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    顛倒散拆方對(duì)兔耳痤瘡模型皮脂腺分泌及粉刺的影響*

    2015-03-22 04:25:26文昌暉胡文韜
    陜西中醫(yī) 2015年11期
    關(guān)鍵詞:分泌量皮脂腺組方

    唐 挺 賈 敏 文昌暉 胡文韜

    貴陽中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院皮膚科(貴陽 550002)

    ·實(shí)驗(yàn)研究·

    顛倒散拆方對(duì)兔耳痤瘡模型皮脂腺分泌及粉刺的影響*

    唐 挺?賈 敏 文昌暉 胡文韜

    貴陽中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院皮膚科(貴陽 550002)

    目的:探尋一個(gè)治療痤瘡的不良反應(yīng)少且療效好的顛倒散的最佳組方比例。 方法:兔耳痤瘡造模成功后,將32只白兔分為A、B、C、D 組,每組8只。其中A組給予顛倒散原方(大黃與硫磺比例為=1∶1)外搽;B組予改良顛倒散(大黃與硫磺比例為=1∶2),C組予大黃與硫磺比例為=2∶1的顛倒散外搽。1d1次,連續(xù)2周。模型對(duì)照D組不接受任何處理。觀察指標(biāo):治療期間及治療后觀察粉刺數(shù)量、皮脂腺分泌量以及不良反應(yīng)。結(jié)果:實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí),A、B、C三組的粉刺數(shù)量較治療前均顯著減少,且與模型對(duì)照D組比較,差異具有顯著性。治療1周和2周后,三組24h皮脂腺分泌量均較D組下降,而同時(shí)B組皮脂腺分泌總量最少,但發(fā)生紅斑及表皮剝蝕的幾率最高。結(jié)論:增加硫磺在顛倒散方中的比例(或降低大黃的比例)更能抑制皮脂的分泌,但不良反應(yīng)相應(yīng)增加;但降低硫磺的比例(或增加大黃的比例)可減少不良反應(yīng)的發(fā)生,但不會(huì)降低其抗粉刺作用。

    痤瘡為皮膚科最常見的慢性炎癥性毛囊皮脂腺疾病,80%~90%的青少年患過該病。由于好發(fā)于面部,易遺留色素沉著、囊腫或瘢痕,具有一定的損容性,可影響青少年的身心健康,應(yīng)予重視。

    顛倒散出自于《醫(yī)宗金鑒·外科心法要訣》,是祖國醫(yī)學(xué)治療肺風(fēng)粉刺(痤瘡)、面油風(fēng)(脂溢性皮炎)、酒渣鼻等皮膚病的經(jīng)典外用制劑。驗(yàn)之臨床[1-3],療效顯著。但易出現(xiàn)接觸性皮炎等不良反應(yīng)。本研究擬將顛倒散的拆方后對(duì)兔痤瘡模型進(jìn)行在體實(shí)驗(yàn),以探索一個(gè)療效較好,同時(shí)不良反應(yīng)最小的組方比例。現(xiàn)報(bào)道如下。

    1 材 料 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 實(shí)驗(yàn)用新西蘭白兔,普通級(jí),雌雄各半,每只體重2.0±0.2kg。由貴陽中醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究所提供。飼養(yǎng)環(huán)境:室溫20~24℃,相對(duì)濕度50%~55%,通風(fēng),自由活動(dòng),自由攝水進(jìn)食。

    1.2 藥品與試劑 2%煤焦油的配制:使用95%酒精將50%煤焦油加熱攪拌、緩慢溶解,配制成2%煤焦油酒精溶液。 顛倒散的制備:我院藥劑科負(fù)責(zé)加工。將制備的大黃粉與硫磺粉按比例(大黃∶硫磺1∶1與 1∶2以及 2∶1)提前配制成相應(yīng)實(shí)驗(yàn)樣品,每份500g。制作兩枚圓形的印章,中央雕空,外緣留取一直徑為2cm的規(guī)則連續(xù)性凸起外環(huán)。由美藍(lán)注射液制作的印泥盒2個(gè)。吸脂膜:Mentholatum Acnes痤瘡專用吸脂膜(8.1cm×5.3cm)。

    1.3 儀 器 天津中醫(yī)藥大學(xué)藥物研究所實(shí)驗(yàn)室提供:電子分析天平(METTLER TOLEDO),精確度(1/100000g);SONY(DSC-H20)Camera及Adobe Photo-shop CS4。

    2 方 法 2.1 動(dòng)物造模與分組 動(dòng)物造模:適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后,參考Kligman痤瘡造模方法[4]并改良如下:于每只白兔右耳內(nèi)側(cè)耳管開口處的中央?yún)^(qū)域選為造模區(qū)域,先用酒精棉球清除兔耳內(nèi)側(cè)皮脂,待完全干燥后將環(huán)形印章蘸取美藍(lán)印泥后蓋上印章,此直徑為2cm的深藍(lán)色環(huán)(如顏色淡化時(shí)應(yīng)在相同部位補(bǔ)蓋印章)內(nèi)即為造模區(qū)域。待干燥后在環(huán)內(nèi)均勻涂搽2%煤焦油,0.2mL/次,1d1次,連續(xù)14d,第15日觀察評(píng)估造模是否成功:如果觀察到造模區(qū)域角質(zhì)較周邊增厚,并有粉刺形成,則提示造模成功。

    分組:將32只模型兔分為A、B、C、D組,每組8只,編號(hào)并用75%酒精清除兔耳內(nèi)側(cè)煤焦油殘?jiān)?/p>

    2.2 顛倒散干預(yù)方法 每日新鮮配制相應(yīng)比例的顛倒散:取100g顛倒散樣品置于配藥皿中,緩慢滴入常溫礦泉水,攪拌均勻致糊狀,以掛在藥皿外側(cè)壁上(或涂抹在手臂上)不滴落為度。然后將調(diào)制好的大黃∶硫磺比例為1∶1的顛倒散用藥匙均勻涂抹于A組兔耳粉刺區(qū)域;B組顛倒散比例為大黃∶硫磺=1∶2;C組為2∶1;D組不用藥。1h后去除藥物并用清水清除藥物殘?jiān)?d1次,連續(xù)2周。

    2.3 觀察指標(biāo)與方法 粉刺區(qū)24h皮脂分泌量:提前準(zhǔn)備清潔干燥安珀瓶并編號(hào)。用電子分析天平稱取1張吸脂膜,記錄重量后裝入安珀瓶內(nèi)立即蓋上橡膠塞備用。造模第16日取出吸脂膜,對(duì)折后用拇指指腹適當(dāng)力度按壓在粉刺區(qū)域,輕柔按摩并移動(dòng)吸脂膜位置吸取皮脂,持續(xù)1min后將吸脂膜裝回瓶內(nèi),蓋緊橡膠塞,在瓶上標(biāo)記兔子編號(hào),當(dāng)日稱取吸脂后的吸脂膜重量,減去吸脂膜原始重量之差值計(jì)為皮疹區(qū)每日皮脂分泌量。分別于造模成功并分組后次日、用藥1周及2周各采標(biāo)本一次,并于每次采集皮脂前一天使用酒精棉球清除皮疹區(qū)域表面皮脂。

    皮疹區(qū)粉刺數(shù)量:分別于造模成功后、用藥第15天,暴露、展平兔耳皮疹區(qū),各拍照1次,用Adobe Photo-shop CS4輔助粉刺計(jì)數(shù)。

    不良反應(yīng):每次用藥后觀察涂藥區(qū)域是否出現(xiàn)紅斑、腫脹、丘疹、水皰、糜爛、滲出、結(jié)痂、表皮剝蝕等皮膚損害以及其它與痤瘡無關(guān)的皮疹,并記錄出現(xiàn)、消失的時(shí)間以及皮疹數(shù)量。

    3 結(jié) 果 3.1 正常兔耳外觀 呈淡粉紅色,質(zhì)地柔軟,光滑潤澤,表面可見清晰的血管網(wǎng),毛囊口大小均勻且排列整齊(見圖1)。

    3.2 造模改變 兔耳涂布煤焦油1周后皮膚粗糙且增厚,毛囊口逐漸擴(kuò)張并輕度隆起,可見少量白頭粉刺。2 周后,皮損區(qū)域厚度和硬度均增加,表面可見薄層淡黃褐色油膩性痂殼,酒精清潔后可見毛囊口明顯擴(kuò)張,其中央見白色米粒狀粉刺凸出,帶珍珠樣光澤(見圖2)。

    3.3 藥物對(duì)粉刺的影響 涂抹顛倒散2周后(見圖3),實(shí)驗(yàn)組(A、B、C組)皮損變薄變軟,毛囊口逐漸縮小;粉刺體積縮小,數(shù)量減少,并可見粉刺脫落后凹點(diǎn)狀毛囊口,部分有輕微脫屑;模型組(D組)皮損區(qū)仍有不同程度增厚,表面粗糙,部分見點(diǎn)、片狀黃褐色油膩性痂皮,質(zhì)地稍變軟;粉刺數(shù)量、毛囊口及粉刺體積較前稍改善(見圖4)。

    表1可見,治療前各組粉刺數(shù)量差異無顯著性(P>0.05)。治療后2周總體粉刺計(jì)數(shù)均較治療前顯著減少(P<0.05);而組間差異顯著(P<0.05),A、B、C組減少程度優(yōu)于D組,但A、B、C組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(見表1)。

    表1 干預(yù)前后粉刺數(shù)量變化情況

    注:治療前組間比較,F(xiàn)=0.305P=0.822;治療2周后組間比較:F=3.189P=0.039;△與D組比較,P=0.021; ▲與D組比較,P=0.009;◇與D組比較,P=0.045;其余組間比較,P>0.05

    3.4 藥物干預(yù)對(duì)皮脂分泌情況的影響 兔耳外觀:用藥1周后,A、B、C組兔耳皮損區(qū)皮膚逐漸干燥、油膩感減輕。用藥2周后,皮損區(qū)進(jìn)一步干燥,油膩感減輕并同時(shí)見少量脫屑;D組皮損區(qū)皮膚稍干燥、油膩感稍減輕。

    24h皮脂腺分泌量(μg):經(jīng)重復(fù)測(cè)量方差分析,Mauchly球形檢驗(yàn)P<0.05,采用Greenhouse-Geisser檢驗(yàn):時(shí)間*分組(F=4.919,P=0.001),提示分組與時(shí)點(diǎn)間存在交互作用。時(shí)間(F=74.915,P=0.000),提示不同時(shí)點(diǎn)變化趨勢(shì)有差異,由表2可看出:隨治療時(shí)間的延長,皮脂腺分泌量逐步減少。其中A、B、C組:用藥前與治療后1周、2周,差異均有顯著性;而D組僅用藥前與用藥2周后有差異。分組(F=3.295,P=0.035),提示不同組皮脂腺分泌量變化趨勢(shì)有差異,而A、B、C組減少程度優(yōu)于D組。用藥后1、2周A、B、C組皮脂腺分泌量均低于模型組(D組),提示試驗(yàn)組(即各比例顛倒散)均有顯著抑制皮脂腺分泌的作用;而2周后B組顯著低于A、C、D組,提示B組具有更顯著的抑制皮脂腺分泌的作用。

    表2 用藥前、后各組24h皮脂腺分泌量

    注:不同時(shí)點(diǎn)比較:A、B、C組:用藥前VS用藥后1周以及用藥后1周 VS用藥后2周,P均<0.05。但D組:用藥前與用藥后1周以及用藥后1周與用藥后2周比較,P均>0.05,但用藥前與用藥后2周比較,P<0.05。組間比較:用藥后1周,D組與A、B、C組差異均有顯著性(P<0.05);其余組間無顯著性差異。用藥后2周:B組與A、C、D組差異均有顯著性(P<0.05);D組與A、B、C組差異均有顯著性(P<0.05);而A、C組間無顯著差異(P>0.05)

    3.5 皮膚對(duì)藥物干預(yù)的不良反應(yīng) 主要表現(xiàn)為紅斑、脫屑及表皮剝蝕,其中B組發(fā)生率最高,其次是A組、C組,且組間差異均有顯著性(P<0.05)。未觀察到涂藥區(qū)域出現(xiàn)腫脹、丘疹、水皰、糜爛、滲出等其它與痤瘡無關(guān)的皮損。

    表3 粉刺區(qū)出現(xiàn)不良反應(yīng)情況 (n,%)

    4 討 論 痤瘡為好發(fā)于青少年的常見皮膚病,可影響世界94%的人口,已成為全球第8大最常見的疾病[5]。由于該病好發(fā)于面部,易遺留色素沉著、囊腫或瘢痕,具有一定的損容性。故可導(dǎo)致焦慮、抑郁等而影響心理健康及自信心。

    該病發(fā)病機(jī)制尚未完全明確,主要認(rèn)為與毛囊皮脂腺角化異常、細(xì)菌感染、激素水平紊亂有關(guān)。治療上以抗生素以及改善角化的藥物為主,但抗生素耐藥問題已被廣泛關(guān)注,而韓國學(xué)者M(jìn)oon[6]及香港Luk[7]報(bào)道分離于臨床痤瘡患者的痤瘡丙酸桿菌的耐藥率分別為36.7%和54.8%,且Luk還發(fā)現(xiàn)其耐藥性與年齡及治療持續(xù)的時(shí)間相關(guān)。隨著抗生素耐藥性的急劇增加,同時(shí)抗角化藥維A酸類衍生物因其致畸等諸多不良反應(yīng)又在一定程度上限制了臨床應(yīng)用范圍,因此,我國學(xué)者一直致力于尋求、挖掘一種祖國醫(yī)學(xué)中安全有效的痤瘡用藥。

    顛倒散出自于《醫(yī)宗金鑒·外科心法要訣》,由大黃粉及硫磺粉組成,組方比例為大黃∶硫磺=1∶1;驗(yàn)之臨床,療效確切,但筆者經(jīng)過多年觀察發(fā)現(xiàn)使用該藥后易出現(xiàn)接觸性皮炎,常表現(xiàn)為如面部灼熱、刺癢、紅斑水皰、滲出,干燥、緊繃、脫屑以及一過性色素沉著等不良反應(yīng),考慮與藥物某成分或比例有關(guān):由于硫磺有毒,對(duì)皮膚具有一定的刺激性;而通過適當(dāng)縮小硫磺的比例后,經(jīng)臨床初步觀察,不良反應(yīng)有減少趨勢(shì)。因此初步推測(cè),改變顛倒散的組方比例可能影響其臨床療效(包括不良反應(yīng))。這使顛倒散的拆方研究:探索一個(gè)療效最佳、同時(shí)不良反應(yīng)最小的組方比例顯得尤為必要。但鑒于臨床安全性和醫(yī)學(xué)倫理的考慮,我們利用兔痤瘡模型進(jìn)行了在體實(shí)驗(yàn)。

    實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:顛倒散原方以及改變顛倒散中大黃與硫磺的比例(大黃∶硫磺分別調(diào)整為1∶2;2∶1)干預(yù)兔耳粉刺模型后,粉刺數(shù)量均較模型對(duì)照組明顯減少。但提高硫磺、降低大黃在方中的比例后(大黃∶硫磺=1∶2),兔耳粉刺模型皮脂腺分泌量顯著減少,并低于顛倒原方組。然而,該比例在兔耳模型上更容易出現(xiàn)紅斑及表皮剝蝕。相反,降低硫磺、提高大黃比例(大黃∶硫磺=2∶1)組方的紅斑及表皮剝蝕發(fā)生率顯著低于高比例組(大黃∶硫磺=1∶2),其對(duì)皮膚的刺激反應(yīng)明顯減少,甚至缺如,并低于顛倒散原方組。

    結(jié)論:從該實(shí)驗(yàn)可以看出,在抗兔耳粉刺作用方面,改變顛倒散中大黃與硫磺的比例(大黃:硫磺分別調(diào)整為1∶2;2∶1)其療效與原方相當(dāng);在抑制皮脂腺分泌方面,原方與各改良比例組方均有抑制作用,因此推導(dǎo),顛倒散治療痤瘡的其中機(jī)理之一可能是通過抑制皮脂腺的分泌而達(dá)到治療作用。同時(shí)這可能是臨床應(yīng)用顛倒散后,面部常出現(xiàn)干燥、緊繃及脫屑的原因之一。而提高硫磺、降低大黃的比例后(大黃∶硫磺=1∶2),較原方抑制皮脂腺的分泌作用更強(qiáng),但同時(shí)皮膚不良反應(yīng)增加;相反,降低硫磺、提高大黃比例后不良反應(yīng)相應(yīng)降低。綜上所述,降低硫磺在顛倒散中的比例可減少對(duì)皮膚的不良反應(yīng),但不影響抗粉刺的作用。相反,增加硫磺的比例后可能增強(qiáng)皮抑制脂腺分泌的作用,但不良反應(yīng)增加。這一發(fā)現(xiàn)可能為顛倒散治療不同類型痤瘡時(shí),采用不同比例組方提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。但對(duì)該方中大黃與硫磺更多組方比例的作用、安全性以及作用機(jī)理的探索尚待進(jìn)一步研究。

    [1] 劉漢順.枇杷清肺飲加減聯(lián)合加味顛倒散治療痤瘡的臨床觀察[J].安徽醫(yī)藥,2012,16(1):108-109 .

    [2] 賴梅生.清肺愈痤方合復(fù)方顛倒散治療痤瘡150例療效觀察[J].新中醫(yī),2012,44(10):47-49.

    [3] 張懷亮.趙炳南顛倒散古方痤瘡、酒渣鼻和面部脂溢性皮炎傳承治療經(jīng)驗(yàn)介紹[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥,2012,23(8):2106-2108.

    [4] 劉文彬,梁 慶,王 輝,等.一種痤瘡復(fù)合動(dòng)物模型的建立[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào),2014,30(2):199.

    [5] Tan JK,Bhate K.A global perspective on the epidemiology of acne.[J].Br J Dermatol,2015,Jul;172 Suppl 1:3-12.

    [6] Moon SH,Roh HS,Kim YH,et al.Antibiotic resistance of microbial strains isolated from Korean acne patients[J].J Dermatol,2012,39(10):833-837.

    [7] Luk NM,Hui M,Lee HC,et al.Antibiotic-resistant Propioni bacterium acnes among acne patients in a regional skin centre in Hong Kong[J].Eur Acad Dermatol Venereol,2013,27(1):31-36.

    (收稿2015-06-11;修回2015-07-19)

    Effectiveness of different constituent ratios of Diandao powder for comedos and seborrhea of rabbit ear acne model

    Tang Ting Jia Min Wen Changhui et al

    Dermatology Department,First Affiliated Hospital to Guiyang College of Traditional Chinese Medicine(Guiyang 550002)

    Objective:To explore an appropriate constituent ratios of Diandao powder for acne,which has lower adverse side effects and preferable effectiveness simultaneously.Methods:After acne model of rabbit ear was been made,32 rabbits were divided into four groups,each of them included 8 ones respectively.Group A was treated by the external application of original Diandao powder,of which the constituent ratio of Dahuang and sulfur was 1:1.While group B was administrated by the modified constituent ratio which was 1:2 of Da-huang versus sulfur,And group C by 2:1.Once a day,two successive weeks.As a controlled model one,group D accepted nothing interfering.The sum of comedos and seborrhea ,as well as side adverse effects were observed during and after practiced the procedure.Results:After experiment,a prominent decline of sum of comedos was seen concurrently among group A,B and C,and a significant difference was found between the three groups and group D.The amount of sebum excretion in 24 hours has decreased in group A,B and C,after treated begin 1week and 2 weeks ,compared with group D.Meanwhile,group B had the lowest excretion and the most amount of erythema and exfoliation of epidermis synchronously than other groups statistically.Conclusion:Increasing the constituent ratio of sulfur in Diandao powder(or decreasing the constituent ratio of Dahuang meantime)could decline the sebum excretion,but contribute to the side effects of cutaneo.On the contrary,decreasing the ratio of sulfur(or increasing the ratio of Dahuang meanwhile),can refrain side effects of skin,but not counteract the anti-acne effectiveness.

    Acne vulgaris/ traditional Chinese medicine therapy Animal experimentation Rabbits @Diandao powder

    *貴州省科技廳項(xiàng)目(20132062)

    尋常痤瘡/中醫(yī)藥療法 動(dòng)物實(shí)驗(yàn) 兔 @顛倒散

    R275

    A

    10.3969/j.issn.1000-7369.2015.11.046

    貴陽市科技局項(xiàng)目(2012103)

    ?天津中醫(yī)藥大學(xué)研究生院2014級(jí)博士研究生(天津300193)

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