γ干擾素誘導(dǎo)蛋白10對糖尿病合并活動性肺結(jié)核的輔助診療價值

何花，周玉皆 ，馮梟 ，宋梅梅，文高艷，朱珠，黃磊，費(fèi)賢樹 ，袁廣琴，曾誼

(1.南京市胸科醫(yī)院 鑒別診斷科，江蘇 南京 210029； 2.南京市鼓樓醫(yī)院 呼吸科，江蘇 南京 210008)

·論 著·

γ干擾素誘導(dǎo)蛋白10對糖尿病合并活動性肺結(jié)核的輔助診療價值

何花1，周玉皆2，馮梟1，宋梅梅1，文高艷1，朱珠1，黃磊1，費(fèi)賢樹1，袁廣琴1，曾誼1

(1.南京市胸科醫(yī)院 鑒別診斷科，江蘇 南京 210029； 2.南京市鼓樓醫(yī)院 呼吸科，江蘇 南京 210008)

目的：探討γ干擾素誘導(dǎo)蛋白10(IP-10)對糖尿病合并活動性肺結(jié)核診療的臨床價值。方法：選取糖尿病合并活動性肺結(jié)核患者10例、活動性肺結(jié)核患者34例、非結(jié)核肺部疾病患者10例、糖尿病患者10例及健康志愿者12例，檢測血IP-10質(zhì)量濃度，在抗結(jié)核治療2個月后復(fù)測糖尿病合并活動性肺結(jié)核組血IP-10質(zhì)量濃度，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果：糖尿病合并活動性肺結(jié)核組抗結(jié)核治療前后的IP-10質(zhì)量濃度分別為(410.35±121.36)、(270.11±94.25)ng·L-1，活動性肺結(jié)核組(195.61±70.71)ng·L-1，非結(jié)核肺部疾病組(106.27±52.34)ng·L-1，糖尿病組(112.77±32.47)ng·L-1，健康組(48.12±31.43)ng·L-1，糖尿病合并活動性肺結(jié)核組的IP-10質(zhì)量濃度均高于其他4組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01)，糖尿病合并活動性肺結(jié)核組抗結(jié)核治療2個月后血IP-10質(zhì)量濃度低于抗結(jié)核治療前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)論：糖尿病合并活動性肺結(jié)核患者血IP-10質(zhì)量濃度明顯升高，經(jīng)抗結(jié)核治療后下降，其可作為診斷及評估抗結(jié)核治療療效的輔助指標(biāo)。

γ干擾素誘導(dǎo)蛋白10； 肺結(jié)核； 糖尿病

自20世紀(jì)80年代中期以來，結(jié)核病在全球呈現(xiàn)惡化的趨勢，尤其是在發(fā)展中國家，因?yàn)槿丝诿芗?、流動頻繁，經(jīng)濟(jì)條件較差、貧困、營養(yǎng)不足，空氣質(zhì)量差甚至出現(xiàn)持續(xù)霧霾天氣等多種因素，導(dǎo)致結(jié)核病患病數(shù)出現(xiàn)明顯上升趨勢；同時，由于人免疫缺陷病毒(HIV)的流行，多重耐藥的增多，加上缺乏對結(jié)核病疫情的警惕性和復(fù)雜性的深刻認(rèn)識，導(dǎo)致結(jié)核病在許多國家和地區(qū)形勢更為嚴(yán)峻。因此，加強(qiáng)結(jié)核病的防治迫在眉睫。一些免疫力低下疾病合并活動性肺結(jié)核，如糖尿病，常規(guī)檢查如PPD、血結(jié)核抗體、T-SPOT等常常為假陰性[1]，痰集菌、痰結(jié)核菌培養(yǎng)、胸部CT等評估抗結(jié)核治療效果存在敏感度低、歷時長、價格昂貴等缺點(diǎn)。我們通過對我院糖尿病合并活動性肺結(jié)核患者進(jìn)行血IP-10質(zhì)量濃度檢測，以探討IP-10對糖尿病合并活動性肺結(jié)核的診療價值。

1 對象及方法

1.1 對象

選擇2012年6月至2014年6月在本院住院確診的糖尿病合并活動性肺結(jié)核、活動性肺結(jié)核、非結(jié)核肺部疾病等患者，門診體檢的糖尿病患者及健康志愿者。糖尿病合并活動性肺結(jié)核組：10例，所有病例均確診為糖尿病，并根據(jù)活動性肺結(jié)核診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]確診為活動性肺結(jié)核。其中男7例，女3例；年齡25～83歲，平均(60.00±17.93)歲。活動性肺結(jié)核組：34例，不合并糖尿病，無基礎(chǔ)疾病(剔除免疫病及腫瘤等疾病)，根據(jù)活動性肺結(jié)核診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]確診為活動性肺結(jié)核。其中男20例，女14例；年齡18～65歲，平均(34.18±15.10)歲。非結(jié)核肺部疾病組：10例，診斷為肺炎等其它肺部疾病病例。其中男5例，女5例；年齡29～67歲，平均(44.20±11.72)歲。糖尿病組：10例，門診體檢的糖尿病患者，不合并活動性肺結(jié)核。其中男6例，女4例；年齡53～89歲，平均(44.91±20.41)歲。正常健康組：12例，來自我院實(shí)習(xí)的醫(yī)學(xué)院校健康志愿者。其中男5例，女7例；年齡22～24歲，平均(23.00±0.60)歲。

1.2 方法

所有入組病例均在治療前空腹采取靜脈血5ml，2h內(nèi)以2500r·min-1離心15min，分離血清，裝于Eppendorf管，于-80℃冰箱貯存待測。ELISA法檢測血IP-10質(zhì)量濃度，主要試劑盒為human IP-10(美國RD公司生產(chǎn)，批號為305616)，實(shí)際操作按說明書要求進(jìn)行：(1) 準(zhǔn)備好所有的試劑，標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣本；(2) 將沒有使用的微量孔放入密封袋中再次密封，將使用的微量孔布于96孔板上；(3) 在測定血清樣本時，加入75μl的稀釋液；(4) 在測定血清樣本時，加入75μl的標(biāo)準(zhǔn)品、空白對照和待測樣本；(5) 用蓋板膜蓋住96孔板，放入室溫下孵育2h；(6) 棄去液體，吸水紙拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此反復(fù)洗板4次(也可以用洗板機(jī)洗板)；(7) 在每一孔中加入200μl酶標(biāo)結(jié)合物，用新的蓋板膜蓋住96孔板，放入室溫下孵育2h;(8) 重復(fù)步驟6；(9) 在每一孔中加入200μl底物，在室溫下孵育30min，此步須避光；(10) 在每一孔中加入50μl終止液，在30min內(nèi)測定每孔的吸光度，測定波長設(shè)為450nm，校正波長為540～570nm。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 20.0軟件包處理，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，行方差分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

抗結(jié)核治療前糖尿病合并活動性肺結(jié)核組、活動性肺結(jié)核組、非結(jié)核肺部疾病組、糖尿病組和健康組血IP-10質(zhì)量濃度分別為(410.35±121.36)、(195.61±70.71)、(106.27±52.34)、(112.77±32.47)和(48.12±31.43)ng·L-1，糖尿病合并活動性肺結(jié)核組患者血清IP-10質(zhì)量濃度高于其余4組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01)；且抗結(jié)核治療2個月后血IP-10質(zhì)量濃度為(270.11±94.25)ng·L-1，低于抗結(jié)核治療前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),但仍高于非結(jié)核肺部疾病組、糖尿病組、健康組(均P<0.01)。

3 討 論

機(jī)體的抗結(jié)核免疫反應(yīng)主要是巨噬細(xì)胞的細(xì)胞免疫應(yīng)答來完成的，而這個過程是由T細(xì)胞介導(dǎo)的，以Thl細(xì)胞免疫反應(yīng)為主。IP-10是近年來發(fā)現(xiàn)的一種趨化因子，屬于CXC亞家族，可以趨化高度表達(dá)其受體CXCR3的多種炎癥細(xì)胞，對淋巴細(xì)胞的趨化作用尤為明顯[3]，因此認(rèn)為Th1型炎癥反應(yīng)性疾病與趨化因子IP-10密切相關(guān)。檢測活動性肺結(jié)核、肺炎、原發(fā)性肺癌3組患者血清IP-10水平的結(jié)果顯示，肺結(jié)核組IP-10水平顯著升高(P<0.0001)，故認(rèn)為IP-10可能成為肺結(jié)核的鑒別診斷指標(biāo)[4]。

Ruhwald等[5]發(fā)現(xiàn)對于鑒別結(jié)核感染者和非結(jié)核感染者，IP-10的靈敏度和特異性高于IFN-γ，對于免疫功能低下或缺陷的人群，IP-10也比IFN-γ更有意義。Latorre等[6]的研究發(fā)現(xiàn)，兒童免疫力低下，聯(lián)合IP-10與IFN-γ可以更好地鑒別兒童活動性結(jié)核病和LTBI。Kibiki等[7]檢測HIV陽性結(jié)核病患者發(fā)現(xiàn)，IP-10主要產(chǎn)生于上皮細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞，而不是淋巴細(xì)胞，考慮可能是因?yàn)镠IV感染導(dǎo)致淋巴細(xì)胞減少。Kibiki等[7]對結(jié)核病高發(fā)區(qū)(印度)66例HIV陽性患者、28例活動性肺結(jié)核患者、38例非結(jié)核病患者進(jìn)行了研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在活動性肺結(jié)核患者中IP-10的診斷靈敏度為75%(高于INF-γ的42.9%)，但特異度為57.9%(低于INF-γ的78.9%)。另有2項(xiàng)研究也表明在HIV陽性結(jié)核病患者中IP-10檢測水平高于INF-γ，說明IP-10對于診斷合并免疫抑制的結(jié)核病方面具有一定的優(yōu)勢[8-9]。

糖尿病患者自身免疫力低下，是罹患肺結(jié)核的易感人群及高危人群，糖尿病患者發(fā)生肺結(jié)核的幾率是正常人的5～10 倍[10]。同時，有研究表明肺結(jié)核患者出現(xiàn)糖尿病的幾率也高于正常人，兩種疾病相互牽連共同消耗患者體質(zhì)，是較為棘手的共病形式[11]。因此，肺結(jié)核合并糖尿病的研究值得深入。

本研究結(jié)果提示，IP-10在診斷糖尿病合并活動性肺結(jié)核與非結(jié)核肺部疾病的鑒別診斷中有臨床價值；糖尿病合并活動性肺結(jié)核的血IP-10水平高于活動性肺結(jié)核，提示IP-10可能與活動性肺結(jié)核合并糖尿病關(guān)系更密切，但具體作用機(jī)制仍有待于進(jìn)一步研究。

單純T淋巴細(xì)胞亞群計(jì)數(shù)檢測雖然在一定程度上反映了機(jī)體的免疫狀況，但不能作為判斷病情變化及預(yù)后的主要依據(jù)，T細(xì)胞亞群變化與排菌狀態(tài)及病變范圍無明顯關(guān)聯(lián)[12]；但本研究糖尿病合并活動性肺結(jié)核組在抗結(jié)核治療后血IP-10水平較治療前明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，分析認(rèn)為經(jīng)過正規(guī)抗結(jié)核治療2個月，患者體內(nèi)結(jié)核桿菌被殺死、抑制，細(xì)胞免疫減弱，γ-干擾素分泌減少，誘導(dǎo)產(chǎn)生的血IP-10水平也在逐漸下降。由此認(rèn)為，IP-10對糖尿病合并活動性肺結(jié)核患者抗結(jié)核治療療效具有評估意義。糖尿病合并活動性肺結(jié)核組抗結(jié)核治療后血IP-10水平均高于非結(jié)核肺部疾病組、糖尿病組、健康組(均P<0.01)，提示IP-10可能參與了肺結(jié)核免疫過程。

今后通過進(jìn)一步對IP-10的檢測及監(jiān)測，以及對其在糖尿病合并活動性肺結(jié)核中的作用機(jī)制的研究，有望協(xié)助糖尿病合并活動性肺結(jié)核患者的診斷及治療。

[1] 趙玉榮，張培元，李金紅.抗結(jié)核抗體檢測及其結(jié)果分析[J].中國防癆雜志，2000，22(2):88-90.

[2] 中華醫(yī)學(xué)會結(jié)核病學(xué)分會.肺結(jié)核診斷和治療指南[J].中華結(jié)核和呼吸雜志，2001，24(2)：70-74．

[3] 范夢柏，王秀娥，宋承平，等.細(xì)胞因子TNF-α、IFN-γ、IP-10對結(jié)核性胸腔積液診斷價值的研究[J].中國防癆雜志，2012，34(8):550-552．

[4] 潘燕玉，李津，程小星.肺結(jié)核患者特異性抗原反應(yīng)性IP-10的表達(dá)特點(diǎn)[J].臨床肺科雜志，2013，18(1):103-104．

[5] RUHWALD M，DOMINGUE Z J，LATORRE I，et al.A multicentre evaluation of the accuracy and performance of IP-10 for the diagnosis of infection with M. tuberculosis[J].Tuberculosis，2011，91(3):260-267.

[6] LATORRE I,DIAZ J,MIALDEA I，et al.IP-10 is an accurate biomarker for the diagnosis of tuberculosis in children[J].Infect，2014，69(6):590-599.

[7] KIBIKI G S，MYERS L C，KALAMBO C F，et al.Bronchoalveolar neutro-phils，interferon gamma-inducible protein 10 and interleukin-7 in AIDS-associated tuberculosis[J].CIin ExP Immunol，2007，148(2):254-259.

[8] KABEER B S，SIKHAMANI R，RAJA A，et al.Comparison of interferon gamma and interferon gamma-inducible protein-10 secretion in HIV-tuberculosis patients[J].AIDS，2010，24(2):323-325.

[9] AABYE M G，RUHWALD M，PRAYGOD G，et al.Potential of interferon-γ-inducible protein 10 in improving tuberculosis diagnosis in HIV-infected patients[J].Eur Respir J，2010，36(6):1488-1490.

[10] 黃建飛.肺結(jié)核合并糖尿病治療進(jìn)展[J].中國藥物經(jīng)濟(jì)學(xué)，2013，2(1):365-368.

[11] 趙亞軍，譚波.糖尿病合并肺結(jié)核病的臨床探討[J].中國現(xiàn)代醫(yī)生，2009，47(13):139-140.

[12] 鄧國炯，郭春輝.初治活動性肺結(jié)核T淋巴細(xì)胞亞群檢測及其臨床意義[J].現(xiàn)代醫(yī)學(xué)，2007，35(6):468-470．

Clinical value of interferon-inducible protein-10 in diagnosis and treatment of diabetes and active tuberculosis

HE Hua1，ZHOU Yu-jie2，F(xiàn)ENG Xiao1，SONG Mei-mei1，WEN Gao-yan1，ZHU Zhu1，HUANG Lei1，F(xiàn)EI Xian-shu1，YUAN Guang-qin1，ZENG Yi1

(1.DepartmentofDifferentialDiagnosis，NanjingChestHospital，Nanjing210029，China; 2.DepartmentofRespiratory，NanjingDrumTowerHospital，Nanjing210008，China)

Objective: To investigate the value of interferon-inducible protein-10 (IP-10) in clinical diagnosis and treatment of diabetes and active tuberculosis.Methods:10 patients with diabetes and active tuberculosis，34 patients with active tuberculosis，10 patients with non-tuberculosis pulmonary disease，10 patients with diabetes，and 12 healthy volunteers were enrolled for serum IP-10 detection and statistical analysis. Serum IP-10 levels were re-examined in diabetes patients with active pulmonary tuberculosis who received anti-tuberculosis treatment for two months，and the statistical analysis was performed.Results:The serum IP-10 concentrations were (410.35±121.36), (195.61±70.71),(106.27±52.34),(112.77±32.47),(48.12±31.43)ng·L-1in diabetes and active tuberculosis group, active tuberculosis group, non-tuberculosis pulmonary disease group, diabetes group and healthy volunteers group, respectively.The serum IP-10 concentrations in patients with diabetes and active tuberculosis were significantly higher than the other 4 groups (P<0.01).Diabetes with active pulmonary tuberculosis patients exhibited decreased serum IP-10 levels after anti-tuberculosis treatment for two months (P<0.01).Conclusion:Serum IP-10 concentration increases in patients with diabetes and active tuberculosis，and decreases after anti-tuberculosis treatment. IP-10 could be used as an auxiliary index in the diagnosis and treatment of diabetes and active tuberculosis．

gamma interferon induced protein 10； tuberculosis； diabetes

2015-06-16

2015-08-30

2013年度南京市科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(2013sh352004)

何花(1981-)，女，江蘇南京人，在讀碩士研究生。E-mail:2805992877@qq.com

曾誼 E-mail:zengyi163@sohu.com

何花，周玉皆，馮梟，等.γ干擾素誘導(dǎo)蛋白10對糖尿病合并活動性肺結(jié)核的輔助診療價值[J].東南大學(xué)學(xué)報：醫(yī)學(xué)版，2015，34(6)：916-918.

R587.1; R521

A

1671-6264(2015)06-0916-03

10.3969/j.issn.1671-6264.2015.06．013