不同濃度蜜炙紫菀水煎劑對(duì)大腸癌LOVO細(xì)胞增殖和周期的影響

楊映映 秦甜甜 錢(qián)樹(shù)樹(shù) 彭 林 劉莉嘉 白松棉 王如峰 蔣 燕 胡秀華

(北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京，100029)

不同濃度蜜炙紫菀水煎劑對(duì)大腸癌LOVO細(xì)胞增殖和周期的影響

楊映映 秦甜甜 錢(qián)樹(shù)樹(shù) 彭 林 劉莉嘉 白松棉 王如峰 蔣 燕 胡秀華

(北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京，100029)

目的：探討不同濃度蜜炙紫菀水煎劑對(duì)大腸癌LOVO細(xì)胞增殖、周期的影響。方法：光學(xué)顯微鏡下觀察蜜炙紫菀水煎劑對(duì)LOVO細(xì)胞形態(tài)的影響；利用MTT觀察藥物處理后對(duì)LOVO細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖情況的影響；采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)蜜炙紫菀水煎劑對(duì)大腸癌LOVO細(xì)胞增殖周期的影響。結(jié)果：光學(xué)顯微鏡和MTT結(jié)果發(fā)現(xiàn)，低濃度的蜜炙紫菀水煎劑(≤20 mg·mL-1)對(duì)大腸癌LOVO細(xì)胞的增殖具有明顯的促進(jìn)作用，增殖率可達(dá)到99.7%；光學(xué)顯微鏡下可見(jiàn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好，細(xì)胞死亡少。高濃度的蜜炙紫菀水煎劑(>20 mg·mL-1)對(duì)大腸癌LOVO細(xì)胞的增殖具有明顯的抑制作用，抑制率達(dá)到80.34%以上；光學(xué)顯微鏡下可見(jiàn)細(xì)胞的形態(tài)改變，細(xì)胞大量死亡。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，蜜炙紫菀水煎劑可以使大腸癌LOVO細(xì)胞周期各個(gè)時(shí)相(G1期、S期和G2期)的細(xì)胞所占百分?jǐn)?shù)發(fā)生改變。10 mg·mL-1和20 mg·mL-1的蜜炙紫菀水煎劑使S期中細(xì)胞所占的百分?jǐn)?shù)增加；30 mg·mL-1蜜炙紫菀水煎劑使S期細(xì)胞所占的百分?jǐn)?shù)明顯減少，G2期細(xì)胞百分?jǐn)?shù)明顯增加。結(jié)論：蜜炙紫菀水煎劑對(duì)大腸癌LOVO細(xì)胞增殖的作用是雙向的，低濃度(≤20 mg·mL-1)的蜜炙紫菀水煎劑具有明顯的促進(jìn)LOVO細(xì)胞增殖作用；高濃度(>20 mg·mL-1)的蜜炙紫菀水煎劑對(duì)大腸癌LOVO細(xì)胞的增殖具有明顯的抑制作用，且可能是通過(guò)G2期阻滯來(lái)抑制大腸癌LOVO細(xì)胞增殖的，這為大腸癌的臨床治療提供了新的思路。

大腸癌LOVO細(xì)胞；蜜炙紫菀水煎劑；細(xì)胞增殖；細(xì)胞周期

大腸癌包括結(jié)腸癌和直腸癌，是常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤之一，嚴(yán)重威脅著人類(lèi)的健康。目前，在全世界范圍內(nèi)大腸癌的發(fā)病率男女均處于惡性腫瘤第3位，其中西方發(fā)達(dá)國(guó)家大腸癌的發(fā)病率處于第2位。且隨著生活水平的提高，飲食結(jié)構(gòu)的變化，大腸癌的發(fā)病率呈上升的趨勢(shì)。手術(shù)治療作為大腸癌治療的首選方法，5年生存率僅在50%左右。近年來(lái)隨著吻合器的廣泛應(yīng)用及各種新式化療藥物的出現(xiàn)，國(guó)際上很多學(xué)者建議采用在手術(shù)的基礎(chǔ)上輔助以化療、放療、同步放化療、生物治療和中醫(yī)藥治療等在內(nèi)的一系列綜合治療手段[1]。紫菀為菊科植物，味苦、辛、甘，性微溫，歸肺經(jīng)。功效潤(rùn)肺、化痰、止咳，可用于咳嗽有痰諸證。在中醫(yī)學(xué)中將大腸癌分為氣滯血瘀、痰濁阻滯、濕熱蘊(yùn)毒等類(lèi)型，說(shuō)明大腸癌的發(fā)生與痰濁關(guān)系密切，紫菀或可通過(guò)其化痰功效對(duì)大腸癌的發(fā)生產(chǎn)生抑制作用?，F(xiàn)代研究[2-7]顯示，紫菀中的一些化學(xué)成分，如表木栓醇、環(huán)狀五肽(AstinA、B、C)、鹵代環(huán)狀五肽Asterin(2)、紫菀多糖、槲皮素、大黃素、微量元素(Ca、Mn、Se、Fe、Cu、Mn、Mo)均具有抗腫瘤活性。本實(shí)驗(yàn)基于中醫(yī)“肺與大腸相表里”的理論，依據(jù)紫菀的化痰功效及其現(xiàn)代研究，采用細(xì)胞培養(yǎng)、MTT法以及流式細(xì)胞術(shù)來(lái)探討入肺經(jīng)的中藥蜜炙紫菀對(duì)大腸癌LOVO細(xì)胞增殖和周期的影響，為深入研究蜜炙紫菀治療大腸癌提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 資料

1.1 藥品及試劑 胎牛血清(Gibco，美國(guó))，F(xiàn)-12K培養(yǎng)基(Gibco)，0.25%胰蛋白酶(Hyclone公司)，生理鹽水，碘化丙啶(PI，Sigma公司)，RNA酶(Sigma公司)，3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽噻唑藍(lán)(MTT，Sigma公司)，二甲基亞砜(DMSO，Sigma公司)。蜜炙紫菀(同仁堂)購(gòu)自北京中醫(yī)藥大學(xué)國(guó)醫(yī)堂門(mén)診部；LOVO細(xì)胞購(gòu)自北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)學(xué)院細(xì)胞中心。

1.2 儀器 倒置顯微鏡(OLYMPUS日本)，酶標(biāo)儀(Bio-Tek美國(guó))，流式細(xì)胞儀(BD美國(guó))，CO2培養(yǎng)箱(BINDER德國(guó))，96孔細(xì)胞培養(yǎng)板、細(xì)胞培養(yǎng)瓶(Corning公司)。

2 方法

2.1 藥物制備 將同仁堂生產(chǎn)的蜜炙紫菀用精密電子天平秤取60 g，按照常規(guī)中藥煎煮方法煎煮。待煎至約100 mL時(shí)將煎劑倒入150 mL的燒杯中，用培養(yǎng)皿蓋住燒杯口(此燒杯和培養(yǎng)皿均經(jīng)無(wú)離子水浸泡、高壓滅菌)，進(jìn)行濃縮，直至30 mL。然后將其轉(zhuǎn)移至超凈工作臺(tái)，轉(zhuǎn)移至無(wú)菌離心管進(jìn)行1 000 r/min離心，取上清液。取少許上清液加入培養(yǎng)基，置37 ℃，5% CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)以檢菌。24 h后觀察培養(yǎng)基，結(jié)果顯示無(wú)菌后，密閉保存上清液備用。制取的蜜炙紫菀水煎劑濃度為2 g·mL-1，作為原液。

2.2 細(xì)胞培養(yǎng)及光學(xué)顯微鏡下觀察 結(jié)腸癌LOVO細(xì)胞株由北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)學(xué)院細(xì)胞中心提供，用含10%胎牛血清的F-12K培養(yǎng)基，置37 ℃，5%CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的LOVO細(xì)胞以每孔1.3×105·mL-1接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，每孔100 μL，置37 ℃，5%CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24 h后換液，加入含不同質(zhì)量濃度蜜炙紫苑水煎劑的培養(yǎng)基(終濃度分別為5、10、20、40、50、60、70、80 mg·mL-1)，同時(shí)設(shè)置陰性對(duì)照孔，每個(gè)組設(shè)6個(gè)平行孔，繼培養(yǎng)48 h后，光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)和密度。

2.3 MTT法測(cè)定蜜炙紫菀水煎劑對(duì)LOVO細(xì)胞的增殖和抑制作用 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的LOVO細(xì)胞以每孔1.3×105·mL-1接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，每孔100 μL，置37 ℃，5%CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24 h后換液，加入含不同質(zhì)量濃度蜜炙紫苑水煎劑的培養(yǎng)基(終濃度分別為0.2、0.8、3.2、5、6.4、10、20、40、50、60、70、80 mg·mL-1)，同時(shí)設(shè)置陰性對(duì)照孔，每個(gè)組設(shè)6個(gè)平行孔，繼續(xù)培養(yǎng)48 h后每孔加入質(zhì)量濃度為5 g·mL-1的MTT溶液100 μL，繼續(xù)培養(yǎng)4 h，棄上清，每孔加入150 μL DMSO，搖床震蕩10 min，放入酶標(biāo)儀上測(cè)定570 nm處的光吸收值，計(jì)算細(xì)胞生長(zhǎng)增殖率和抑制率，細(xì)胞增殖率(%)=(實(shí)驗(yàn)組平均吸光度值-對(duì)照組平均吸光度值)/對(duì)照組平均吸光度值×100%；抑制率(%)=(1-實(shí)驗(yàn)組平均吸光度值/對(duì)照組平均吸光度值)×100%。

2.4 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞增殖周期 將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的LOVO細(xì)胞以2×105個(gè)·mL-1接種于25 cm2培養(yǎng)瓶中，待80%細(xì)胞匯合成片后，棄培養(yǎng)瓶中液體，實(shí)驗(yàn)組加入不同濃度的蜜炙紫菀水煎劑，終濃度分別為10、20、30 mg·mL-1，并設(shè)立對(duì)照組，置于37 ℃，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h后，收集細(xì)胞；用冷生理鹽水洗滌細(xì)胞(1 000 r/min，5 min)，棄上清液，加入4 ℃預(yù)冷的75%乙醇，于4 ℃固定過(guò)夜。取固定好的細(xì)胞，用4 ℃生理鹽水洗兩次，分別加入50 μg·mL-1的PI和50 μg·mL-1的RNA酶1∶1混合液1 mL，避光10 min后上機(jī)檢測(cè)分析細(xì)胞的增殖周期。

3 結(jié)果

3.1 光學(xué)顯微鏡下不同濃度的蜜炙紫菀水煎劑對(duì)LOVO細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)的影響 實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖1所示，對(duì)照組LOVO細(xì)胞大小均勻，形態(tài)完好，細(xì)胞膜舒展，未見(jiàn)細(xì)胞核固縮，死亡細(xì)胞較少，細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好；不同質(zhì)量濃度的蜜炙紫菀水煎劑處理LOVO細(xì)胞48 h后，LOVO細(xì)胞的形態(tài)與對(duì)照組相比，5 mg·mL-1、10 mg·mL-1、20 mg·mL-1蜜炙紫菀水煎劑組細(xì)胞大小均勻，密度較大，形態(tài)完好，細(xì)胞膜舒展，生長(zhǎng)狀態(tài)良好；其他質(zhì)量濃度處理組(40 mg·mL-1、50 mg·mL-1、60 mg·mL-1、70 mg·mL-1、80 mg·mL-1)發(fā)現(xiàn)LOVO細(xì)胞有不同程度的細(xì)胞形態(tài)改變，細(xì)胞中空泡增加，細(xì)胞體積變小，細(xì)胞間隙變大，細(xì)胞變圓透亮，細(xì)胞膜皺縮，可見(jiàn)不同程度的細(xì)胞脫落，同時(shí)發(fā)現(xiàn)隨著蜜炙紫菀水煎劑的質(zhì)量濃度的增高，LOVO細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)越差，細(xì)胞死亡越多。

圖1 不同質(zhì)量濃度紫菀水煎劑作用大腸癌LOVO細(xì)胞48 h后對(duì)其形態(tài)的影響

3.2 低濃度蜜炙紫菀水煎劑對(duì)大腸癌LOVO細(xì)胞的生長(zhǎng)具有促進(jìn)作用 分別用不同濃度的蜜炙紫菀水煎劑處理細(xì)胞(終濃度分別為0.2 mg·mL-1、0.8 mg·mL-1、3.2 mg·mL-1、5 mg·mL-1、6.4 mg·mL-1、10 mg·mL-1、20 mg·mL-1)，同時(shí)設(shè)立對(duì)照組。MTT結(jié)果如表1所示，與對(duì)照組相比，在質(zhì)量濃度為0.2～10 mg·mL-1之間的蜜炙紫菀水煎劑處理細(xì)胞48 h后，發(fā)現(xiàn)對(duì)LOVO細(xì)胞的增殖具有明顯的促進(jìn)作用，且隨著質(zhì)量濃度的增加，促進(jìn)增殖的能力越強(qiáng)，增值率分別是5.45%，10.82%，19.40%，23.96%，40.88%，99.70%，在10 mg·mL-1時(shí)增值率達(dá)到最高99.70%，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示P<0.01，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。蜜炙紫菀水煎劑濃度達(dá)到20 mg·mL-1時(shí)增值率由10 mg·mL-1的99.70%降低到36.56%，但和對(duì)照組相比P<0.01，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。MTT結(jié)果和我們?cè)诘怪蔑@微鏡下觀察到的細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)相符。

表1 MTT測(cè)定蜜炙紫菀水煎劑對(duì)大腸癌LOVO細(xì)胞的增殖的影響

注：與空白對(duì)照組相比，*P<0.05；**P<0.01。

3.3 高濃度蜜炙紫菀水煎劑對(duì)LOVO細(xì)胞增殖的影響 如3.2結(jié)果中表1所示，與對(duì)照組相比，在質(zhì)量濃度20 mg·mL-1之前，蜜炙紫菀水煎劑對(duì)LOVO的增殖有明顯的促進(jìn)作用，并且在10 mg·mL-1時(shí)達(dá)到峰值。然后利用終濃度分別為40 mg·mL-1、50 mg·mL-1、60 mg·mL-1、70 mg·mL-1、80 mg·mL-1的蜜炙紫菀水煎劑處理細(xì)胞48 h后，MTT結(jié)果顯示如表2所示，與對(duì)照組相比，不同濃度實(shí)驗(yàn)組均對(duì)LOVO細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖有不同程度的抑制，抑制率分別為80.34%、89.50%、90.76%、90.80%、94.90%，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示P<0.01，與對(duì)照組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。MTT結(jié)果和我們?cè)诘怪蔑@微鏡下觀察到的細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)相符。

表2 MTT法測(cè)定蜜炙紫菀水煎劑對(duì)LOVO細(xì)胞的抑制情況

注：與空白對(duì)照組相比，*P<0.05；**P<0.01。

3.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)蜜炙紫菀水煎劑對(duì)LOVO細(xì)胞周期的影響 流式細(xì)胞術(shù)分析結(jié)果如表3與圖2所示，0、10、20、30 mg·mL-1蜜炙紫菀水煎劑作用48 h后，隨著質(zhì)量濃度的增加細(xì)胞增殖周期中的三個(gè)時(shí)期G1期、S期和G2期的細(xì)胞所占百分?jǐn)?shù)有不同的改變，其中G1期細(xì)胞所占的百分?jǐn)?shù)平均值分別為74.50%、73.84%、58.91%、56.12%，經(jīng)T檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。S期中細(xì)胞所占百分?jǐn)?shù)平均值分別為14.04%、23.86%、18.98%、11.82%。經(jīng)T檢驗(yàn)后發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；G2期中細(xì)胞所占百分?jǐn)?shù)平均值分別是10.46%、5.64%、23.78%、32.26%，與對(duì)照組相比P<0.01，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表3 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)LOVO細(xì)胞周期中各時(shí)相所占百分?jǐn)?shù)

注：與空白對(duì)照組相比，*P<0.05；**P<0.01。

圖2 不同質(zhì)量濃度的蜜炙紫菀水煎劑對(duì)LOVO細(xì)胞周期中各期細(xì)胞百分?jǐn)?shù)的影響

4 討論

研究發(fā)現(xiàn)多種祛濕化痰藥物可以用于肺癌的治療，其中，紫菀水提物能選擇性地抑制荷S180小鼠腫瘤生長(zhǎng)[8-9]；紫菀多糖能抑制胃癌細(xì)胞SGC-7901的增殖和生長(zhǎng)，誘導(dǎo)SCG-7901細(xì)胞株的凋亡[10]；Du L等[11]從紫菀提取物中分離純化得到一種多聚糖類(lèi)物質(zhì)，命名為ATP-2，該物質(zhì)能抑制神經(jīng)膠質(zhì)瘤C6的增殖。

本實(shí)驗(yàn)基于紫菀的化痰功效和抗腫瘤活性，探討蜜炙紫菀水煎劑對(duì)大腸癌LOVO細(xì)胞增殖的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明蜜炙紫菀水煎劑對(duì)大腸癌LOVO細(xì)胞增殖的作用是雙向的，低濃度的蜜炙紫菀水煎劑(≤20 mg·mL-1)對(duì)大腸癌LOVO細(xì)胞的增殖具有明顯的促進(jìn)作用，并在10 mg·mL-1時(shí)促進(jìn)作用最明顯，達(dá)到了99.70%；高濃度的蜜炙紫菀水煎劑(>20 mg·mL-1)對(duì)大腸癌LOVO細(xì)胞的增殖有明顯的抑制作用，在40 mg·mL-1時(shí)抑制率即可以達(dá)到80.34%，光學(xué)顯微鏡下可見(jiàn)細(xì)胞的形態(tài)改變，細(xì)胞大量死亡。50～80 mg·mL-1的蜜炙紫菀水煎劑和40 mg·mL-1蜜炙紫菀水煎劑對(duì)大腸癌細(xì)胞的抑制率差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。由此確定蜜炙紫菀水煎劑在質(zhì)量濃度20～40 mg·mL-1的范圍內(nèi)對(duì)大腸癌細(xì)胞具有細(xì)胞毒性，可以抑制大腸癌細(xì)胞的增殖。

從中草藥中提取的抗腫瘤藥物，其細(xì)胞毒性作用的主要機(jī)制是誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯和細(xì)胞凋亡?？鼓[瘤藥物可以通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯而抑制細(xì)胞增殖[12]。一個(gè)完整的細(xì)胞周期包括間期(G1期、S期和G2期)和分裂期(M期)，藥物可使細(xì)胞周期阻滯在不同時(shí)期，包括G1期阻滯、G1/S期阻滯、G2期阻滯和G2/M期阻滯等。研究發(fā)現(xiàn)抗腫瘤藥物常通過(guò)引起腫瘤細(xì)胞DNA損傷而導(dǎo)致細(xì)胞周期阻滯。有DNA損傷的細(xì)胞常被阻滯在G1期，防止受損的DNA進(jìn)入S期復(fù)制；或被阻滯在G2期，以防止在M期進(jìn)行異常分裂[13]。p53基因與G1期阻滯關(guān)系密切，缺失p53的腫瘤細(xì)胞不能啟動(dòng)G1期關(guān)卡，因而在抗腫瘤藥物使腫瘤細(xì)胞DNA受損后主要表現(xiàn)為G2期阻滯[14]。而在所有腫瘤細(xì)胞中，50%以上有p53基因功能缺陷[15]。這種情況下，G2期阻滯就成了抗腫瘤藥物使腫瘤細(xì)胞發(fā)生周期阻滯的重要途徑。本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)蜜炙紫菀水煎劑可以使大腸癌LOVO細(xì)胞周期各個(gè)時(shí)相(G1期、S期和G2期)的細(xì)胞所占百分?jǐn)?shù)發(fā)生改變。與對(duì)照組相比，10 mg·mL-1和20 mg·mL-1蜜炙紫菀水煎劑實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞周期中S期中細(xì)胞所占百分?jǐn)?shù)增加，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明細(xì)胞增殖處于旺盛時(shí)期，這與光學(xué)顯微鏡結(jié)果及MTT結(jié)果相一致。但是30 mg·mL-1蜜炙紫菀水煎劑實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞周期中S期細(xì)胞所占百分?jǐn)?shù)較對(duì)照組明顯減少，G2期細(xì)胞百分?jǐn)?shù)明顯增加，細(xì)胞增殖周期可能停滯在G2期，這表明蜜炙紫菀水煎劑對(duì)大腸癌LOVO細(xì)胞的增殖的抑制作用，可能是通過(guò)G2期阻滯來(lái)完成的，由此我們推斷G2期可能是蜜炙紫菀水煎劑作用于大腸癌LOVO細(xì)胞的治療靶點(diǎn)。蜜炙紫菀水煎劑導(dǎo)致大腸癌細(xì)胞G2期阻滯是否和p53的表達(dá)相關(guān)，是我們進(jìn)一步的研究重點(diǎn)。

由上可知，中藥紫菀在劑量范圍20～40 mg·mL-1內(nèi)對(duì)大腸癌LOVO細(xì)胞的增殖具有抑制作用。在低濃度時(shí)(≤20 mg·mL-1)對(duì)大腸癌具有明顯的促進(jìn)增殖作用，在高濃度(>20 mg·mL-1)時(shí)對(duì)抑制大腸癌LOVO細(xì)胞的增殖具有明顯的抑制作用，并且很可能將其阻滯在G2期。這為中醫(yī)臨床用藥劑量的選擇提供了生物學(xué)基礎(chǔ)，但其作用于大腸癌LOVO細(xì)胞的分子機(jī)制仍有待深入探討。

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(2015-01-16收稿 責(zé)任編輯：張文婷)

Effects of Honey-fried Radix Asteris Decoction(HFRAD) on Cell Proliferation and Cell Cycle of Colorectal Cancer LOVO Cells

Yang Yingying, Qin Tiantian，Qian Shushu, Peng Lin, Liu Lijia, Bai Songmian, Wang Rufeng, Jiang Yan, Hu Xiuhua

(BeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100029,China)

Objective:To explore the efficacy honey-fried Radix asteris decoction (HFRAD) of different concentration on cell cycle and proliferation of colorectal cancer LOVO cells.Methods:The changes of cellular morphology of LOVO cells treated with different concentration HFRAD were observed by optical microscopy. MTT colorimetric assay was applied to observe proliferation of LOVO cells; flow cytometry was used to analyze cell cycle of LOVO cells. Results:MTT results indicated that proliferation of LOVO cells treated with low concentration HFRAD(≤20mg·mL-1)has been obviously promoted, and the cell proliferation rate could be up to 99.7%. Moreover, normal cellular morphology and membrane structure were observed by optical microscopy. Compared with the low concentration groups, it was found that cell proliferation of LOVO cells treated with high concentration HFRAD (>20mg·mL-1) was obviously inhibited, the cell inhibitor rate can be up to above 80.34%. Optical microscopy results indicated that LOVO cells treated with high concentration HFRAD had lowest cell viability and the number of normal morphology cells can be significantly reduced. Flow cytometry results showed that the proportions of G1, S and G2 phase cells vary from different concentration HFARD and were significantly different from the control group. The proportion of S phase LOVO cells increased when treated with 10 and 20mg·mL-1HFRAD. However, it was also found that the proportion of S phase LOVO cells decreased and the proportion of G2 phase increased with 30mg·mL-1HFRAD. Conclusion:Different concentrate HFRAD has distinct efficacy on cell proliferation and cell cycle of LOVO cells. Cell proliferation of LOVO cells can be significantly promoted in concentration of HFRAD(≤20mg·mL-1). However, high concentration HFRAD(>20mg·mL-1) can inhibit cell proliferation. Moreover, inhibition of G2 phase might be due to high concentration HFRAD. Our findings can provide experimental evidences for HFRAD in clinical therapy of Colorectal cancer.

Colorectal cancer LOVO cells; Honey-fried Radix asteris decoction (HFRAD); Cell proliferation; Cell cycle

國(guó)家級(jí)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃課題——基于“肺與大腸相表里”理論研究紫菀及其提取物對(duì)大腸癌細(xì)胞增殖和遷移的影響(編號(hào)：20131002602)；國(guó)家自然基金面上項(xiàng)目(編號(hào)：81274044)

胡秀華(1975.05—)，女，博士后，副教授，研究方向：中西醫(yī)結(jié)合基礎(chǔ)，Tel：(010)64286976，E-mail：xiuhuahu@126.com；蔣燕，女，博士，教授，研究方向：中醫(yī)基礎(chǔ)理論

R285.5

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2015.11.032