香砂六君子湯治療脾虛腹瀉型腸易激綜合征的藥效學(xué)研究*

祝 捷 王 平 彭 騰 賈 波 黎豫川 禹亞杰 尚寧寧

成都中醫(yī)藥大學(xué)(成都 610075)

香砂六君子湯治療脾虛腹瀉型腸易激綜合征的藥效學(xué)研究*

祝 捷 王 平 彭 騰△賈 波 黎豫川 禹亞杰 尚寧寧

成都中醫(yī)藥大學(xué)(成都 610075)

目的：觀察香砂六君子水煎液以及不同提取部位對(duì)脾虛腹瀉型腸易激綜合征的治療作用。方法：采用大黃瀉下法復(fù)制小鼠脾虛腹瀉模型，觀察受試藥物對(duì)小鼠排便和腸推進(jìn)率的影響;采用番瀉葉及膠帶束縛法復(fù)制大鼠脾虛泄瀉型腸易激綜合征模型，觀察受試藥物對(duì)大鼠腸道敏感性、腸推進(jìn)率及血清、結(jié)腸組織中5-羥色胺量的影響。結(jié)果：香砂六君子湯對(duì)脾虛腹瀉型腸易激綜合征有改善作用，水煎液及不同提取部位對(duì)改善脾虛腹瀉型腸易激綜合征癥狀的不同表現(xiàn)有不同的效果。結(jié)論：香砂六君子湯對(duì)脾虛腹瀉型腸易激綜合征有明顯的改善作用，其中香砂六君子湯乙酸乙酯部位、正丁醇部位主要通過(guò)改善腹瀉型腸易激綜合征大鼠腸道敏感性來(lái)發(fā)揮治療作用；水溶性部位、水煎液部位具有明顯的止瀉作用，主要通過(guò)改善腸道運(yùn)動(dòng)功能異常從而達(dá)到治療目的。

腸易激綜合征(Irritable Bowel Syndrome，IBS)是一種以平滑肌功能紊亂為主要表現(xiàn)的原發(fā)性全身性慢性疾病，常有腹痛、腹脹、腹瀉、便秘、腸鳴或腹瀉與便秘交替等癥狀，并伴有明顯的全身性神經(jīng)官能癥狀。IBS依據(jù)糞便性狀分為四個(gè)亞型：便秘型、腹瀉型、混合型和不定型,我國(guó)以腹瀉型較為多見(jiàn)[1]。IBS的患病率在亞太地區(qū)正在增加，特別是在發(fā)展中國(guó)家，目前報(bào)道的患病率北京為0.82%， 中國(guó)南方為5.7%，香港為6.6%，新加坡為8.6%，巴基斯坦為14%，臺(tái)灣為22.1%，中國(guó)的研究發(fā)現(xiàn)使用羅馬III標(biāo)準(zhǔn)診斷門診患者IBS的患病率為15.9%[2]。IBS發(fā)病機(jī)理至今尚不明了，目前研究認(rèn)為該病因多與精神因素、神經(jīng)內(nèi)分泌改變及腸道菌群失調(diào)等有關(guān)。

IBS屬于中醫(yī)“泄瀉”、“腹痛”、“郁證”等范疇[3]。該病的主要病位在肝脾，亦涉及腎。脾胃為氣機(jī)樞紐，寒熱虛實(shí)皆可致其氣機(jī)升降出入失調(diào)。IBS病程較長(zhǎng)，初期發(fā)病多實(shí)，久病多虛，多呈本虛標(biāo)實(shí)，虛實(shí)夾雜之特點(diǎn)，其中脾胃氣虛，濕阻氣滯是常見(jiàn)病機(jī)之一。不論是感受寒濕暑熱之邪,直中脾胃,還是飲食不節(jié),損傷脾胃,或是久病脾虛運(yùn)不健,最終均導(dǎo)致脾胃氣虛，氣機(jī)不暢，水濕停滯而呈脾虛氣滯濕阻之證，香砂六君子湯(《古今名醫(yī)方論》卷一)功能益氣健脾、燥濕行氣，是治此證之常用方[4]。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察香砂六君子湯對(duì)模型動(dòng)物胃腸功能的影響，為臨床應(yīng)用該方治療脾虛腹瀉型IBS提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法 1.1 材 料 1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:健康SD大鼠，SPF級(jí)，122只，雌性56只，雄性66只，體質(zhì)量200±20g，健康KM種小鼠，清潔級(jí)，350只，雌雄各半，體質(zhì)量20±2g，以上動(dòng)物均由成都達(dá)碩生物科技有限公司提供，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(川)2008-24。

1.1.2試劑與藥材:5-羥色胺(5-HT)ELISA試劑盒(美國(guó)R&D公司)；烏拉坦(德國(guó)進(jìn)口，廣州工業(yè)有限公司分裝)；0.9%生理鹽水(四川科倫藥業(yè)股份有限公司)；墨汁；活性炭；醋酸。香砂六君子湯由紅參、白術(shù)、茯苓、半夏、陳皮、炙甘草、砂仁、川木香共八味藥組成；臨床用法為水煎液口服，成用劑量為27g生藥/60kg體重/d；香砂六君子湯水煎液、水溶性部位、正丁醇部位、乙酸乙酯部位均由成都中醫(yī)藥大學(xué)中藥化學(xué)教研室提供。大黃、番瀉葉均購(gòu)于溫江華康大藥房。

1.1.3 儀器:一次性無(wú)菌導(dǎo)尿管(湛江市事達(dá)實(shí)業(yè)有限公司型號(hào):雙腔氣囊標(biāo)準(zhǔn)型, 規(guī)格：12Fr 5-10mL 批號(hào)：201305E1)；5mL,手動(dòng)均漿器；H2050R臺(tái)式冷凍離心機(jī)(湘儀離心機(jī)儀器有限公司)；DH3600A電熱恒溫培養(yǎng)箱(天津市通利信達(dá)儀器廠)；MK3酶標(biāo)儀(美國(guó)熱電)；MK2洗板機(jī)(芬蘭雷勃)；電子天平(北京賽多利斯有限公司)；KQ-700E型超聲波清洗機(jī)(昆山市超聲儀器有限公司)；微量移液器(熱電上海公司)。

1.1.4供試藥物制備:大黃水煎液的制備：稱取大黃飲片200g，加純凈水2000mL，浸泡30min，武火煮沸，文火煎煮30min，過(guò)濾，將濾液濃縮至200mL，即得大黃藥物濃度為1g/mL的大黃水煎液供試品。于4℃冰箱冷藏保存，給藥前于37℃溫育十分鐘后充分搖勻。番瀉葉水煎液的制備：稱取番瀉葉300g，加90℃左右純凈水1500mL，浸泡2h，武火煮沸，文火煎煮10min，過(guò)濾，將濾液濃縮至1000mL，即得藥物濃度為0.3g/mL的番瀉葉水煎液供試品。于4℃冰箱冷藏保存，給藥前于37℃溫育十分鐘后充分搖勻。

1.2 方 法 1.2.1脾虛腹瀉動(dòng)物模型:1.2.1.1實(shí)驗(yàn)分組及給藥方法:本研究參照前期實(shí)驗(yàn)采用大黃瀉下法復(fù)制小鼠脾虛腹瀉模型[5]。小鼠適應(yīng)性正常飼養(yǎng)2d，隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組及香砂六君子湯水煎液，水溶性部位，正丁醇部位和乙酸乙酯部位。除空白對(duì)照組外，灌胃給予濃度為1g /mL的大黃水煎液，給藥體積0.5mL/只，連續(xù)8d；空白對(duì)照組給予同體積蒸餾水。最后一次灌胃大黃水煎液后1h，記錄體重及稀便率。造模結(jié)束后第二天早上9點(diǎn)開(kāi)始，各組連續(xù)灌胃給藥7天，空白對(duì)照組與模型組給予同體積蒸餾水，本研究中小鼠給藥體積均為0.2mL/10g。

1.2.1.2標(biāo)本采集及處理:各組動(dòng)物給藥第6d，在給藥后1小時(shí)再次記錄稀便率，稀便率=(稀便次數(shù)/總便次數(shù))×100%。記錄完畢后禁食不禁水12h，最后一次給藥前記錄各組小鼠體重，最后一次給藥后30 min灌胃10%碳末(2%CMC-Na配制成混懸液，0.5mL/只)，20min后頸錐脫臼處死小鼠，迅速解剖取出腸道，用直尺記錄幽門至回盲部總長(zhǎng)度和墨汁在腸道中推進(jìn)的距離(幽門到墨汁推進(jìn)前端的距離)。

1.2.1.3指標(biāo)檢測(cè)方法:計(jì)算推進(jìn)率，推進(jìn)率=推進(jìn)距離/幽門至回盲部總長(zhǎng)度×100%。同時(shí)取出胸腺與脾臟，稱重，計(jì)算臟器系數(shù)，臟器系數(shù)=(臟器質(zhì)量/終末體質(zhì)量)×100%。

1.2.2 脾虛泄瀉型腸易激綜合征動(dòng)物模型:1.2.2.1實(shí)驗(yàn)分組及給藥方法: 本研究參照前期實(shí)驗(yàn)采用番瀉葉及膠帶束縛法復(fù)制大鼠脾虛泄瀉型腸易激綜合征模型[5]。健康大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、香砂六君子湯水煎液，水溶性部位，正丁醇部位和乙酸乙酯部位。分別記錄每只動(dòng)物體質(zhì)量，適應(yīng)性正常飼養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)，第1周、第2周灌胃番瀉葉水煎液(0.3g生藥/mL,20mL/kg)，灌服完后即用寬棉線束縛前肩、前上肢、胸部，限制前上肢搔抓頭面部，但不限制其活動(dòng)，造成一定的應(yīng)激刺激，束縛時(shí)間2 h/d；第3周：僅用寬棉線束縛前肩、前上肢、胸部，限制前上肢搔抓頭面部，但不限制其活動(dòng)，造成一定的應(yīng)激刺激，束縛時(shí)間2 h/d。從造模第三周開(kāi)始，解除束縛后即灌胃給予相應(yīng)藥物，正常對(duì)照組和模型組給予蒸餾水，連續(xù)7d，本研究中大鼠給藥體積為1mL/100g。

1.2.2.2標(biāo)本采集及處理:造模2周后，記錄各組動(dòng)物體重和腸道敏感性。重增長(zhǎng)率=(給藥后體重-造模后體重)/造模后體重×100%。腸道敏感性測(cè)定方法：測(cè)試前1d大鼠禁食不禁水24h，將導(dǎo)尿管沿大鼠肛門插入，深度約5cm，用棉線把導(dǎo)尿管和大鼠尾巴根部綁在一起，15min后待大鼠適應(yīng)環(huán)境，用2.5mL注射器逐漸向?qū)蚬軆?nèi)推注蒸餾水?dāng)U張腸道，分別記錄引起大鼠背部拱起所需推注蒸餾水的體積閾值。5min后對(duì)每一閾值都重復(fù)進(jìn)行測(cè)定，共測(cè)定3次，數(shù)據(jù)取平均值。最后一次給藥前，再按上述方法記錄每只動(dòng)物的體質(zhì)量和腸道敏感性。按1.2.1項(xiàng)下測(cè)推進(jìn)率。股動(dòng)脈血靜置30min，3000 rpm離心10 min，取血清100μL，-20 ℃冰箱保存待測(cè)5-HT；剖取結(jié)腸組織，4℃生理鹽水沖洗干凈，稱取0.5g，用生理鹽水制成10%勻漿，3000rpm離心10min，取上清100μL，-20℃冰箱保存待測(cè)5-HT。

1.2.2.3指標(biāo)檢測(cè)方法:血清及結(jié)腸組織勻漿中5-HT的測(cè)定均采用 ELISA法，嚴(yán)格按照試劑盒測(cè)定方法測(cè)定。

2 結(jié) 果 2.1 對(duì)大黃致小鼠脾虛腹瀉的健脾止瀉作用 2.1.1對(duì)小鼠體重的影響:造模前，各組動(dòng)物間體重?zé)o明顯差異；連續(xù)灌胃8d大黃水煎液，空白對(duì)照組小鼠體重呈正常增長(zhǎng)趨勢(shì)；與空白對(duì)照組比較，其余各組小鼠體重均增長(zhǎng)緩慢，甚至出現(xiàn)負(fù)增長(zhǎng)，造模結(jié)束后各組體重均低于正常對(duì)照組；給藥7天后，與模型組比較，各給藥組動(dòng)物體重增長(zhǎng)均無(wú)明顯差異。

2.1.2 對(duì)小鼠胸腺和脾腺指數(shù)的影響:大黃所致的小鼠脾虛腹瀉模型，自行恢復(fù)一周后，模型組胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)與空白對(duì)照組無(wú)明顯差異。給藥后，與模型組相比較，各藥物組對(duì)胸腺指數(shù)及脾臟指數(shù)均無(wú)明顯影響。

2.1.3 對(duì)小鼠稀便率及腸推進(jìn)的影響:造模后,與空白對(duì)照組比較，模型組小鼠稀便率明顯增加(P<0.01)，說(shuō)明采用1g/mL大黃水煎液連續(xù)灌胃8天制備小鼠脾虛腹瀉模型是成功的；給藥后，與模型組比較，D高劑量組、D中劑量組、C高劑量組能明顯降低小鼠稀便率(P<0.01)，其余各受試藥物組脾虛腹瀉小鼠稀便率無(wú)明顯影響；與造模后(給藥前)比較，給藥物組稀便率均有所降低，說(shuō)明停止給與大黃后小鼠腹瀉有自行恢復(fù)的趨勢(shì)。與空白對(duì)照組比較，模型組小鼠腸推進(jìn)距離變長(zhǎng)，推進(jìn)率明顯增加，可能是脾虛腹瀉所致；D高劑量組、D中劑量組均能明顯降低脾虛小鼠的腸推進(jìn)距離和推進(jìn)率(P<0.05)，改善腸道的運(yùn)動(dòng)功能。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 香砂六君子湯提取部位對(duì)小鼠健脾止瀉的影響(±s，n=10)

注：ABCD分別代表香砂六君子湯乙酸乙酯部位、正丁醇部位、水溶性部位、水煎液(下同)；與空白對(duì)照組比較,△P<0.05,▲P<0.01(下同)；與模型組比較,◇P<0.05,◆P<0.01(下同)；與本組造模后(給藥前)比較,□P<0.05,■P<0.01(下同)

2.2 對(duì)脾虛泄瀉型腸易激綜合征大鼠的影響

2.2.1 對(duì)大鼠體重的影響:造模前各組動(dòng)物間體重?zé)o明顯差異。造模2周后，對(duì)照組大鼠體重正常增長(zhǎng)，模型組及各給藥組大鼠體重均顯著下降。給藥1周后，與模型組比較，B高劑量組體重增長(zhǎng)率顯著增加；B 中劑量組體重增長(zhǎng)率有增加趨勢(shì)；與本組造模后(給藥前)比較，給藥后除D高劑量組、D中劑量組，各組體重均有所增加，D組體重呈負(fù)增長(zhǎng)。B能明顯促進(jìn)大鼠體重的恢復(fù)，A、C部位對(duì)大鼠體重?zé)o明顯影響，D部位大鼠體重有繼續(xù)減輕趨勢(shì)。

2.2.2對(duì)大鼠腸道敏感性及腸推進(jìn)變化的影響:造模前，各組動(dòng)物腸道敏感性無(wú)明顯差異。造模2周后，各組動(dòng)物腸道敏感性均高于空白組及本組造模前水平，但均無(wú)顯著性差異(P>0.05)。給藥后，與模型組比較，A高劑量組、A中劑量組、B中劑量組腸道敏感性體積閾值明顯增加，腸道敏感性降低(P<0.05)；與本組給藥前比較，A高劑量組、A中劑量組、B高劑量組、B中劑量組腸道敏感性體積閾值明顯增加，腸道敏感性降低(P<0.05)。其余各給藥組對(duì)腸道敏感性閾值無(wú)明顯影響。與空白對(duì)照組相比較，模型組大鼠腸推進(jìn)距離明顯變長(zhǎng)，推進(jìn)率明顯增加(P<0. 05)，可能是脾虛腹瀉所致，與大黃致小鼠脾虛腹瀉模型實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致；給藥后，與模型組相比，D 高劑量組、D 中劑量組腸推進(jìn)率明顯降低(P<0. 01)，其余各藥物組對(duì)腸推進(jìn)率均無(wú)明顯影響。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 香砂六君子湯提取部位對(duì)IBS大鼠腸道敏感性、腸推進(jìn)的影響(±s,n=8)

2.2.3對(duì)大鼠血清及結(jié)腸5-HT水平的影響:與空白對(duì)照組比較，模型組血清5-HT含量明顯升高(P>0.05)；給藥后，與模型組比較，D高劑量組血清5-HT含量明顯降低(P<0.05)，其余各給藥組血清5-HT含量均無(wú)明顯改變。與空白對(duì)照組比較，模型組結(jié)腸組織5-HT含量明顯升高(P<0.05)；給藥后，與模型組比較，各給藥組結(jié)腸組織5-HT含量均無(wú)明顯改變，但B給藥組有降低結(jié)腸組織5-HT的趨勢(shì)。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 香砂六君子湯對(duì)IBS大鼠血清及結(jié)腸組織5-HT水平的影響(±s,n=8)

3 討 論 香砂六君子湯為治脾胃氣虛，濕阻氣滯之IBS的常用方。研究表明，香砂六君子湯總體具有健脾止瀉的作用。對(duì)脾虛腹瀉型IBS小鼠的研究發(fā)現(xiàn)，水煎液高劑量與中劑量以及水溶性部位高劑量均能降低IBS小鼠的稀便率；水煎液高劑量與中劑量均能降低IBS小鼠的腸推進(jìn)距離和推進(jìn)率，具有一定的止瀉作用。對(duì)脾虛腹瀉型IBS大鼠的研究發(fā)現(xiàn)，正丁醇部位高劑量能使IBS大鼠體重增加，乙酸乙酯部位高劑量與中劑量以及正丁醇部位中劑量均可以使IBS大鼠的腸敏感性降低，水煎液高劑量與中劑量能使大鼠的腸推進(jìn)率降低，改善IBS大鼠的腸道功能異常。

5-HT是廣泛存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)和胃腸道的一種單胺類神經(jīng)遞質(zhì)，能夠在外周參與胃腸動(dòng)力調(diào)節(jié)，其在腸易激綜合征發(fā)病機(jī)制中的作用備受關(guān)注。本實(shí)驗(yàn)研究了風(fēng)芍六君子湯對(duì)IBS大鼠血清及結(jié)腸的5-HT水平的影響做了一定的研究。研究發(fā)現(xiàn)水煎液部位可以使血清5-HT含量明顯降低；正丁醇部位有降低結(jié)腸組織5-HT的趨勢(shì)。

綜上所述，香砂六君子湯可能通過(guò)止瀉，降低腸道敏感性和腸推進(jìn)率，降低血清及結(jié)腸中5-HT的水平等多個(gè)環(huán)節(jié)的作用發(fā)揮治療腸易激綜合征的作用。結(jié)合前期香砂六君子湯化學(xué)成分研究發(fā)現(xiàn)香砂六君子湯的化學(xué)成分主要有黃酮類、內(nèi)酯類、香豆素類等，黃酮類對(duì)消化系統(tǒng)具有一定的治療作用這可能是香砂六君子湯治療脾虛腹瀉型腸易激綜合征的物質(zhì)基礎(chǔ)。這對(duì)于明確香砂六君子湯的治療機(jī)制以及研發(fā)治療腸易激綜合征新型中藥具有重要意義。

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(收稿2015-01-11；修回2015-02-26)

Pharmacodynamics of Xiangsha Liujunzi decoction on spleen deficiency diarrhea type lrritable bowel syndrome

Chengdu University of Traditional Chinese Medicine

(Chengdu 610075) Zhu Jie Wang Ping Peng Teng et al

Objective :To observe the effect of Xiang Sha Liu Jun Zi decoction and its different extract on spleen deficiency diarrhea type irritable bowel syndrome.Methods:The rat model of spleen deficiency diarrhea was established by using rhubarb,and observe the effect of tested decoction that alvine pushing rate of mice and its defecation.Senna and belt bound was used to cope the rat model of spleen deficiency diarrhea type lrritable bowel syndrome,and explore bowel sensitivity,alvine pushing rate,the content of 5-HT in serum and colon tissue. Results:Xiang Sha Liu Jun Zi decoction and its extract may improve the symptoms of spleen deficiency diarrhea type Irritable bowel syndrome. Conclusions:The ethyl acetate extract and the n-butanol extract of Xiang Sha Liu Jun Zi decoction may regulate the bowel sensitivity.The water-soluble extract and decoction may anti diarrhea obviously.

Irritable bowel syndrome/ traditional Chinese medicine therapy Xiang Sha Liu Jun Zi Tang/therapeutic uses

*四川省教育廳重點(diǎn)課題(10ZA095)

腸易激綜合佂/中醫(yī)藥療法 香砂六君子湯/治療應(yīng)用

R574

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2015.05.051

成都市科技局科技攻關(guān)項(xiàng)目(12GGYB346SW-001)

成都中醫(yī)藥大學(xué)?；鹬攸c(diǎn)課題(ZRZD201101)

△通訊作者