中華絨螯蟹(Eriocheir sinensis)腸道和肝胰腺5-羥色胺(5-HT)和5-羥色胺受體2(5-HTR2)的定位研究*

楊筱珍 李 彤 李 萌 張佳鑫 黃 堅 徐澤文何 杰 楊志剛 王 春 成永旭

(上海海洋大學(xué) 省部共建水產(chǎn)種質(zhì)資源發(fā)掘與利用教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 上海 201306)

健康的消化道生理是動物正常生長繁殖的基礎(chǔ),因此, 對此方面的基礎(chǔ)研究被廣泛重視。在甲殼動物中, 此類研究多見對肝胰腺的研究, 而少見對其腸道功能的研究(Nunesaet al, 2014)。在PNAS雜志上發(fā)表的一篇論文曾提出蟹腸道中所含的激素與其蛻殼息息相關(guān), 同時, 甲殼動物后腸與腸道收縮也密切相關(guān)(Chunget al, 1999; Musolfet al, 2009)。5-羥色胺(5-hydroxytryptamine, 5-HT)是腸道中重要的神經(jīng)遞質(zhì)。哺乳動物的5-HT 95%來源于腸道, 主要是黏膜層的腸嗜鉻細(xì)胞。此外, 少數(shù)也來源于腸神經(jīng)元。研究已證實(shí), 5-HT是胃腸道收縮和腸道免疫過程中的重要遞質(zhì)(Liet al, 2011)。相似的消化道功能在水產(chǎn)動物消化道也已被發(fā)現(xiàn), 如在龍蝦和魚(Scophthalmus maximus)(Bermúdezet al, 2007; Musolfet al, 2009)。除此之外,分布于甲殼動物所有主要神經(jīng)系統(tǒng)的5-HT, 可刺激高血糖激素、色素分布激素、蛻殼抑制激素和性腺刺激激素的釋放, 進(jìn)而調(diào)節(jié)著甲殼動物生長、性腺發(fā)育、體色變化和行為(王瓊等, 2006; Tangvuthiponget al, 2006)。因此, 近年來有關(guān)5-HT在甲殼動物生理過程中作用的研究倍受關(guān)注。2014年國際知名期刊“Science”就發(fā)表了5-HT對龍蝦行為影響的研究成果(Fossatet al, 2014)。已有研究表明, 適量給予5-HT能促進(jìn)中華絨螯蟹(又稱河蟹,Eriocheir sinensis)和羅氏沼蝦(Macrobrachium rosenbergii)的生長, 但其機(jī)理并不明晰(Tangvuthiponget al, 2006; 梁攀等,2011)。5-HT在不同物種腸道中及同一個體不同腸段中的分布存在著明顯差異, 了解5-HT在消化道中的分布規(guī)律有助于闡明其在各種動物消化生理中的作用(黃輝洋等, 2001; 林樹根等, 2005; 闞延勝, 2007;Heet al, 2009; 陳洪洪等, 2010)。

甲殼動物肝胰腺作為消化腺與腸道和性腺發(fā)育及功能密切相關(guān), 其內(nèi)分布著雌激素受體、甲狀腺素和5-HT等活性物質(zhì)(楊麗麗等, 2011; Yanget al, 2012;Zaraet al, 2013; Iromoet al, 2014)。Kuo等(2009)發(fā)現(xiàn)在5-HT促進(jìn)羅氏沼蝦卵黃合成的過程中, 肝胰腺是提供卵黃蛋白原的主要來源, 此外, 肝胰腺中的胺氧化酶參與了5-HT的脫胺過程(Nicotraet al, 1994)。本課題組通過免疫組化方法已弄清了日本新糠蝦(Neomysis japonica)肝胰腺中5-HT的分布及其與性腺發(fā)育的關(guān)系和5-HT合成的關(guān)鍵酶色胺酸羥化酶(Tryptophan hydroxylase, TPH1)在中華絨螯蟹在腸道中的分布規(guī)律(楊麗麗等, 2011; 李萌等, 2014)。但目前有關(guān)5-HT在中華絨螯蟹腸道和肝胰腺中分布的研究尚未見有報道。

5-HT需要與其受體結(jié)合后才能發(fā)揮生理功能?，F(xiàn)已證明, 根據(jù)分子結(jié)構(gòu)、作用機(jī)制及不同功能,5-HT受體家族包括7個成員(5-HT1-5-HT7), 是神經(jīng)遞質(zhì)受體中最復(fù)雜的家族之一(Liet al, 2011)。其中六類是G-蛋白偶聯(lián)受體(5-HT1, 5-HT2, 5-HT4, 5-HT5,5-HT6, 5-HT7), 另外一類(5-HT3)是配體門控離子通道?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)5-HT2(5-HT受體2)參與了自閉癥兒童的腸道應(yīng)激綜合征中的腸收縮異常過程, 并介導(dǎo)著IP3激活 Ca2+信號途徑, 其在哺乳動的疼痛行為及免疫過程中的作用(Hagberget al, 1998; Nishiyama, 2005;Ahern, 2011; Abdelrahmanet al, 2015)也已被發(fā)現(xiàn)。目前, 有研究報道了5-HT受體2在龍蝦神經(jīng)肌肉接點(diǎn)的分布, 并可調(diào)節(jié)著其后腸腸道的收縮過程(Taboret al, 2002; Musolfet al, 2009), 本課題組現(xiàn)已從中華絨螯蟹腸道成功克隆到 5-HT受體 2片段(徐澤文等,2015)。此外, 甲殼動物腸道收縮直接與腸道排空時間有關(guān), 這也是餌料投喂頻率理論依據(jù)(Smithet al,2009)。

中華絨螯蟹的腸道主要分為三個部分, 它們分別為中腸、腸球和后腸, 此三個部分均具有較為獨(dú)特的組織結(jié)構(gòu)(李萌等, 2014)。本文利用免疫組織化學(xué)技術(shù)對5-HT和5-HT受體2在中華絨螯蟹腸道和肝胰腺進(jìn)行定位, 為進(jìn)一步研究此類物質(zhì)在甲殼動物消化生理中的作用奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

30只中華絨螯蟹, 購自上海市崇明島綠華中華絨螯蟹養(yǎng)殖基地, 體重為(82.12±10.35)g, 暫養(yǎng) 7d, 饑餓48h后取樣。測量各個體體長, 解剖并分離出腸道和肝胰腺, 以腸球?yàn)榻缇€將腸道分為中腸、腸球和后腸三個部分, 分別測量中腸長度、后腸長度和腸道全長(從中腸前端至后腸末端的長度)。新鮮中腸、腸球、后腸和肝胰腺樣品放入Bouin’s液中固定48h, 并采集成年兔小腸作為陽性對照組織, 梯度酒精脫水, 石蠟包埋, 常規(guī)切片厚度5—7μm, 40°C烘片機(jī)烘干備用。

1.2 免疫組織化學(xué)

將中腸、腸球、后腸和肝胰腺的石蠟切片經(jīng)梯度酒精脫蠟至水, 滴加 3% H2O2, 室溫孵育 20min, 以滅活內(nèi)源性過氧化物酶, PBS緩沖液(0.01mol/L, pH 7.2—7.6)沖洗 5min×3 次, 枸櫞酸鹽緩沖液(pH 6.0)進(jìn)行抗原熱修復(fù), 水浴加熱 94°C, 40min, PBS沖洗5min×3次, 滴加5% BSA封閉非特異性抗原, 室溫孵育 30min, 傾去血清, 滴加兔抗 5-HT(北京中山金橋有限公司)或5-HT受體2抗體(武漢博士德公司)(工作濃度 1︰50), 4°C過夜。次日, PBS沖洗 5min×3次, 滴加二抗, 37°C恒溫箱孵育80min, PBS沖洗5min×3次,DAB顯色, 自來水沖洗, 梯度酒精脫水, 二甲苯透明,中性樹脂封片。陽性對照片為成年兔子小腸切片。陰性對照用 PBS代替一抗, 其余步驟同上, Olympus-2顯微鏡觀察拍照。

1.3 蘇木精-伊紅染色(H.E染色)

石蠟切片經(jīng)梯度酒精脫蠟至水, 浸入蘇木精染色25min, 鹽酸酒精分色10s, 自來水流水沖洗30min進(jìn)行返藍(lán), 80%酒精5min, 90%酒精5min, 浸入伊紅染色1min, 經(jīng)梯度酒精脫水, 二甲苯透明, 中性樹脂封片, Olympus-2顯微鏡觀察拍照。

1.4 數(shù)據(jù)分析

用Spot軟件(Scion Corporation, USA), 對中華絨螯蟹每50×103μm2中腸和后腸面積中5-HT和5-HT受體2的陽性免疫細(xì)胞數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(n=4)。采用SPSSV11.5軟件的Independent-sample T test進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析, 實(shí)驗(yàn)結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差,P<0.05為差異顯著。采用Kolmogorov-Smirnov法對將進(jìn)行相關(guān)性分析的數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)分布檢驗(yàn), 當(dāng)滿足正態(tài)度分布時, 采用Pearson法相關(guān)性檢驗(yàn)進(jìn)行相關(guān)性分析, 最后在Excel上繪制相關(guān)圖表。

2 結(jié)果

2.1 中華絨螯蟹腸道長與體長相關(guān)性分析

對體長范圍為(5.4±0.21)cm的成年中華絨螯蟹進(jìn)行解剖后發(fā)現(xiàn): 其腸道主要包括中腸、腸球和后腸,此三部分全長約為(5.7±0.53)cm。腸道的長度與體長度接近, 略大于體長。對腸道長度與體長進(jìn)行相關(guān)性分析后發(fā)現(xiàn), 腸道長與體長呈正相關(guān), 并有極顯著相關(guān)性(P<0.01) (圖1)。中華絨螯蟹腸道解剖外觀如圖2所示。開口于中腸前端向頭端延伸, 有一對前盲囊。開口腸球向尾延伸, 有一根后盲囊。腸球位于中腸和后腸之間, 呈膨大的球狀, 后腸開口于腸球下方直至肛門處。中腸和后腸長度見表 1。其中, 后腸長度約為中腸的兩倍, 占全腸道比例為 62%±4%, 而中腸占全腸道的比例僅為29%±3.5%。

圖1 中華絨螯蟹腸道長與體長相關(guān)性分析Fig.1 The correlation of body length and intestine length of E. sinensis

圖2 中華絨螯蟹腸道組織解剖圖Fig.2 The anatomy of intestine tissue structure of E. sinensis

表1 中華絨螯蟹中腸和后腸長度及5-HT和5-HT受體2陽性細(xì)胞數(shù)Tab.1 The length of E. sinensis midgut and hindgut and the number of 5-HT and 5-HTR2 immunoreactive cells in midgut and hindgut

2.2 5-HT和5-HT受體2在中華絨螯蟹中腸、腸球和后腸組織中的分布

中華絨螯蟹的中腸、腸球和后腸組織結(jié)構(gòu)有明顯的差異(圖3a, b, c所示)。經(jīng)免疫組化染色后發(fā)現(xiàn)5-HT和5-HT受體2在中華絨螯蟹中腸, 腸球和后腸組織中均有分布, 免疫陽性物質(zhì)均呈棕褐色, 兩物質(zhì)在中腸和后腸組織中的分布特點(diǎn)較為一致。在中腸, 5-HT和5-HT受體2免疫陽性細(xì)胞主要分布黏膜上皮細(xì)胞間(圖3d和圖3g細(xì)箭頭所示)和肌層與外膜交界處(圖3d和圖3g粗箭頭所示), 陽性細(xì)胞為胞核著色; 在腸球組織中, 5-HT和5-HT受體2免疫活性細(xì)胞勻均分布在腸球外周發(fā)達(dá)結(jié)締組織中, 為胞核著色(圖3e和圖 3h“*”號所示), 在其內(nèi)側(cè)的中腸和后腸中, 分布規(guī)律同其在中腸和后腸的分布; 在后腸, 5-HT和 5-HT受體 2免疫陽性細(xì)胞主要分布在黏膜上皮細(xì)胞細(xì)胞間(圖3f和圖3i細(xì)箭頭所示)和黏膜下層與肌層(圖3i小框內(nèi)細(xì)箭頭所示)及肌層與外膜交界處(圖 3f和圖3i小框內(nèi)粗箭頭所示), 均為胞核著染, 在固有膜部分細(xì)胞胞核中也有分布(圖 3i“*”號所示)。成年兔子小腸陽性對照片呈現(xiàn)明顯的陽性反應(yīng), 陽性細(xì)胞主要分布在黏膜上皮間(圖3j細(xì)箭頭所示)和肌層間(圖3j和圖3k粗箭頭所示), 用PBS代替一抗均呈陰性反應(yīng)(圖3l所示)。對中華絨螯蟹中腸和后腸內(nèi)5-HT和5-HT受體 2陽性細(xì)胞進(jìn)行統(tǒng)計后發(fā)現(xiàn)兩物質(zhì)在中腸和后腸中的分布數(shù)量相似, 均約為 61—72個/50×103 μm2(表 1)。

圖3 中華絨螯蟹腸道和肝胰腺5-羥色胺(5-HT)和5-羥色胺受體2(5-HTR2)的定位Fig.3 The location of 5-HT and 5-HTR2-like immunoreactive cells in intestine and hepatopancreas of E. sinensis

2.3 5-HT和5-HT2A受體在中華絨螯蟹肝胰腺中的分布

中華絨螯蟹肝胰腺主要由四種細(xì)胞組成, 它們分別是胚細(xì)胞(E-cells, embryonic cells)、泡狀細(xì)胞(B-cells, blisterlike cells)、吸收細(xì)胞(R-cells, resorptive cells)和纖維細(xì)胞(F-cells, fibrillar cells) (圖3m所示)。5-HT和5-HT受體2免疫陽性物質(zhì)主要分布在這四類細(xì)胞的胞核, 在 F細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中也有陽性表達(dá)(圖3n和圖3o所示)。

3 討論

本研究發(fā)現(xiàn), 中華絨螯蟹腸道長與體長有明顯的正相關(guān), 且與體長長度相近。這與許多動物腸道盤繞于體內(nèi), 其長度遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于體長完全不同。本課題組前期已對中華絨螯蟹的腸道組織結(jié)構(gòu)進(jìn)行了詳盡的描述, 并發(fā)現(xiàn)后腸與中腸有明顯的組織結(jié)構(gòu)區(qū)別, 如黏膜表面有角質(zhì)層, 有明顯的固有膜和肌層, 有腸腺的分布等(李萌等, 2014)。本研究發(fā)現(xiàn)中華絨螯蟹的后腸大部分位于中華絨螯蟹腹臍內(nèi)更易于外環(huán)境接觸, 其占據(jù)了腸道的大部分, 約占腸道比例為60%。現(xiàn)已有研究發(fā)現(xiàn)蟹腸道所含的高血糖激素與蛻殼密切相關(guān), 5-HT參與了后腸的收縮調(diào)節(jié)(Chunget al,1999; Musolfet al, 2009)。McGaw等(2013)研究了食物的不同大小與動物個體的不同大小在甲殼動物不同腸道段的推進(jìn)差別(McGawet al, 2013)。綜上, 我們認(rèn)為對中華絨螯蟹消化生理的研究, 有必要對腸道分段進(jìn)行研究, 此外, 后腸生理功能的研究應(yīng)更加重視。

已有研究表明, 水體中適量的5-HT能夠促進(jìn)中華絨螯蟹仔蟹的生長, 因此, Tangvuthipong等曾建議,將5-HT作為羅氏沼蝦(Macrobrachium rosenbergii)幼體飼料添加成分, 以促進(jìn)其生長(Tangvuthiponget al,2006; 梁攀等, 2011), 而其作用機(jī)理尚不明晰。5-HT是調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動的一種重要介質(zhì), 在不同動物消化道組織中5-HT免疫活性細(xì)胞的分布情況差異較大, 如在鋸緣青蟹(Scylla serrata)主要分布于腸道的黏膜層和黏膜下層, 中腸多于后腸; 而在中國對蝦(Penaeus chinensis)和日本沼蝦(Macrobrachium nipponense), 主要分布于中腸和后腸的結(jié)締組織中, 且在中腸和后腸數(shù)量相近; 在大黃魚(Pseudosciaena crocea)和羅非魚(Tilapia mossamblca), 主要分布在黏膜上皮間, 少量分布于固有膜, 在大黃魚后腸較中腸多, 而在羅非魚中腸高于后腸; 在鯰魚(Ictalurus punctatus), 5-HT免疫活性細(xì)胞主要分布于腸道的黏膜上皮層和肌肉與外膜交界的肌肉層, 且在中腸的數(shù)量高于后腸(黃輝洋等, 2001; 林樹根等, 2005; 闞延勝, 2007; Heet al, 2009; 陳洪洪等, 2010)。本研究首次發(fā)現(xiàn) 5-HT活性細(xì)胞在中華絨螯蟹腸道中也有廣泛分布, 其在中腸和后腸的分布規(guī)律基本一致。5-HT陽性細(xì)胞主要分布在腸道的黏膜上皮層和外膜與肌層的交界處。這與在鯰魚(Ictalurus punctatus)中的報道相似(Heet al,2009)。中華絨螯蟹的中腸缺乏固有膜, 這也是中華絨螯蟹腸道的一個特點(diǎn), 本研究發(fā)現(xiàn)在中華絨螯蟹后腸固有膜和黏膜下層與肌肉層的交界處中也有5-HT陽性細(xì)胞的分布, 這與鋸緣青蟹(Scylla serrata)5-HT免疫活性物質(zhì)還分布于黏膜下層相同(黃輝洋等,2001)。但上述的文獻(xiàn)資料中均未提及5-HT陽性細(xì)胞與肌細(xì)細(xì)胞毗鄰的現(xiàn)象。5-HT參與了后腸肌細(xì)胞收縮,在龍蝦中已有報道(Musolfet al, 2009)。我們推測在肌肉層較發(fā)達(dá)的中華絨螯蟹后腸, 5-HT和5-HT受體2分布于黏膜下層與肌層及肌層與外膜交界處, 這樣分布的現(xiàn)象可能與5-HT參與腸道收縮有關(guān), 本課題近期對中華絨螯蟹腸道鋪片的研究也發(fā)現(xiàn)在中華絨螯蟹后腸黏膜下層中有大量內(nèi)分泌細(xì)胞分布, 通過電鏡觀察在固有膜和肌細(xì)胞間均有類似的內(nèi)分泌細(xì)胞分布(結(jié)果待發(fā)表)。外源給予5-HT能促進(jìn)甲殼動物生長是否與其能促進(jìn)腸道收縮, 進(jìn)而促進(jìn)攝食有關(guān), 還有待于進(jìn)一步證實(shí)。本課題組先前也已證實(shí)5-HT生物合成中的關(guān)鍵酶TPH1在中華絨螯蟹中腸和腸球黏膜上皮細(xì)胞胞核和后腸黏膜上皮細(xì)胞漿中有分布(李萌等, 2014)。綜合上述研究, 我們認(rèn)為中華絨螯蟹腸道中有大量5-HT的分布, 其分布位置主要在腸黏膜上皮層、腸固有膜、黏膜下層與肌肉層的交界處和外膜與肌層的交界處。

與魚類的肝胰腺不同, 中華絨螯蟹的肝胰腺主要由四種不同類型細(xì)胞組成, 各類型細(xì)胞功能也不同, 已有研究表明, 肝胰腺的B/R細(xì)胞有進(jìn)入腸道參與消化吸收的過程, 我們在實(shí)際解剖的過程中也常看到腸腔內(nèi)有類似于肝胰腺的組織出現(xiàn)(Smithet al,2009)。而F細(xì)胞能合成大量消化酶, 胰蛋白酶、糖酶、酯酶等, 還能儲藏大量的鈣, 其在甲殼動物蛻皮和饑餓等生理過程中扮演著重要角色(Nunesaet al, 2014)。除此之外, 肝胰腺還參與了甲殼動物的性腺發(fā)育的調(diào)控, 本課題組先前的研究已發(fā)現(xiàn)5-HT在日本新糠蝦(Neomysis japonica)不同卵巢發(fā)育期肝胰腺各類型細(xì)胞胞核中的分布(楊麗麗等, 2011; Zaraet al, 2013)。本研究也再次證明, 肝胰腺各類型細(xì)胞的胞核是5-HT分布的主要部位。而F細(xì)胞或其它類型肝胰腺細(xì)胞在中華絨螯蟹消化道生理或免疫中的作用, 還需要更深入的研究。

眾所周知, 5-HT功能的發(fā)揮, 需要與其相應(yīng)的受體結(jié)合。本研究發(fā)現(xiàn)5-HT和5-HT受體2在中華絨螯蟹腸道和肝胰腺組織中的分布規(guī)律一致, 表明中華絨螯蟹消化道5-HT發(fā)揮生理功能可能與5-HT受體2有關(guān)。已有研究發(fā)現(xiàn)5-HT受體2參與了腸道平滑肌收縮的過程, 并在顆粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞中有表達(dá), 而參與免疫過程(Ahern, 2011; Abdelrahmanet al,2015)。它與腸道的黏膜免疫密切相關(guān)。本課題組新近的研究已發(fā)現(xiàn)中華絨螯蟹腸道中有嗜酸性的肥大細(xì)胞分布(趙柳蘭等, 2014)。此外, 中華絨螯蟹存在著腸道免疫過程, 生物胺能夠影響中華絨螯蟹的免疫功能, 但有關(guān) 5-HT在腸道免疫中的作用還有待于進(jìn)一步探究(Zhaoet al, 2012)。

4 結(jié)論

本文首次對中華絨螯蟹腸道與體長相關(guān)性進(jìn)行分析, 并統(tǒng)計了中腸和后腸腸段所占比例。為進(jìn)一步分段研究腸道功能奠定理論基礎(chǔ)。本研究發(fā)現(xiàn)在中華絨螯蟹中腸、腸球、后腸和肝胰腺中均有 5-HT和5-HTR2的分布。結(jié)合前期研究已從腸道組織成功獲得5-HTR2核心片段。我們認(rèn)為5-HT參與了中華絨螯蟹腸道的生理過程。雖然, 5-HT和5-HTR2在中腸和后腸中定位與數(shù)量基本相似, 但由于后腸結(jié)構(gòu)的差異和解剖位置(大部分位于腹臍部), 我們還在后腸固有膜和發(fā)達(dá)肌層內(nèi)和外側(cè)有大量發(fā)現(xiàn)。因此, 今后對中華絨螯蟹消化道功能研究中, 應(yīng)更加關(guān)注后腸的生理功能, 如其在腸道收縮和免疫中的作用。有關(guān)中華絨螯蟹腸道收縮的研究在應(yīng)用方面可以通過獲得中華絨螯蟹腸道排空時間, 進(jìn)而指導(dǎo)中華絨螯蟹的科學(xué)投喂頻率。

王 瓊, 黃輝洋, 葉海輝等, 2006. 日本囊對蝦(Marsupenaeus japonicus)視神經(jīng)節(jié)、腦和胸神經(jīng)節(jié)5-羥色胺的定位研究.海洋與湖沼, 37(5): 412—416

李 萌, 楊筱珍, 成永旭等, 2014. 色氨酸羥化酶在中華絨螯蟹中腸、腸球和后腸組織中的分布和定位. 上海海洋大學(xué)學(xué)報, 23(2): 179—185

楊麗麗, 楊筱珍, 成永旭等, 2011. 日本新糠蝦卵巢和肝胰腺主要細(xì)胞內(nèi)5-HT的免疫組織化學(xué)定位. 水產(chǎn)學(xué)報, 35(2):208—213

陳洪洪, 朱聯(lián)九, 潘洪珍等, 2010. 中國對蝦和日本沼蝦胃腸道內(nèi)分泌細(xì)胞的鑒別與比較. 水生生物學(xué)報, 34(3): 642—646

林樹根, 王全溪, 王壽昆, 2005. 大黃魚消化道內(nèi)分泌細(xì)胞免疫組織化學(xué)的定位. 福建農(nóng)業(yè)學(xué)報, 20(4): 238—242

趙柳蘭, 楊筱珍, 成永旭等, 2014. 中華絨螯蟹腸道肥大細(xì)胞的組織化學(xué)研究. 中國組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志, 23(4):303—307

徐澤文, 楊筱珍, 黃 堅等, 2015. CODEHOP法設(shè)計引物克隆中華絨螯蟹5-ht1和5-ht2受體基因片段及序列分析. 生物學(xué)雜志, 32(1): 1—5

黃輝洋, 李少菁, 王桂忠等, 2001. 鋸緣青蟹消化系統(tǒng) 5-羥色胺免疫組織化學(xué)的研究. 廈門大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版),40(3): 789—792

梁 攀, 楊筱珍, 成永旭等, 2011. 水體中5-HT對仔蟹生長以及內(nèi)源 5-HT水平的影響. 復(fù)旦學(xué)報(自然科學(xué)版), 50(5):640—644, 652

闞延勝, 2007. 羅非魚消化道5- HT內(nèi)分泌細(xì)胞的免疫組織化學(xué)研究. 安徽農(nóng)學(xué)通報, 13(17): 27—28, 97

Abdelrahman H M, Sherief L M, Alghobashy A Aet al, 2015.Association of 5-HT2A receptor gene polymorphisms with gastrointestinal disorders in Egyptian children with autistic disorder. Research in Developmental Disabilities, 36:485—490

Ahern G P, 2011. 5-HT and the immune system. Current Opinion in Pharmacology, 11(1): 29—33

Bermúdez R, Vigliano F, Quiroga M Iet al, 2007.Immunohistochemical study on the neuroendocrine system of the digestive tract of turbot,Scophthalmus maximus(L.),infected byEnteromyxum scophthalmi(Myxozoa). Fish &Shellfish Immunology, 22(3): 252—263

Chung J S, Dircksen H, Webster S G, 1999. A remarkable,precisely timed release of hyperglycemic hormone from endocrine cells in the gut is associated with ecdysis in the crabCarcinus maenas, Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America,96(23): 13103—13107

Fossat P, Bacqué-Cazenave J, De Deurwaerdère P Det al, 2014.Anxiety-like behavior in crayfish is controlled by serotonin.Science, 344(6189): 1293—1297

Hagberg G B, Blomstrand F, Nilsson Met al, 1998. Stimulation of 5-HT2A receptors on astrocytes in primary culture opens voltage-independent Ca2+channels. Neurochemistry International, 32(2): 153—162

He M, Wang K Y, Zhang Y, 2009. Immunocytochemical identification and localization of diffuse neuroendocrine system (DNES) cells in gastrointestinal tract of channel Catfish (Ictalurus punctatus). Agricultural Sciences in China,8(2): 238—243

Iromo H, Zairin M, Suprayudi M Aet al, 2014. Thyroxine distribution in the hemolymph, hepatopancreas, ovary,sponge, and larvae of female mud crabs (Scylla serrata)during ovarian maturation. Journal of Crustacean Biology,34(6): 760—763 Kuo C M, Chen Y N, Fan H Fet al, 2009.Enhancement of vitellogenin synthesis by serotonin in the giant freshwater prawnMacrobrachium rosenbergii(de Man). Zoological Studies, 48(5): 597—606

Li Z S, Chalazonitis A, Huang Y Yet al, 2011. Essential roles of enteric neuronal serotonin in gastrointestinal motility and the development/survival of enteric dopaminergic neurons.The Journal of Neuroscience, 31(24): 8998—9009

McGaw I J, Curtis D L, 2013. Effect of meal size and body size on specific dynamic action and gastric processing in decapod crustaceans. Comparative Biochemistry and Physiology, Part A: Molecular & Integrative Physiolgy, 166(3): 414—425

Musolf B E, Spitzer N, Antonsen Bet al, 2009. Serotonergic modulation of crayfish hindgut. Biological Bulletin, 217(1):50—64

Nicotra A, Santangelo G, Senatori O, 1994. Serotonin and β-phenylethylamine deamination by semicarbazide-sensitive amine oxidase fromCallista chionehepatopancreas.Comparative Biochemistry and Physiology Part C:Pharmacology, Toxicology and Endocrinology, 107(1):143—147

Nishiyama T, 2005. Effects of a 5-HT2Areceptor antagonist,sarpogrelate on thermal or inflammatory pain. European Journal of Pharmacology, 516(1): 18—22

Nunesa E T, Bragaa A A, Camargo-Mathias M I, 2014.Histochemical study of the hepatopancreas in adult females of the pink-shrimpFarfantepenaeus brasiliensisLatreille,1817. Acta Histochemica, 116(1): 243—251

Smith G G, Hall M W, Salmon M, 2009. Use of microspheres,fresh and microbound diets to ascertain dietary path,component size, and digestive gland functioning in phyllosoma of the spiny lobsterPanulirus ornatus. New Zealand Journal of Marine and Freshwater Research, 43(1):205—215

Tabor J N, Cooper R L, 2002. Physiologically identified 5-HT2-like receptors at the crayfish neuromuscular junction.Brain Research, 932(1—2): 91—98

Tangvuthipong P, Damrongphol P, 2006. 5-Hydroxytryptamine enhances larval development of the giant freshwater prawn,Macrobrachium rosenbergii. Aquaculture, 252(2—4):567—572

Yang X Z, Zhao L L, Cheng Y Xet al, 2012. Immunolocalization of estrogen receptor α inNeomysis japonicaoocytes and follicle cells during ovarian development. Tissue and Cell,44(2): 95—100

Zara F J, Gaeta H H, Costa T Met al, 2013. The ovarian cycle histochemistry and its relationship with hepatopancreas weight in the blue crabCallinectes danae(Crustacea:Portunidae). Acta Zoologica, 94(2): 134—146

Zhao L L, Yang X Z, Cheng Y Xet al, 2012. Effects of histamine on survival and immune parameters of the Chinese mitten crab,Eriocheir sinensis. Journal of Shellfish Research, 31(3):827—834