豬附紅細(xì)胞體病并發(fā)豬圓環(huán)病毒病的診治

宋 明 河南省濟(jì)源市畜牧局動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所 459000

豬附紅細(xì)胞體病是由豬附紅細(xì)胞體（又名紅細(xì)胞孢子蟲）寄生于細(xì)胞和血漿中而引起的一種原蟲病。主要引起豬（特別是仔豬）高熱、貧血、黃疸和全身發(fā)紅。豬圓環(huán)病毒病是由豬圓環(huán)病毒引起的傳染病，臨診特征為體質(zhì)下降、消瘦、貧血、黃疸、生長(zhǎng)發(fā)育不良、腹瀉、呼吸困難、母豬繁殖障礙和內(nèi)臟器官及皮膚的廣泛病理變化，特別是引起腎、脾臟及全身淋巴結(jié)的高度腫大、出血和壞死。該病還可導(dǎo)致豬群產(chǎn)生嚴(yán)重的免疫抑制，從而繼發(fā)或并發(fā)其他傳染病。

1 材料與方法

1.1 發(fā)病動(dòng)物

60kg 左右后備仔豬。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料

（1）血清樣品。從現(xiàn)場(chǎng)采集的血液樣品。

（2）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。臨床解剖送檢的活體病仔豬5 頭。

1.3 實(shí)驗(yàn)試劑

豬圓環(huán)病毒（PCV）核酸擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒和豬藍(lán)耳病病毒（PRRSV）核酸擴(kuò)增（論文數(shù)字和英文字母全部使用Times New Roman 狀態(tài)下）檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自北京索奧生物技術(shù)有限公司。

1.4 試驗(yàn)程序和方法

（1）觀察方法。按常規(guī)的流行病學(xué)、臨床癥狀和病理變化進(jìn)行綜合判斷。

（2）實(shí)驗(yàn)室診斷。血液壓片：取抗凝血或鮮血1滴加入3~4 倍生理鹽水稀釋，蓋上蓋玻片，1000 倍油鏡下觀察，可見大多數(shù)紅細(xì)胞邊緣呈鋸齒狀、星芒狀或不規(guī)則狀，并有微微顫動(dòng)，即可診斷為附紅細(xì)胞體感染陽性。組織涂片：將無菌采取的肝、脾、腎及淋巴結(jié)涂片，革蘭氏染色鏡檢。PRRSV 和PCV－2 的PCR 檢測(cè)：核酸提取。病料RNA 和DNA的提取分別用Trizol reagents(RNA 提取液)和核酸提取液B（DNA）提取。首先將血清稀釋，取100uL釋出血清加入500uL Trizol reagents（RNA 提取液）充分震蕩，混勻后室溫放置5 分鐘。加入100uL氯仿，用力振蕩15 秒，室溫靜置10 分鐘，4℃13000 rpm 離心5 分鐘。將上層水相轉(zhuǎn)移到干凈的離心管，加入等體積的異丙醇，充分混勻，13000 rpm 離心5 分鐘。棄上清液，加入75%DEPC 乙醇，充分混勻，13000 rpm 離心5 分鐘，吸去大部分乙醇。將提取管口敞口在室溫空氣中干燥5 分鐘，待乙醇揮發(fā)干凈，用20uL DEPC H2O 溶解沉淀。根據(jù)標(biāo)本數(shù)取逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)管，取2uL 上述獲得的RNA 并加入7uL PRRSV－SM RT MIX 引物進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。PRRSV 逆轉(zhuǎn)錄的反應(yīng)體系為25uL，反應(yīng)條件為30℃5 分鐘、42℃45 分鐘后98℃5 分鐘滅活轉(zhuǎn)錄酶。PCV－2 PCR 檢測(cè)則省去RNA 提取與逆轉(zhuǎn)錄步驟，直接進(jìn)行相應(yīng)的擴(kuò)增。擴(kuò)增PCR PRRSV PCR 擴(kuò)增的反應(yīng)體系為25uL。PRRSV PCR 擴(kuò)增反應(yīng)條件為：94℃變 性2min,93℃→2min，93℃30s →58℃30s→72℃30s,共35 個(gè)循環(huán)；PCV-2 PCR 擴(kuò)增反應(yīng)條件為：93℃→2min，后93℃30s→58℃30s→72℃30s,共35 個(gè)循環(huán)。電泳檢測(cè)。取15uL PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物直接用加樣槍點(diǎn)樣于2%瓊脂糖凝膠膠孔中，以5 v/cm 電壓，1xTAE 中電泳20 分鐘后，紫外燈下觀察結(jié)果。用DL2000 Marker 作為參照。PRRSV 和PCV－2 的陽性擴(kuò)增帶分別為396bp 和143bp。

2 結(jié)果和分析

2.1 按常規(guī)流行病學(xué)檢查方法所得結(jié)果

（1）臨床表現(xiàn)。臨床檢查發(fā)病豬在腹部、臀部以及后軀兩側(cè)皮膚上出現(xiàn)圓形或不規(guī)則形狀的黑色斑塊狀丘疹，丘疹向中央凹陷，已形成痂皮。也有個(gè)別豬在鼻端、四肢、下腹部和背部出現(xiàn)紫紅色瘀斑。病豬耳朵發(fā)紫，多數(shù)體溫升高在40℃左右；眼結(jié)膜蒼白，用手觸摸消瘦，豬頜下淋巴結(jié)和腹股溝淋巴結(jié)明顯腫大，尤其是腹股溝淋巴結(jié)。病豬前腔靜脈采血，可見血液稀薄似水。

（2）病理剖檢。共剖檢病豬5 頭，呈現(xiàn)多器官?gòu)V泛性病理損傷，病變程度差異較大。主要病變有皮下肌肉蒼白，全身淋巴結(jié)，特別是腹股溝、頜下和肺門淋巴結(jié)顯著腫大，達(dá)正常的2~3 倍，切面嚴(yán)重出血呈大理石狀，腸系膜淋巴結(jié)呈索狀腫脹；心包積液，心冠脂肪出血，心外膜和心內(nèi)膜有大量出血點(diǎn)；肺臟高度水腫，間質(zhì)增寬，個(gè)別豬肺尖葉和心葉實(shí)變，胸腔內(nèi)有較多積水；肝臟輕微腫大，膽囊充盈，膽汁濃稠；脾臟嚴(yán)重萎縮，腎臟嚴(yán)重腫脹、蒼白，在被膜下有大量出血點(diǎn)和白色壞死點(diǎn)，腎盂出血；膀胱黏膜呈彌漫性出血。胃黏膜形成大片潰瘍且胃門淋巴結(jié)腫大，小腸呈彌漫性出血，腸黏膜大部分已脫落，腸壁菲薄。

2.2 實(shí)驗(yàn)室診斷結(jié)果

血液壓片1000 倍油鏡下觀察，可見大多數(shù)紅細(xì)胞邊緣呈鋸齒狀、星芒狀或不規(guī)則狀,診斷為附紅細(xì)胞體感染陽性，標(biāo)記為：+++；組織涂片革蘭氏染色鏡檢，未見細(xì)菌；電泳檢測(cè)結(jié)果顯示豬圓環(huán)病毒（PCV－2）為陽性、藍(lán)耳病病毒（PRRSV）檢測(cè)為陰性。

根據(jù)發(fā)病情況、臨床癥狀、病理變化及實(shí)驗(yàn)室檢查，診斷為豬圓環(huán)病毒和附紅細(xì)胞體混和感染。

2.3 綜合防治

（1）加強(qiáng)飼養(yǎng)管理。提高豬群的營(yíng)養(yǎng)水平，使用配方合理的全價(jià)飼料，保證飼料中營(yíng)養(yǎng)成分平衡，并適當(dāng)補(bǔ)充維生素、氨基酸和微量元素。通過提高機(jī)體的健康水平，增強(qiáng)豬群的抗病能力。

（2）建立完善的生物安全體系。對(duì)發(fā)病輕微的豬進(jìn)行隔離治療，用2%~3%燒堿對(duì)豬舍消毒，切斷附紅細(xì)胞體病的傳播途徑。改進(jìn)飼養(yǎng)管理，減少應(yīng)激是控制繼發(fā)感染的關(guān)鍵。特別是仔豬斷奶后的3～4 周是預(yù)防該病最關(guān)鍵的時(shí)期，要降低飼養(yǎng)密度，減少豬群的應(yīng)激因素，做好豬瘟、豬偽狂犬病、豬細(xì)小病毒病和豬藍(lán)耳病疫苗的接種工作。在母豬產(chǎn)前1 周和產(chǎn)后1 周的飼料中添加土霉素等抗菌藥物，仔豬斷奶前1 周至斷奶后1 個(gè)月在飼料中添加強(qiáng)力霉素等抗菌藥，可有效減少該病在豬群中的流行。

（3）藥物預(yù)防與對(duì)癥治療。目前對(duì)豬附紅細(xì)胞體病療效較好的藥物有長(zhǎng)效土霉素、四環(huán)素和貝尼爾等，按說明劑量肌注，連用3～5 天。另外，對(duì)陽性豬群的貧血豬，可應(yīng)用鐵制劑(右旋糖酐鐵)、土霉素、維生素B12和維生素C 等對(duì)癥治療。

（4）對(duì)圓環(huán)病毒病目前尚無特效的治療藥物，應(yīng)早發(fā)現(xiàn)、早確診、早治療。對(duì)發(fā)病不嚴(yán)重的豬只，選用新型的抗病毒劑如干擾素、白細(xì)胞介導(dǎo)素、免疫球蛋白和轉(zhuǎn)移因子等進(jìn)行治療；同時(shí)采用黃芪多糖注射液并配合維生素B1、維生素B12和維生素c肌肉注射，增強(qiáng)豬自身免疫力。另外，可采用抗菌藥物控制繼發(fā)感染，如氟苯尼考、阿米卡星和鹽酸林可壯觀霉素等，盡量少用磺胺類藥物和地塞米松。

3 討論

（1）附紅細(xì)胞體病的死亡率很低，但與豬圓環(huán)病毒混合感染后，死亡率就會(huì)顯著上升，達(dá)60%以上，這也是造成病豬死亡率增高的重要原因。采取綜合措施后，該豬場(chǎng)的病情基本穩(wěn)定，到12月下旬逐漸恢復(fù)正常

（2）附紅細(xì)胞體是一種立克次氏體，主要附著在紅細(xì)胞上繁殖并導(dǎo)致紅細(xì)胞破損，以通過多種傳播途徑感染；目前在我國(guó)豬群中附紅細(xì)胞體感染廣泛存在，但多數(shù)情況下不引起明顯的臨床癥狀，僅為隱性帶毒。但當(dāng)飼養(yǎng)管理落后或應(yīng)激因素使豬群免疫力下降時(shí)，該病原體大量繁殖，破壞紅細(xì)胞，導(dǎo)致嚴(yán)重血液凝固障礙，引起出血和溶血。同時(shí)使紅細(xì)胞膜抗原發(fā)生改變，被自身免疫系統(tǒng)視為異物，導(dǎo)致自身免疫溶血性貧血和免疫抑制。但通過采取有效的預(yù)防措施，該病可以完全控制。主要是切斷傳播途徑，如定期殺滅蚊蠅等節(jié)肢動(dòng)物、避免注射針頭以及閹割手術(shù)器械污染、加強(qiáng)管理防止豬群爭(zhēng)斗、亂咬等措施。在飼料中定期添加土霉素和強(qiáng)力霉素等藥物比較有效。

（3）PCV 主要在豬的單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞中復(fù)制，可在支氣管上皮細(xì)胞、腎小管上皮細(xì)胞和淋巴細(xì)胞中增殖。病毒隨糞便和鼻液排出體外，主要經(jīng)消化道和呼吸道感染，懷孕母豬感染后可經(jīng)胎盤傳染給仔豬。飼養(yǎng)管理不良、環(huán)境條件差、氣候突變、豬群密度大、不同日齡的仔豬混養(yǎng)和從多家豬場(chǎng)引種均可誘發(fā)該病。因此該病的關(guān)鍵在于預(yù)防。如加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，降低飼養(yǎng)密度，實(shí)行全進(jìn)全出制，最好自繁自養(yǎng)；減少應(yīng)激因素，加強(qiáng)營(yíng)養(yǎng)，提高豬群的整體免疫力；實(shí)行嚴(yán)格的生物安全措施，防止細(xì)菌、支原體及其他病毒侵入豬群；對(duì)早期發(fā)現(xiàn)的疑似感染豬要詳細(xì)檢查、隔離和淘汰，避免從疫區(qū)引種；加強(qiáng)消毒。