鋅氧粉、足癬浸泡劑、磺胺嘧啶銀霜、復方氯霉素洗劑。每一份制劑取樣3個批號。上述樣品均由3家醫(yī)院提供。

1.1.2 試驗菌株以及試藥配置

選取金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、黑曲霉、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌。營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基等，上述所有試劑都是分析純。

1.2 檢驗方法

嚴格按照2010年版本的《中國藥典》相關規(guī)定，每一份樣品分別開展超過三次的平行試驗，計算其回收率高低［1］。

1.2.1 制備菌液

1）選取大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌以及枯草芽孢桿菌營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)物，其培養(yǎng)溫度為37攝氏度，經過18～24小時的培育，取1ml的培養(yǎng)物以及9ml濃度的0.9%無菌氯化鈉溶液，完成10倍稀釋，直到10－6為止，統(tǒng)計其倍稀釋得到，含菌數(shù)為50～100cfu／ml，完成活菌計數(shù)，放置備用。

2）選取白色念珠菌改良馬丁液體培養(yǎng)物，其培養(yǎng)溫度為25攝氏度，經過18～24小時的培育，取1ml的培養(yǎng)物以及9ml濃度的無菌氯化鈉溶液，稀釋同上，統(tǒng)計其倍稀釋得到，含菌數(shù)同上，完成活菌計數(shù)，放置備用。

3）選取黑曲霉斜面培養(yǎng)物，其培養(yǎng)溫度為25攝氏度，經過7天的培育，在培養(yǎng)物加入4ml含0.05%聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液將孢子洗脫。將菌液吸取出來，之后取1ml的混合液以及9ml的鹽水，完成10倍稀釋，直到10－4為止，孢子數(shù)大致上是50～100cfu／ml的孢子懸液，放置備用［2］。

1.2.2 制備供試液

在上述液體制劑和混懸劑中選取10ml或10g的供試品，將PH值為7.0的無菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液加入樣品中，直到100ml，均勻混合在一起。最后完成1：10供試液的配制，放置一邊等測量。對上述難以溶于水的固體制劑以及半固體制劑，就需要選取5g的供試品，在其中加入5g的司盤80、10g的聚山梨酯80無菌混合物、3g的單硬脂酸甘油酯，將上述混合物放置燒杯中，使用無菌玻棒攪拌，待其成為團狀之后就在其中加入PH值為7.0的無菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液（溫度為45度）加入樣品中，直到100ml，邊加邊攪拌，最大程度的乳化供試品，作為1：20的供試液。使用最低稀釋級供試液完成試驗。

1.2.3 驗證試驗

驗證酵母菌計數(shù)方法、細菌計數(shù)方法以及霉菌計數(shù)方法。根據(jù)相應的藥典進行驗證試驗，4組試驗得到：首先是實驗組，選取1ml制備的供試液，同時選取50～100cfu的試驗菌，將其分別注入平皿，將瓊脂培養(yǎng)基傾入，每一株試驗菌需要平行制備兩個平皿，在培養(yǎng)完成之后需要對其菌數(shù)進行詳細的點計。其次菌液組，多所加的試驗菌數(shù)進行有效的測定。接下來是供試品對照組：選取跟試驗組一致供試液測定供試品的本底菌數(shù)。最后是稀釋劑對照組，供試品由相應的稀釋劑替代，將試驗菌加入，保持最終菌濃度為1ml供試液含50～100cfu，對其菌落數(shù)進行有效的測定［3］。

2.結果

經過實驗之后，基于21種醫(yī)院外用制劑中，有14種（66.67%）外用制劑回收率≤70.00%，控制菌檢查結果得到，其中有8種（38.09%）制劑品種試驗菌無法檢出，則需要開展深入的培養(yǎng)基稀釋法、薄膜過濾法、離心法以及中和法等方法來完成試驗。

3.討論

根據(jù)結果得到，需要使用很多種聯(lián)合方法才可以有效的消除抑菌活性。在開展醫(yī)院制劑的方法驗證活動的過程中，需要根據(jù)實際情況使用常規(guī)實驗方法以及培養(yǎng)基稀釋法或者是聯(lián)合使用中和法，最后還需要使用薄膜過濾法，按照上述順序完成工作［4］。因為薄膜過濾法雖然是一個較為可靠的方法之一，但是大部分難溶于水的醫(yī)院制劑而言，薄膜過濾法難以有效的完成操作，在完成試驗之后需要完成濾器的清洗，清洗起來非常的麻煩?？刂凭鷻z查的過程中因為存在增菌的培養(yǎng)，在細菌計數(shù)的時候村在抑菌品種，開展控制菌檢查的過程中都可以有效的完成試驗菌的檢出。綜上所述，被檢樣品一定要科學有效的完成微生物限度檢查方法學驗證，這樣才能夠促使檢驗結果具有高度的有效性以及準確性。

［1］ 左秀萍，賈立華.醫(yī)院制劑影響微生物限度檢查結果諸因素分析［J］.中國藥事，2012，04（08）：102－103

［2］ 孫嵐，何芳.5種醫(yī)院制劑微生物限度檢查法方法驗證［J］.中國醫(yī)院藥學雜志，2011，08（11）：552－556

［3］ 韋曦，邱雙成，王翠榮.29種醫(yī)院制劑微生物限度檢查方法驗證［J］.中國藥房，2012，08（01）：325－326

［4］ 雷柳冰，廖瑜.爐甘石薄荷腦洗劑微生物限度檢查方法的建立與驗證［J］.中國社區(qū)醫(yī)師（綜合版），2013，07（15）：1112－1113

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1009－6019（2015）07－0061－01